Вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей икроликов-mehtabak,способ изготовлениявакцины и способ ee использования

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Соеетсиих

Сациалистичесинх

Республии (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 07.06.78 (21) 2618901/30-15 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 07.06.81. Бюллетень ¹ 21 (45) Дата опубликования описания 15.07.81 (51) М.кл.з А 61 К 39/00

С 12 N 1/14

С 12R 1/645

Государственный иемитет (53) УДК 615.371/372.

631 466 2 (088.8) ла делам изобретений

И QJKpbrrHH (72) Авторы

»о бр етен ия

А. Х. Саркисов и Л. И. Никифоров (71) Заявитель Всесоюзный ордена Ленина институт эксперименталь 4 .-

1 ":"- -, ветеринарии (54) ВАКЦИНА ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ

ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ТРИХОФИТИИ

ПУШНЪ|Х ЗВЕРЕЙ И КРОЛИКОВ

МЕНТАВАК, СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ

ВАКЦИНЫ И СПОСОБ ЕЕ ИСПОЛЪЗОВАНИЯ

Изобретение относится к средствам специфической профилактики и может найти широкое применение в ветеринарной практике для профилактики трихофитии пушных зверей и кроликов.

Дерматомикозы животных и среди них трихофития пушных зверей и кроликов широко распространены как в на шей, так и в других странах мира. Переболевание зверей трихофитией обесценивает товарные качества шкурковой продукции, срывает племенную работу и планы продажи >кивотных. Больные животные — постоянная угроза и источник зара>кения обслуживающего порсонала и членов их семей:

Средства специфической профилактики трихофитии пушных зверей и кроликов в отечественной и зарубе>кной литературе не описаны.

Предложенные впервые в мировой практике активные средства специфической профилактики трихофитии крупного рогатого скота — вакцины ТФ-130 и ЛТФ-1,30 (1 — 3) и трихофитии лошадей (4) не могут быть использованы при трихофитии пушных зверей и кроликов, вызванной

Trichophyton gypseum (Т. mentogrophytesi, т. к. у животных, иммунизированных ими, не создается иммунитет против данного вида возбудителя трихофитии. Известно, что возбудитель Trichophyton gypseum вызывает заболевание у многих видов животных, в т. ч. пушных зверей и кроликов, в отличие от видов Т. verrucosum, Т. equinum и T. gallinae, в основном выделяющихся от животных определенных видов и,птиц (см. табл. 1 по данным (1 — 4)).

Данные, полученные при исследова нии пушных зверей и кроликов, больных стригущим лишаем в 1963 — 1976 гг., также .показывают, что в 90 % случаев от больных трихофитией пушных зверей и кроликов выделяется Trichophyton gypseum.

Наблюдения и прямые опыты, проведенные на кроликах, серебристо-черных лисицах и песцах, показали, что животные, переболевшие трихофптпей, вызванной гипсовидным трихофитоном в результате естественного или экспериментального заражения, приобретают иммунитет, но при этом теряются товарные качества шкурок и остается очаг болезни. Это послужило предпосылкой для проведения дальнейших исследований по созданию вакцины против

25 трихофитии пушных зверей и кроликов.

Целью изобретения является изготовление высокоэффективной безвредной для человека и животных вакцины для специфической профилактики трпхофитии пушных

ЗО зверей и кроликов.

835446

Таблица !

Возбудители трихофитии, вызывающие заболевание у основных сельскохозяйственных, домашних животных, птиц и человека

I TricI!ophyton дуpsQum (!nentogгор!туtes) ! Trichophyton

uerrucosum

Человек, вилы животных, куриные

Trichophyton

equinunt

Trichophy(on

gal Iinae с1еловек

Крупный рогатый скот

Мелкий рогатый скот

Лошадь

Собака

Кошка

Серебристо-черпал лисица

Песец

01ицшилла

Кролик

Куриные

+

П р и гя е ч а и и е. + — человек, животные, заболевшие при заражении этими возбтдителями.

В результате длительной направленно проведенной работы был получен высокоиммуногенный штамм гриба Trichophyton

gypseUm 135/1963 с повышенными энергией роста, накоплением биомассы и спороношением, полезно измененными культурально-морфологическими свойствами, резким снижением вирулентных свойств для животных и человека при сохранении иммуногенной активности. Этот штамм был выделен и f963 г. от серебристо-черной лисицы, больной трихофитией, принадлежащей зверосовхозу «Сомовский» Воронежской области,,Полученный штамм зарегистрирован вколлекции культур д,ерматофитов во

Всесоюзном ордена Ленина институте экс.периментальной ветеринарии.

Предлагается вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей и кроликов, содержащая культуру гриба штамма Trichophyton

gypseLtm 135 1963 и защитную среду при концентрации мнкроконидий указанного штамма гриба 100 — 800 млн. на 1 лл защитной среды следующего состава, вес.

Сорбит или сахароза 10 — 40

Желатин 2,0 — 10,0

Вода Остальное.

Предлагается также способ изготовления такой вакцины, включающий приготовление питательной среды, выращивание культуры гриба, съем культуры, дозировку биомассы и лиофилизацию, отличающийся тем, что выращивание гриба проводят при

26 — 28 С в течение 15 — 30 суток.

Кроме того, предлагается способ использования этой вакцины, отличающийся тем, что вакцину вводят животным внутримышечно с внутренней стороны бедра в дозах 0,5 — IO л л на голову двукратно с интервалами между введениями в 7 — 10 дней.

Для получения живой сухой вакцины

5 против трихофитии пушных зверей и кроликов приготовляют две смеси компонентов, содержащие:

1) гомогенат живой культуры гриба иммуногенного штамма Т. mentogrophytes

135.,1963 в стерильной воде с содержанием в1,ил 200 800 млн. живых микроконидий;

2) защитную среду, включающую 10—

40% сорбита или сахарозы и 2 — 10% желатина, растворенных в 10 мл воды и простерилизованных.

Смесь первого и второго компонентов в соотношениях 0,5 — с1,0 к 0,5 — 1,0 после лиофильного высушивания представляет собой вакцину для специфической профилактики трихофитии пушных зверей и кроликов.

Процесс изготовления предлагаемой вакцины включает выполнение следующих операций:

25 а) приготовление питательной среды; б) засев матровых колб и выращивание гриба; в) приготовление среды высушивания; г) съем культуры с поверхности пита30 тельной среды; д),измельчение грибницы; е) соединение гомогената с защитноц средой; ж) дозированный розлив во флаконы;

35 з) лиофилизация материала; и) укупорка, этикетировка флаконов; к) контроль вакцины. а Для приготовления, питательной среды стерильное неохмеленное пивное сусло

835446 разводят водопроводной водой до содержания 7 — 8% углеводов по Баллингу, подщелачивают до рН 7,0 — 7,4 и растворяют, -добавляя при нагревании 2,5 — 3,0% микробиологического агар-агара, затем фильтруют и разллвают до 300 мл в матрасы.

Стерилизуют при 0,7 атм в течение 40 мин. б) Засеянные матрасы выдерживают в термостате при 26 — 28 С минимально 15, максимально 30, оптимально 2Π— 25 дней.

Эти колебания во многом зависят от использованного сусла, сезона года и др. в) В качестве среды высушивания применяют стерильные водные растворы 10—

40% сорбита или сахарозы и 2 — 10% пищевого желатина или понтона. Для приготовления этой среды в горячую дистиллированную воду добавляют необходимое количество желатина или пептона и после растворения сорбит или сахарозу фильтруют и устанавливают рН 7,0 — 7,4, Стерилизуют три дня подряд: первый день текучим паром 30 мин, второй и третий день

20 мин текучим паром, затем 40 мин при

0,7 атм. г) Съем культуры проводят в стерильных боксах, для чего специальным скребком снимают грибницу с поверхности сусло-агара и помещают в банки с крышками.

Грибную массу снимают, стараясь не захватывать поверхность питательной среды.

Сразу после съема грибницу измельчают. д) Размол грибной массы проводят в гомогенизаторах различных систем и коллаидных мельницах, обеспечивающих нужное измельчение и стерильность в работе.

Температура во время работы не должна превышать 30 С. Аппараты загружают из расчета (в конце измельчения): съем грибницы с пяти матрасов в 300 мл стерильной воды. е) Гомогенат соединяют с защитной средой в отношениях 1: 1, 0,5: 1 или 1: 0,5 в специальной бутыли, оборудованной воронкой и сифоном для стерильного розлива. ж) Бутыль со смесью устанавливают в шуттель-аппарат и тщательно перемешивают. Затем при периодическом помешивании разливают во флаконы по 50; 100 или

200 доз, что при концентрации микроконидий в вакцине 400 млн/мл составляет соответственно 12,5, 5 и 10 мл. з) Кассеты с флаконами под двухслойными марлевыми салфетками после розлива незамедлительно помещают в охлажденную до (— 40) — (— 50) С камеру холодильника для быстрого замораживания. Через

12 — 16 ч хорошо промороженные флаконы с вакциной быстро (не допуская оттаивания биопрепарата) перегружают в подготовленную и охлажденную камеру сублиматора (типов КС-30, ТГ-50 и др.), подключают датчики, закрывают камеру и включают вакуумные насосы. Спустя 1 — 3 ч

|при достижении показателей вакуума 8—

10 мВ включают нагрев полок до 30 — 40 С.

Нагрев поддерживают таким, чтобы в .продукте температура каждый час повышалась на 1 —,3 С, при температуре продукта

8 — 10 С нагрев снижают до 25 С и поддерживают до окончания сушки. Температура продукта не должна превышать 25 С.

Продолжительность сушки в аппарате

КС-30 при полной загрузке и разливе во флаконы по 10 мл (200 доз) составляет

90 — 96 ч. и) После завершения сушки флаконы закрывают резиновыми пробками, фольговыми колпачками и закатывают. к) Для проверки показателей качества препарата от каждой серии отбирают по 20 флаконов, 10 используют для испытания качества, другие 10 хранят в архиве. Вакцину контролируют на следующие показа20 тели: определяют внешний вид, наличие механических примесей, растворимость, остаточную влажность, чистоту в бактериальном отношении и в отношении плесени, содержание и жизнеспособность микрокони25 дий, безвредность и иммуногенная активность. Содержимое флаконов при внесении в них стерильной воды илп физраствора должно раствориться без остатка в течение

2 — 3 мин и не содержать механических

30 примесей (осколки стекла,и др.). Прп высевах на сусло-агар, агар Чапека, МПА, МПБ и Китт-Тароцци посевы должны быть чистыми и не давать роста посторонней микрофлоры. Остаточная влажность должна составлять не менее 1,0 и не более 3,5%.

Концентрация микроконидий в разведенной для употребления вакцине 10 — 20 млн/мл, жизнеспособность не менее 10 млн/мл.

Безвредность и иммуногенную активность

40 проверяют на кроликах. Пяти кроликам весом 2,5 — 3,0 кг внутримышечно в область бедра вводят по 1,0 мл вакцины, повторно через 7 дней в той же дозе в то же место.

Через 5 — 10 дней после второго введения

45 на месте инъекции на коже может образоваться поверхностная корочка диаметром до 5 —.10 мм. Спустя 30 — 40 дней 5 иммунизированных и 5 контрольных (не иммунизированных) кроликов подвергают экопериментальному заражению путем втирания в скарифицированный участок кожи гомогената вирулентной культуры гриба Trichophyton gypseum. Срок наблюдения ЗО—

35 дней. Из 5 иммунизированных кроликов

4 не должны заболеть трихофитией, не менее 4 контрольных должны проявить клинические признаки трихофитии, которые подтверждают результаты микроскопических исследований.

Пример конкретного выполнения вакцины и способа ее изготовления.

Для приготовления одной серии предлагаемой вакцины в количестве 300 тыс. доз производят засев 200 матрасов культурой

Trichophyton gypseum 135/1963. Через 20—

835446

Вакцина сохраняет иммуногенную активность и годна к применению не менее одного года при хранении при 4 — 8 С.

Вакцину применяют с профилактической и лечебной целью для иммунизации молодняка, взрослых лисиц, песцов и кроликов путем двукратного с интервалами в

7 — 10 дней внутримышечного введения с внутренней стороны бедра в следующих профилактических дозах, лгл:

Молодняк серебристо-черных лисиц, песцов возраста 1 — 4 мес. 1

Старше 4 мес. и взрослые 2

16 Кролики с 45 дней 1

С лечебной целью вакцину вводят по

ТоН же методике в удвоенных дозах.

На месте введения у животных наблюдается образование спустя 10 — 15 дней не20 большого (диаметром до 2 — «8 лгл) трихофитиеподобного пятна — специфическая реакция на введение, которая спонтанно проходит через 15 — 20 дней.

Иммунитет у привитых животных на 6 ступает через 20 дней после вакцинации.

Продолжительность иммунитета не менее двух лет.

В соогветствии с разрешениями Главных управлений ветеринарии МСХ СССР и

30 РСФСР было изготовлено 437 тыс. доз опытных серий вакцины, которая была испытана на 87,4 тыс. лисиц и песцов, 10,8 тыс, кроликов в пяти крупных зверосовхозах и двух кроликокомплексах, ста35 ционарно неблагополучных по трихофитии.

При этом установлено, что вакцина безвредна, не реактогенна, не оказывает отрицательного действия на воспроизводство, создает у 99,2 — 99,i8% животных напряжен40 ный иммунитет, что позволяет предохранить их от заболевания (см. табл. 2).

Таблн,га 2

Итоги испытания вакцины против трнхофитии пушных зверей в неблагополучных звероводческих хозяйствах (1976 — 1977 гг) Вакцнннровацо

Заболело всего голов

Ю

З

Ю .О

\» о с и х!

Впл животных

1 через месяц () ! всего, Название хозяйства в т. ч. . всего больных в первый месяц

or !

„Лулру" Эстонской ССр .Кретннгское" .1нтсвской ССР

„Сомовский" Воронежской обл. .Тобольский" Тюменско i обл

ОПХ НИИПЭК .Чосковс,:î i o

Лисица 1ессц ..1исица

Песец

Лисица

26898

100

23

З.э !

1 !

0,2, 99,8

08 1 992

96 9

37473

93; 3

18818

:1н с н,а

fl. сец

Лисица

4838

99,9

99,9

2, 8

0,1

0.1! 87487

196 20 | 02 998!

Всего:

ll0

| (Прнмеча:нге: В указанных хозяйствах в голы, предиестзук>гци заболева "0 с,т 10 до 40", животных.

25 дней матрасы с выросшей культурой тщательно просматривают и при малейшем подозрении на загрязнение выбраковывают.

Прпготавливают 4,5,г защитной среды и проверяют ее на чистоту. Проводят пробный размол съема культуры с 5 матрасов в 30 0 лг г стерильной воды и подсчет количества микроконидпй и определяют необходимое для размола количество матрасов с культурой с тем, чтобы содержание микрокониднй в гомогенате составляло

400 млн/лгл. Если содержание микрокониднй выше 400 млн/лгл, то количество матрасов уменьшают, если ниже, то увеличивают. Затем с матрасов снимают необходимое количество грибницы. Установлено, что с одного матраса минимально можно получить 1600, максимально 2400 и оптимально

2ООО доз вакцины (одна доза — 1 лг,г разведенной вакцины, содержащей 20 млн/лгл микроконидий). Таким образом, максимальное количество матрасов для приготовления одной серии вакцины в количестве

ЗОО тыс..доз 190, минимальное 125 и оптимальное 150. К гомогенату добавляют защитную среду, перемешивают и разливают во флаконы. При розливе по 10 ьгл (200 доз во флакон) количество составляет 900 шт., 5 лг г (100 доз) — 1800, 2,5 лгл (50 доз)—

3600 шт.

Возможен и другой метод нивелировки количества микроконидий в вакцине путем изменения соотношения гомогената с защитной средой.,При этом также определяют содержание микроконидий в гомогенате культуры и за счет уменьшения или увеличения точно рассчитанного количества защитной среды (но не более чем соотношения 0,5: 1 и 1: 0,5) достигают нужного соотношения. применению вакцины, трнхофнтней

835446

Формула изобретения

Составитель А. Макаров

Техред А. Камышникова Корректор И. Осиновская

Редактор 3. Бородкина аказ 779/620 Изд. № 397 Тираж 694 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред, «Патент»

Вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей и кроликов, отличающаяся тем, что содержит культуру гриба штамма Trichophyton gypseum 135/1963 и защитную среду при концентрации микроконидий указанного штамма гриба:100 — 800 млн на

1 л1л защитной среды следующего состава, вес. %.

Сорбит или сахароза 10 — 40

Желатин 2,0 — 10,0

Вода Остальное.

2. Способ изготовления вакцины, включающий приготовление питательной среды, выращивание культуры гриба, съем культуры, дозировку биомассы и лиофилизацию, отл и ч а ю щи и ся тем, что выращивание гриба проводят при 26 — 28 С в течение 15 — 30 суток.

3. Способ использования вакцины, о тл и ч а ю шийся тем, что вакцину вводят животным внутримышечно с внутренней стороны бедра в дозах 0,5 — 10 мл на голо5 ву двукратно с интервалами между введениями в 7 — 10 дней.

Примечание: Изобретение носит комплексный характер и его целесообразно защитить как состав, способ его изготовления

10 и способ, использования.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Авторское свидетельство СССР

15 372864, А 61 К 39/00, 1971

2. Патент Франции 2189022, С 12 К 5/00, 1974.

3. Авторское свидетельство СССР

268593, А 61 К 39/00, 1974.

4. Авторское свидетельство СССР

548947, А 61 К 39/00, 1976.