Способ определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях

 

Севз Сеаетеких

Сециалиетичаеиих

Реепублим

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВтОВСкОМ СвиДитильств он858783 (б1) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 160379 (2! ) 2737846/28-13 с присоединением заявки ¹â€” (23) ПриоритетОпубликовано 300ц81. Бюллетень Мо 32 (51)М. Кл.

А 61 В 10/00

G 01 N 33/48

Государствеииый комитет

СССР по иелам изобретений и открытий (53) УДК612. 822.. 2 (088. 8) Дата опубликования описания 300881 (54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЦЕТИЛХОЛИНОПОДОБНЫХ

ВЕЩЕСТВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ТКАНЯХ

Изобретение относится к медицинским и биологическим исследованиям и может быть использовано при определе нии содержания в различных биологических тканях ацетилхолина и его гомологов, а также в клинической диагностической практике, ветеринарии и зоотехнике, при определении холинергической активности материала биопсии.

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях, основанный на свойствах этих веществ вызывать сократительную реакцию изолированных мышечных тестпрепаратов, обладающих чувствителсвностью к ацетилхолину и его гомолоЕ1)

Регистрируют величину сокращения 2() мышечного препарата при воздействии . ацетилхолиноподобных веществ. Один конец изолированного мышечного тестпрепарата жестко закрепляют, а другой соединяют с подвижной регистриру- 25 ющей системой. При таком способе регистрации ответной реакции чувствительность способа составляет величину порядка 10 г/мл ацетилхолиново» го эквивалента. 3

Однако низкая стабильность ответных реакций тест-препарата, обусловленная частыми спонтанными сокращениями его, а также низкая чувствительность данного параметра реакции не позволяют.проводить определение ацетилхолиноподобных веществ, в частности, в микронавесках биологических тканей, поскольку для извлечения (экстракции) достаточного для биологического тестирования их количества необходимо переработать до 30 r ткани. Таким образом, способ не имеет высокой точности.

Цель изобретения — повышение точности способа, что предопределяет возможность количественного анализа ацетилхолиноподобных веществ в микронавесках биологических тканей.

Поставленная цель достигается тем, что ацетилхолиноподобные вещества экстрагируют из биологической ткани физиологическим раствором Рингера рН 3,9-4,1, а мышечный препарат перед определением концентрации веществ в экстракте растягивают до предельного состояния (полного расслабления).

Способ осуществляется следующим образом.

858783

Формула изобретения

Составитель Е. Коренева

Техред З.Фанта Корректор У. Пономаренко

Редактор Н. Кешеля

Заказ 7392/10 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1 мг биологической ткани помещают, в стеклянный капилляр объемом 0,1 мп, куда вносят 0,05 мл физиологического раствора Рингера, подкисленного до рН 4 однонормальной соляной кислотой. Капилляр эапаивают в пламени спиртовки и погружают на 10 мин в кипящую воду для экстракции ацетилхолиноподобных веществ. По истечении времени экстракции капилляр с содержащимся в нем экстрактом извлекают из бани и охлаждают до комнатной температуры. Определение концентрации веществ производят обычным образом, т.е. исследуемый экстракт наносят на подготовленный препарат мышцы, а концентрацию цетилхолиноподобных веществ определяют по характеристикам вызванного сокращения мышцы, сравнивая со стандартной калибровочной кривой. При этом как определение, так и построение калибровочной кривой производят на предельно растянутом препарате мышцы.

Использование предлагаемого способа определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях существенно улучшает точность и воспроизводимость результатов, что повышает их достоверность, с одновременным увеличением чувствительности способа, которая делает возможным определение ацетилхолиноподобных веществ в микроколичествах биологических тканей.

Способ определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях путем их экстракции физиологическим раствором и определения концентрации по активности сокращения препарата мышцы, о т л и ч а ю— шийся тем, что, r. целью повыше15 ния точности способа, экстракцию ведут при рН 3,90-4,10, а препарат мыацы перед определением концентрации веществ растягивают до предельного состояния.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ивченко Г.N. К методике определения ацетилхолина. Морфологические и физиологические основы регуляции и восстановления функций организма. (Труды научи. конф. 2-го МОЛГМИ).М., 1970, с. 48-49.