Способ определения стадий адапта-ционного синдрома у животных
щ 8523I3
ОЛИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Сока Советских
Социалистических
Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 01.12.77 (21) 2549814/30-15 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 07.08.81. Бюллетень № 29 (45) Дата опубликования описания 07.08.81 (51) М.К .
А 61В 10/00
G 01N 33/16
Государственный комитет (53) УДК 616-092 (088.8) по делам изобретений и открытий (72) Автор изобретения
О. М. Андреев
Иркутский государственный медицинский инс, титут (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТАДИЙ
АДАПТАЦИО Н НОГО СИ НДРОМА У )К И ВОТ НЫХ
Изобретение относится к области биологии, в частности к патологической физиологии, токсикологии, и может быть использовано для определения стадий адаптационного синдрома при стрессовых ситуациях у животных.
Известны экспериментальные способы определения стадий адаптационного синдрома по мор фо-физиологическим критериям состояния внутренних органов и систем 1О организма (1).
Сущность известных экспериментальных способов определения стадий адаптационного синдрома сводится к изучению на трупном материале следующих морфо-фи- 15 зиологических параметров состояния внутренних органов и систем. В стадии тревоги отмечают резкое расширение и переполнение кровью синусоиды между тяжами клеток пучковой зоны, в клетках пучковой зоны редуцируются липиды и аскорбиновая кислота, в цитоплазме клеток коркового вещества надпочечников отмечают накопление РНК, Стадия резистентности характеризуется увеличением объема коркового слоя надпочечников за счет гиперплазии железистых клеток.
В пучковой зоне надпочечников иакап. ливаются липиды, сначала во внутреннем 30 слое, а затем в центральных и периферических отделах. Пучковая зона вновь оказывается насыщенной липидами.
В цитоплазме клеток пучковой зоны возможно содержание липидов большее, чем до стресс-реакции.
В стадии истощения отмечают глубокие дистрофические изменения, которые приводят к появлению участков цитолиза в корковом веществе, которые являются результатом гиперфункции коры надпочечников, вызванной черезмерной стимуляцией АКТГ.
Определение вышеизложенных стадий адаптационного синдрома производят после воздействия на животных химического, биологического или других видов стресса, после чего через каждые 30 — 60 мин проводят забой животных и по появлению морфологических изменений судят о стадии стресс-реакции.
Наиболее близким к предлагаемому является способ определения стадий адаптационного синдрома, основанный на том, что экспериментальную группу животных подвергают стрессовому воздействию токсическим агентом и затем, после поочередного забоя животных путем морфологического изучения их органов, определяют стадии адаптационного синдрома f2) 852313
TBK, B стадии тревоги .В лимфоидных ор ганах отмечают уменьшение количества клеток, их пролиферацию, лизис клеток и их миграцию. В костном мозге наблюдают уменьшение количества зрелых гранулоцитов, увеличение количества лимфоидных органов, увеличение количества КОЕ, (колониеобразующих единиц), активизацию миело- или эритропоэза.
В стадии резистентности отмечают восстановление лимфоидных органов и переходящую гиперплазию костного мозга.
В стадии истощения наблюдают вторичную инволюцию лимфоидных органов и гиперплазию костного мозга.
Недостатком способа является невозможность определения в ходе эксперимента всех стадий адаптационного синдрома на одном животном. Для определения стадии тревоги, а также стадий резистентности и истощения необходимо проводить забой животных с целью изучения изменений его внутренних органов, по которым судят о наступлении какой-либо стадии адаптационного синдрома. Кроме того, способ является трудоемким, так как требуют анализа большого морфологического материала, а также дорогостоящим вследствие необходимости для проведения эксперимента большого количества животных.
Цель изобретения — повышение точности определения стадий адаптационного синдрома в ходе эксперимента на живых животных, ускорение процесса проведения эксперимента, а также снижение его стоимости.
Для этого в качестве токсического агента используют дихлорбутен, а при анализе патоморфологических изменений устанавливают динамику количества эозинофилов.
Динамику количества эозинофилов определяют через каждые 2 — 3 ч. При определении стадии адаптационного синдрома используют животных, у которых количество эозинофилов в 8 и 17 ч суток равно 220—
380 кл/мм крови.
На фиг. 1 и 2 изображены графики, поясняющие предлагаемый способ.
Пример 1. Для проведения эксперимента отбирают б животных — самок белых беспородных крыс весом 200 — 250 г, с числом эозинофилов в периферической крови в 8 и 17 ч, равным 220 — 380.
После отбора каждому животному вводят по 310 мг/кг дихлорбутена и затем через каждые 3 ч у каждого животного из хвостовой вены берут кровь и подсчитывают число эозинофилов в 1 мм крови в камере Горяева. После подсчета устанавливается динамика числа эозинофилов у этих животных (см. табл. 1). На основе усредненных данных табл. 1 для более наглядного и точного определения стадий адаптационного синдрома строят график (см. фиг. 1), на котором стадия тревоги соответ5 !
О
Зо
65 ствует периоду от начала первого падения эозинофилов в количестве более 50О/о от их общего числа до момента появления их первого максимального количества, Исследуют контрольную группу животных в количестве 9б шт., подобранных по тем же данным, что и первая группа.
Во всех случаях кровь для исследования берут из хвостовой вены. После отбора одновременно каждому из двух групп животных однократно вводят по 310 мг/кг дихлорбутена.
После этого через каждые 3 ч подсчитывают количество эозинофилов в периферической крови обеих групп животных.
При этом, после подсчета количества эозинофилов у контрольной группы животных, проводят забой по б животных через каждые 3 ч.
Из забитых животных извлекают надпочечники, взвешивают, определяют их объем и проводят морфологические и гистохимические исследования, а именно определяют величину зон надпочечников, их морфологию, количество аскорбиновой кислоты, РНК, количество липидов. Все исследования экспериментальной и контрольной групп животных проводят до совпадения колебаний количества эозинофилов в периферической крови с их суточным биоритMORI.
При анализе полученных данных по коррелятивной зависимости нарушения биоритма количества эозинофилов в периферической крови от морфологического и гистохимического состояния надпочечников этих животных при химическом стрессе, вызванном введением в организм хлоропрена и дихлорбутена, и литературных данных о состоянии надпочечников в различные стадии стресса, приходим к выводу, что стадии тревоги соответствует период между началом первого падения числа эозинофилов в количестве более чем на 50 /р от их общего числа и концом увеличения эозинофилов до первого максимального их числа в периферической крови. Этот период на графике (см. фиг. 1) расположен между точками 1 и 4, фазе же шока стадии тревоги соответствует период от начала падения числа эозинофилов до момента начала первого их максимального увеличения (период фазы шока расположен между точками 1 и 3), а фазе антишока соответствует период между началом первого максимального увеличения числа эозинофилов и его концом (до начала падения их числа после максимального увеличения). На графике период фазы антишока расположен между точками 3 и 4 (см. фиг. 1), Стадии резистентности соответствует период между началом падения числа эозинофилов после первого их максимального увеличения с последующими эозинопениями и эозинофилиями до момента совпаде-.
852313
Динамика количества эозинофилов в
1 мм крови у больных крыс, подвергнутых дихлорбутоновой интоксикации, приведена в табл. 1. При проведении морфологиче5 ских и гистохимических исследований состояния надпочечников установлено, что в стадии тревоги в надпочечниках отмечено резкое расширение и переполнение кровью синусоидов между тяжами пучковой зоны, 10 а в клетках пучковой зоны редуцируются липиды и аскорбиновая кислота. ния их числа с суточным биоритмом количества эозинофилов в периферической крови (на графике период фазы резистентности расположен между точками 4 и 5).
Стадии истощения соответствует период с момента полного исчезновения эозинофилов в периферической крови до начала их появления после введения,в организм хлоропрена. Этот период расположен на графике (см. фиг. 2) между точками 2 и 3.
Таблица 1
Количество эозинофилов в 1 ммз крови крыс за время, в часах интоксикации
Pfо крыс
36 39!
3 6 9
18
42
48
Динамика количества эозинофилов в 1 мм крови у крыс при хлорпреновой интоксикации приведена в табл. 2.
Таблица 2
Количество эозинофилов в 1 мма кр овл крыс за время, в часах интоксикации
¹ крыс
7 10
30
33 36
13
16
Морфометрия надпочечников крыс при в табл. 3. В цитоплазме клеток коркового дихлорбутеновой интоксикации приведена 15 вещества надпочечников накапливается
Таблица 3
Время, в часах интоксикации
Морфометрические характеристики
27
48
33+0,5)
100+5
Вес надпочечников, Г
1)тносительно объема надпочечников, %
% суданофобной зоны к,всему надпочечнику
Плотность липидов, мг %
Плотность аскорбиновой кислоты пучковой зоны, мг %
Количество рНК пучково" зоны,мг%
35+3,2
104+7
35,3-)- 0,6
144+6
39,5+0,30
227+11
37+0,56
161+8
30,3-1-2,6
101+2
61+2,3
59,6
59+4
60+2,5
63+3
59,0+2,5
31,08+0,77 20,35+-0,40
60,69+3,02 69,33+4,24
23, 17+ О, 47 23,45+0,46
47,14-, 2,56 26,9-)-2,00
32,1+0,77 31,00+-0,02
61,6+2,54 60+3,31
5,9+0,04 4,0+0,06
14,5+0,04 14,9+0,006
18,6+0,02 5,39+0 2
244
244
378
288
220
240
231
360
270
235
16
16
16
42
112
96
122
122
16
21
122
28
16
14
131
23
14
131
21
31
28
14
28
134
91
91
63
131
392
561
412
294
182
180
259
452
3!5
336
200
161
336
200
82
О
136
124
100
191
248
382
240
136
156
116
130
133
214
282
200
138
146
228
93
200
572
508
248
382
220
309
222
278
321
280
852313 ла во внутреннем слое пучковой зоны, а затем и в цитоплазме клеток центральных и периферических отделов.
Динамика изменения морфометрии над5 почечников крыс при хлорпреновой интоксикации приведена в табл, 4.
Таблица 4
Время, в часах интнксикации
Морфометрические характеристики
420
24
63
53
42
47
Вес надпочечников, г
24+ 0,22
48,3 + 0,63
14 0,18
11,7 0,43
20 0,09
-40+0,22
20 0,45
17 0,49
17 0,81
21 0,18
Плотность липидов, мг у, 32,3 0,77
22 0,59
30 0,54
59,3 + 0,49
Плотность аскорбиновой кислоты, мг %
Что касается колебания количества эозинофилов в стадии резистентности, то оно соответствует началу падения числа эозинофилов с первого максимального их чис- 10 ла с последующими эозинопениями и эозинофилиями до совпадения их числа с суточным биоритмом (см. табл. 3 и фиг. 1). Если повреждающее воздействие было не столь сильным, как при введении дихлорбутена в 15 дозе 310 мг/кг веса, то у животных возникает стадия резистентности, а в более поздний период второй стадии вид и функция их органов практически возвращается к норме. Но если действие повреждающего 20 агента более сильное, а именно такое, как у хлоропрена в дозе 410кг/кг, то возникает стадия истощения, которая характеризуется резким уменьшением коркового вещества начпочечников, пучковой зоны, а также ве- 25 са надпочечников. В корковом веществе отмечаются глубокие дистрофические изменения с появлением участков цитолиза. В пучковой зоне резко уменьшается количество липидов, аскорбиновой кислоты (см. 30 табл. 4 и фиг. 2). В крови отмечают полное исчезновение эозинофилов.
По табл. 4 время 0 — 27 соответствует стадии тревоги, причем фазе шока соответствует время 0 — 24, а фазе антишока — 35
24 — 27, Стадии резистентности по табл. 3 соответствует время с 27 по 48, стадии же истощения — с 4 по 24.
Приведенные примеры экспериментов на 40 группах опытных и контрольных животных
РНК, что свидетельствует о стадии тревоги при проведении стресс-реакции. О стадии резистентности свидетельствуют следующие морфологические показатели надпочечников: увеличивается их вес, объем коркового слоя, накапливаются липиды сначаподтверждают, что указанные пределы изменений числа эозинофилов в периферической крови животных являются достоверными для быстрого и точного определения всех стадий адаптационного синдрома.
Формула изобретения
1. Способ определения стадий адаптационного синдрома у животных, преимущественно крыс, включающий введение в организм токсического агента и последующий анализ патоморфологических изменений, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения стадий адаптационного синдрома, в качестве токсического агента используют дихлорбутен, а при анализе патоморфологических изменений устанавливают динамику количества эозинофилов.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что динамику количества эозинофилов определяют через каждые 2 — 3 ч, 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для определения стадий адаптационного синдрома используют животных, у которых количество эозинофилов в 8 и
17 ч суток равно 220 †3 кл/мма крови.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Войткевич А. А. Современные вопросы эндокринологии. М., 1963, с. 240.
2. Горизонтов П. Д. Общая характеристика и значение реакций стресса. Вестник
АМН СССР, 1975, № 8, с. 81 — 83.
Составитель А. Макаров
Редактор Т. Колодцева Техред А. Камышникова
Корректор О. Тюрина
Заказ 1563!2 Изд. № 464 Тираж 694 Подписное
НПО <Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
