Производные дезокситионуклеотидов,как мономеры для синтеза дезоксиполинуклеотидов, и способ их получения

 

I

B. Ï.Êóìàðåâ, В. С. Богачев и Л. В Баранова

1 ...,...,;«) I (72) Авторы изобретения

Институт цитологии и генетики Сибирскот.

АН СССР (71) Заявитель (54) ПРОИЗВОДНЫЕ ДЕЗОКСИТИОНУКЛЕОТИДОВ

КЛК ИОНОИЕРЫ ДЛЯ СИНТЕЗА ДЕЗОКСИПОЛИН. КЛЕОТИДОВ

И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

R,ОСИ< В

СНф. о р=о

RQ

Изобретение относится к получению новых производных дезокситионуклеотидов общей формулы где  †остат тимина, N --анизоилцитозина, М -бензоиладенина и N -изобу"

d тирилгуанина, 8 †â, n n-диметокситритил;

Р2=Н, 2-цианзтил, и к способу их получения.

Производные дезокситионуклео1идов могут быть использованы в качестве мономеров для ступенчатого синтеза дезоксиполинуклеотидов триэфирным методом.

Иономеры, используемые в триэфирном методе синтеза, должны обладать следующими необходимыми свойствами: наличие такой защитной группы на межнуклеотидном фосфате дезоксинуклеотида, снятие которой происходило бы полностью, избирательно и в мягких условиях (без повреждения межнуклеотидных связей); кроме того, защитную группу на фосфате выбирают так, чтобы обеспечить максимальную . растворимость производных дезоксинуклеотидов в органических растворителях, что дает возможнсать эффективного использования .их по назначению, т.е. для синтеза полидезоксинуклеотидов, выделение которых в этом случае проводят жидкостной хроматографией на силикагеле.

Известен -О-,п-монометокси-три-тилтимидин-3-S-фенилтиофосФат форму" пы

92964

О

II

СИ gg

С ОСН2 М се о о

/ который используют в триэфирном методе синтеза ди- и тритимидиловых кислот, для которого в качестве защитной группы межнуклеотидного фосфата взята тиофенильная группа. Тиофениль ная защитная группа удовлетворяет указанным требованиям. Она обладает достаточными электроноакцепторными свойствами, в силу чего ее отщепление от межнуклеотидного фосфата проводят в мягких условиях (0,1н. NaOH

Е комн., 15 мин), и обусловливает . Э хорошую растворимость в хлороформе (1,3, Недостатком производного,а является то, что при использовании его в качестве нуклеотидного компонента для синтеза дитимидилата последний получается с недостаточно большим выходом (61-73 ). Соединение !а получают путем фосфорилирования 5 -О -(и- зо

-монометокситритил) -тимидина фосфорис. той кислотой в присутствии арилсуль-.фохлорида в пиридине с последующей обработкой бис-(триметилсилил)-ацетамидом и дифенилдисульфидом в пиридине .и хроматографией на силикагеле продуктов реакции. Однако этим методом нельзя получить соединения формулы I .

Целью изобретения являются новые произ водные де зо кси тионуклеотидо в, использование которых в качестве мономеров в синтезе полидезоксинуклеотидов позволит повысить выход последних до 95, и способ их получения.

Поставленная цель достигается новым способом получения новых дезокситионуклеотидов формулы I, заключающимся в реакции фосфорилирования

5 -О-диметокситритилнуклеозидов фор50 мулы ОСН5

45 а-ñ- оснн н

7 4 где  — имеет указанные значения, 5 - 15-кратным избытком тиохлорокиси фосфора в течение 2 - 4 ч при

0 — 5 С в пиридине; в обработке реакционной смеси пиридиновым раствором этиленциангидрина в течение 1 - 2 ч при комнатной температуре, полученное дицианэтильное производное гидролизуют триэтиламином в спирте, полученное моноцианэтильное производное алкилируют иодистым метилом в диметилформамиде с последующей обработкой продукта алкилирования толуолсульфокислотой и/или триэтиламином р спирте.

Полученные дезокситионуклеотиды (нуклеозидные компоненты в триэфирном способе получения полидезаксинуклеотидов) имеют хорошую растворимость в воде. Это обусЛовило значительно более простой и выигрышный во времени способ выделенил продукта реакции: после проведения конденсации полностью защищенный олигомер экстрагируют хлороформом из реакционной смеси, а избыточные и непрореагировавшие компоненты отмывают водой.

8следствие этого число хроматографий сокращается в 2-3 раза, уменьшается время синтеза и увеличивается выход олигодезоксинуклеотидов.

Пример 1. 5 -О-диметокситриФ тилтимидин-3 -О-2-цианэтил-S-метилтиофосфат (Zrr)

К диметокситритилтимидину (0,544 r, 1 ммоль) добавляют охлажденную до

0 С тиохлорокись фосфора (1 мл, 10 ммоль) в .9 мл пиридина, выдерживают при О - 5 С в течение 3 ч. Реакционную смесь упаривают в вакууме на ротационном испарителе, обрабатывают охлажденной до О С смесью (4:1 V/V) пиридина (4 мл) с этиленциангидрином .. (1 мл) и оставляют на час при комнатной температуре.

Добавляют 1 М водныи раствор бикарбоФ, ната триэтиламмония (ТЭАБ) в количестве 1. мл и через 10 - 15 мин экстрагируют хлороформом (10 мл). Экстракт промывают водой (5 мл. 2), сушат безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Остаток растворяют в смеси этанола (20 мл) с триэтиламином (10 мл) и выдерживают 1 ч при комнатной температуре, упаривают в вакууме. Остаток растворяют в хлороформе (10 мл), промывают водой (5 мл 2), сушат с сульфатом натрил и упаривают в вакууме досуха. До929647

5 оавляют диметилформамид (10 мл) и иодистый метил (0,5 мл), через

5 - 10 мин реакционную смесь упаривают в вакууме. Остаток растворяют в хлороформе (10 мл), промывают водой (5 мл 2), суцат безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 20 мл трет-бутанола и подвергают лиофильной сушке. Выход 0,651 г (904). !0

Вещество гомогенно при тонкослойной хрбматографии на силикагеле

1 в системе хлороформ:метанол (9,! 1

V/V) (А). УФ-максимум в этаноле при

270 нм (E=11500) . Содержание димеI токситритильных групп, определенное спектрофотометрически при 500 нм (Е=72000) в смеси НС104-С2Н5ОН (1:1

V/V), равно 994. Гидролиз цианэтильной группы 1 М триэтиламином в мета- 2В ноле при 20 С протекает полностью о. за 1 ч, а гидролиз 0,05 М LtOH npu

20 С - за 1 мин. Гидролиз диметокситритильной защиты 1l-ным раствором толуолсульфокислоты (TosOH) в.смеси хлороформ:метанол (7:3 V/V)(B) протекает полностью за 20 мин при 0 С. о

Это подтверждает структуру соединения Щ °

П р и м е. р 2. 5 -0-диметокситритил-й4-анизоил-дезоксицитидин-3 -0-3-цианэтил-S-метилтиофосфат (1Ч) .

Фосфорилирование 5 -0-диметоксиl тритил-N4-анизоилцитидина (0,633 г, .

1 ммоль) тиохлорокисью фосфата, цианэтилирование, гидролиэ и алкилирование иодистым метилом в условиях, приведенных в примере 1, дает 0,754 г(913)лиофильно высушенного из бензола вещества(iV).

Вещество Я гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикагеле в указанной системе А.. Уф-максимум в этаноле 302 нм (E=25000 ).

Содержание диметокситритильных групп 984. Гидролиз цианэтильной защиты 1 М триэтиламином в метаноле при 20 С или 0,05 М LlOH в метаноле при 20оС протекает соответственно за 1 ч и за 1 мин. Гидролиз диметокSO ситритильной защиты 14-ным раствором толуолсульфокислоты в укаэанной смеси В проходит полностью за 15 мин.

Это подтверждает структуру соединения IV.

Я !

Пример 3. 5 -O.-Диметокситритил-Н -иэобутирил-деэоксигуаноэин-3 "0-2-цианэтил-S-метилтиофосфатЩ

Фосфорилирование 5 -0-диметокси-

-Й -изобутирилдезоксигуаноэима (0,639 r, ммоль) тиохлорокисью

Фосфора, цианэтилирование, гидролиэ и алкилирование йодистым метилом в условиях, приведенных в примере 1, дает 0,671 г (82 ) вещества

Вещество V гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикагеле в укаэанной системе А. УФ-максимум в этаноле 269 нм (Е=!1600), содержание диметокситритильных групп

983. Гидролиэ цианэтильной защиты

1 М триэтиламином в метаноле при

20 С или 0,05 М LtON в метаноле при

20 С протекает соответственно за

60 мин и 1 мин. Гидролиз диметркситритильной защиты 14-ным раствором толуолсульфокислоты в укаэанной системе Б проходит полностью эа 3 мин о при 0 С ° Это подтверждает структуру соединения Y .. (Пример 4. 5-0-Диметокситригил-N -бензоилдезоксиаденозин-3-0-2э»

-цианэтил-S-метилтиофосфат (И) .

Фосфорилирование 5-0-диметоксиfi тритил-N -бензоилдезоксиаденозина (0,657 r, 1 ммоль) тиохлорокисью

Фосфора, цианэтилирование, гидролиэ и алкилирование йодистым метилом в условиях, приведенных в примере 1, дает 0,.665 г (803) лиофильно высувенного из бензола веществаЧ1 .

Вещество гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикагеле в указанной системе А. УФ-максимум в этаноле 280 нм (Е=20700), содержа" ние диметокситритильных групп 98 .

Гидролиз диметокситритильных групп

14.-ным раствором в укаэанной системе 6 проходит голностью за 3 мин hpH

0 С. Тидролиз цианэтильной защиты о

1-М триэтиламином в метаноле при

20 С или 0,05 М L10H в метаноле о

IlpH 20 С протекает полностью соответственно за 60 мин и 1 мин. Это подтверждает структуру соединенияЧ1.

Пример 5. Тимидин-3 -0-2 г

-цианэтил-5-мeтилтиофоcфaт (V!!),, К охлажденному до 0 С раствору

5 -0-диметокситритилтимидин-3 -0I l -?-цианэтил-S-метилтиофосфата (0,724 r, ммоль) в 10 мл смеси хлороформ: метанол (7:3 V/V) добавляют 10 мл охлажденного до 0 С

23-ного раствора TosOH в такой же смеси. Через 20 мин добавляют пиридин (10 мл) и воду (10 мл). Водный .

647

7 929 слой отделяют, органический слой промывают. 5 мл. воды, сушат безводным Ма2504 и упаривают в вакууме досуха. Остаток растворяют в хлороформе (5 мл), наносят на колонку с

Я мл силикагеля и хроматографируют в градиенте хлороформ - 53 метанол в хлороформе (250 мл хлороформа в резервуаре и 250 мл 5i метанола в хлороформе в смесителе). После удаления растворителя и высушивания в вакууме получают 0,401 r (95В) вещества V11 .

Вещество чИ гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе хлороформ - метанол (9:1

V/V). УФ-максимум в воде при 267 нм (E=9600) . Гидролиз. цианэтильной.зациты в 1 M триэтиламине в метаноле при 20 С протекает полностью за о

60 мин, при этом образующийся тимидин-3-S-метилтиофосфат идентичен по

УЮ-спектру и хроматографической подвижности при тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе метанол - хлороформ - 1 М ацетат аммония (10: 10: 1 V/V) заведомому образцу.

Это подтверждает структуру соединенияЧП.

Пример 6. М -изобутирил-де2 зоксигуанозин-3-0-2-дианэтил 5-метилтиофосфат (ЧШ) .

2, Гидролиз 5 -0-диметокситритилI

М-изобутирил-дезоксигуанозин-3 -О-2-цианэтил-S-метилтиофосфата (0,818 г, 1 ммоль) 13-ным раствором

ТозОН в течение 2 мин в условиях примера 5 дает 0,606 г (95Ф) целевого продукта Vill

Вещество гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе хлороформ — метанол,(9:1 Ч/ 11)

Уф-максимум в воде при 280 нм (Е=

=11900 ), плечо при 255-260 нм (E=

=16200 ), Гидролиз цианэтильнои защиты дает вещество, идентичное по УФспектру, хроматографической.подвижности на силикагеле (М -изобутирилдезоксигуанозин-3-S- ìåòèëòèîôîcôàòó.

Это подтверждает структуру соединения МП!.

Пример 7. М+-Анизоилдезокси1 цитидин-3 -О-2-цианэтил-S-метилтиофосфат(1У) .

Гидролиз 5 -О-диметокситритил4, (-М -анизоилдезоксицитидин" 3 -0-2-цианэтил-S-метилтиофосфата (0,812 г„

1 ммоль) 13-ным раствором TosOH в условиях примера 5, дает 0,484 г (953) вещества1Х

Вещество гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикагеле в

5 системе хлороформ - метанол (9:1

V/V). Уф-максимум в воде 302 нм (E=2500), Гидролиз цианэтильной зац1иты дает вещество !Х, идентичное по Уф-спектру и хроматографической подвижности заведомому образцу, Это подтверждает структуру соединения1Х °

Пример 8. N6-бензоилдезокI сиаденозин-3 -0-2-цианэтил-S-метилтиофосфат.,(Х) !

Гидролиз 5 -О-диметокситритил6

-М -бензоил-дезоксиаденозин-3-0-2-цианэтил-S-метилтиофосфата (0,867 г, 1 ммоль) в условиях, приведенных в примере 6, дает 0.,513 г (963) ве20 щества Х

Вещество Х гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе хлороформ - метанол (9:1 V/V).

Уф-максимум в роде при 280 нм (Е=

25 =2700). После снятия цианэтильной защиты обрадуется вещество, идентич- ное по УФ"спектру и хроматографической подвижности N 6-бензоилдезоксиаденозин-3-S-метилтиофосфату.

Пример 9. 5 -ДиметокситриI тилтимидин-3 -S-метилтиофосфат (Х )

; 5 -О-Диметокситритилтимидин-3—

-О-2-цианэтил-S-метилтиофосфат (714 мг, 1 ммоль) обрабатывают смесью этанола (20 мл) с триэтиламином (10 мл) в течение 1 .ч при комнатной температуре, упаривают в вакууме.

Остаток растворяют в хлороформе (10 мл), промывают водой (5 мл 2), сушат с сульфатом натрия и упаривают в вакууме. Получают 668 мг (983) соединения XI Соединение Х4 гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе С2Н ОН:

45 .СНСЗЭ (1:1) (система В)., Уф-максимум в этаноле при 270. нм (E=1150I3) .

Содержание диметокситритильных групп, определенное спектрофотометрически при 500 нм (E=72000) в смеси НС10 .

:C2H 0H (1:1 Ч/Ч)1 равно 993. Это подтверждает структуру соединения Х .

Пример 10. 5 -О-ДиметокситриI I тил-N."àíèîçîèë-дезоксицитидин-3-S-метилтиофосфат()(И).

5 -0-Диметокситритил-N -анизоил1

-дезоксицитидин-3™0-2-цианэтилметилтиофосфат (771 мг, 1 ммоль) обрабатывают в условиях примера 10.

Получают 696 мг (97+) соединенияМ1.

9 92

Соединение X ll гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикаге" ле в системе В. Уф-максимум в этаноле при 302 нм (Е=25000). Содержание диметокситритильных групп, определенное спектрофотометрически при

500 нм (Е 72000) в смеси НС104 .С HSOH (1:1 V/V), равно )8i. Это подтверждает структуру соединения ХП

Пример t1. 5 -О-ДиметоксиI

Я тритил-N -изобутирил-дезоксигуанозин-3 -S-метил-тиофосфат(ХШ).

5 -О-Диметокситритил-М -изобути2

1 рил-дезокси гуанозин-3-0 -2-цианэтил-S-метилтиофосфат (640 мг, 1 ммоль) обрабатывают .в условиях примера 9.

Получают 574 мг (981} соединенияХ111

Соединение Х1Игомогенно при тонкослой ной хроматографии на силикагеле в системе В. Уф-максимум в этаноле при 269 нм (Е=11600). Содержание диметокситритильных групп, определенное спектрофотометрически при 500 нм (Е=72000) в смеси НС104 .С2Н ОН (I:1 Ч/Ч), равно 984., Пример 12. 5 -Диметокситритил-N --бензоилдезоксиаденозин-3 -5-метилтиофосфат(XIY) (5 -Диметокситритил-М -бензоилдеt зоксиаденозин-3 -0-2-цианэтил-Sметилтиофосфат (837 мг, 1 ммоль) обрабатывают в условиях примера 9.

Получают 760 мг (97i) соединения XIV.

Соединение XIV гомогенно при тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе В. УФ-максимум в этаноле при 280 нм (Е=20700). Содержание диметокситритильных групп, определенное спектрофотометрически при 500 нм (Е=72000) в смеси НС104 .С НЕОН (1:1

Ч/Ч), равно 99 . Это подтверждает структуру соединения Х1" .

Пример 13. 5 -Диметокситритил-(М -изобутирилдезоксигуанилил-(3 -S-метилтио 5 )-N -изобутирилде-! ! зоксигуанилил- (3-5-метилтио 5 ) -N-бензоилдезоксиаденозил-(3 -S-метилтио.5)-тимидин)-3 -0-2-цианэтилl

-S-метилтиофосфат (XV)

5 -Диметокситритил-М -изобутирилдезоксигуанозин-3 -5-метилтиофосфат (76,5 мг 0,1 ммоль) и N -изобутирилдезоксигуанозин-31-0-2-цианэтил-5-метилтиофосфат (64 мг, О, 1 .ммоль) растворяют в сухом пиридине(10 .мл) и упаривают в вакууме на ротационном испарителе до I.мл. Добавляют (50,4 мг, 0,2 ммоль) мезитиленсульфо9647 10 хларида и оставляют при 20 С íà l,÷.

К реакционной смеси прибавляют 10 мл смеси ацетонитрил - триэтил - амин (1:1 Ч/Ч) и нагревают 10 мин .при

50 С. Упаривают в вакууме досуха, остаток растворяют в хлороформе (10 мп), хлороформенный раствор про-. мывают водой (5 мл 3), затеи фильтруют через безводный сульфат натрия

to и упаривают досуха. Получают 51-ди» метокситрйтил-(И -иэобутирилдезоксигуанйлил-(3 -S-метилтио- 5)-М -йзобу1 бутирилгуанозин) -3 -S-метилтиофосI фат(Х1Ю 3140 о.е. (974} при 260 нм.

1s 5 -Диметокситритил-М в-бензоилдезоксмl аденозин (84 мг, 0,1 ммоль) и тими" дин-3-0-2-цианэтил-8-метилтиофос©ат (4? мг, 0,1 ммоль) растворяют в сухом пиридине (10 мл) и упаривают в вакууме до 0,5 мл. Добавляют мезитиленсульфотетразолид(50,4 мг, 0.,2 ммоль) и выдерживают при 20 С в течение ч. Упаривают с толуолом (10 мп 2) досуха и растворяют. в.хло. у роформе (1О мл). К .охлажденйому до . О С раствору приливают охлажденный до О С.23-ный раствор TosOH (10 мл) в смеси метанол - хлороформ (3:7).

Через 2 мин нейтрализуют 53-ным водзв ным раствором бикарбоната натрия, водный слой отделяют. Органическйй слой промывают .через безводный

NagS04 и упаривают досуха. Получают М -бензоилдеэоксиаденозил-ф-S-метилтио-Я -тимидин-3 -0"2-цианэтил-S-метилтиофосфат(ХЧИ)2250 о.е. (983} при 260 нм. ВеществоХЧПи веществоХ Брастворяют в сухом пиридине (t5 мл) и упаривают в вакууме до

IO

1 мл. Добавляют мезитиленсульфотетраэолид (50,4 мг, 0,2 ммоль) и выдерживают Ь течение 1 ч при 20 С.

Добавляют воду (0,1 мл), выдерживают

lмин и растворяют в хлороформе (10 мл)..

Хлороформ промывают водой 5 мл ° 2)

IS фильтруют через безводный сульфат натрия; упаривают в вакууме, затем снова упаривают с толуолом (10 мл). Сухой остаток растворяют в хлороформе (5 мл) и наносят на колонку с силикагелем (V=15 мл), Элюируют в градиенте концентрации метанола в хлорофор ме (150 мл хлороформа в резервуаре и 150..мл 5> метанола в хлороформа в смесителе). Получают вещество ХУ (5600 о. е., 901 ) . Вещест во Х Ч гомо- . генно при хроматографии в тонком слое на силикагеле в системе хлороформметанол (9:1 V/V). УФ-максимум при

Олигодеэокси" нуклеотиды, синтезированные на основе известных дезокситионуклеотидов

Выход,4

GGA

GGAT

86

CiGA

52

GAT

TGA

TGG

11 92964

260 нм E 64400 . Отношение коли чества веществами, измеренное по поглощению при 260 нт и 500 нм (характерное поглощение диметокситритильwx групп), равно g,97. Эта характеристика, определяющая количество полученного вещества двумя независимыми измерениями (при 260 нм и

500 нм) и в пределе равная 1, доказывает состав тетрануклеотида ХЧ . to

Соединение XY нагревают в концентрированном аммиаке (30 мл) 6 ч при

50 С. После удаления аммиака на ротационном испарителе и упаривания остатка с уксусной кислотой и водой получают дезоксигуанилил (3+5) деэоксигуанилил (3- 5) -дезоксиаденозил-(3 5) -дезокситимидин.

Полученные новые производные дезоксинуклеотидов в качестве моно- щ

Олигодезоксинуклеотиды, синтезированные на основе предлагаемых дезокситионуклеотидов формулы (1олученные мономеры были использованы для синтеза полидезоксинуклеотидов: GGATGCiATCi TAA > TGAATTCA >

TGGACCGTGTTTACATq CCAT4CTTTCCATTTCiq

CAAATGCAAA, АСАСОСТССА, ACTTAAGT.

Выход на каждой стадии при получении полидеэоксинуклеотидов составляет 50-96", конечный выход в расчете на мономер 10-504.Полученные полимеры гомогенны при тонкослойной хрома5О тографии на селикагеле в системе хлороформ:метанол (9:1 V/V). Отношение измеренных суммарных плотностей полидезоксинуклеотидов при 260 нм и

500 нм 0,96-0,99, 55

После снятия защитных групп (диметокситритильной, амино- и оксигрупп) с полидезоксинуклеотидов и

7 12 меров для синтеза олигодезоксинуклеотидов обладают по сравнению с другими аналогичными соединениями следующими преимуществами: производные дезокситионуклеотидов получают с выходом 80 - 903, как видно из примеров 1 - 8 . Известные же производные дезокситионуклеотидов формулы I получают с выходом

70-80

Полученные в примерах 1 - 8 производные дезокситионуклеотидов были использованы в синтезе олигодеэоксинуклеотидов триэфирным методом (пример 13). В таблице приводятся пуриновые олигодезоксинуклеотиды, наиболее сложные для получения, а также сравнительные данные по выходу олигодезоксинуклеотидов. очистки их ионнообменной хроматографией проводили гидролиз фосфодиэстераэой змеиного яда (ФДЭ); Полученные таким образом полидезоксинуклеотиды имели хрома1ическую подвиж- ность на ионнообменной хроматографии, соответствующую их зарядам. При неполноь гидролизе ФДЭ были получены олигомеры, число которых соответствовало длине анализируемых полидезоксинуклеотидов. При исчерпывающем гидролиэе ФДЭ этих полидезоксинуклеотидов получены продукты, по подвижности соответствующие мономерам

Полученные полидезоксинуклеотиды количественно фосфорилировались при обработке полинуклеотидкинаэой Фага

Т-4 и g =12Р-АТФ.

Формула изобретения

/ с осн, в

1.Производные дезокситионуклео-. тидов общей формулы

ОН где  — имеет укаэанные значения, фосфорилируют 5-15 кратным избытком тиохлоракиси фосфора в течение 2-4 ч

20 д при 0-5 С в пиридйне, реакционную смесь обрабатывают пиридиновым раствором этиленциангидрина в течение

1-2 ч при комнатной температуре, полученное дицианэтильное производ2S ное гидролизуют триэтиламином в спирте, полученное моноцианэтильнов производное алкилируют йодистым метилом в диметилформамиде с последующей обработкой продукта алкилирования толуолсульфокислотой и/или триэтиламином в спирте.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Sekine М., Hata T. Phenyltio

group as protecting group of phosphates in oligonucleotide synthes s

via phosphotriestel approach. Tetrahedron 1etfers 1711 (1975). с к,о

MbcS x l о

-р=о г

RgO где В -. осадок тимина, N - анизоил1

Ь цитозина, N — бенэоиладенина и

N - иэобутирилгуанина, R H, п,п-диметокситритил, .!

КрН,2"цианэтил, как мойомеры для синтеза дезоксиполинуклеотидов.

2. Способ получения производных дезокситионуклеотидов общей формулы восн о в

Н CS

Р=О

aso

Составитель Л.Никулина

Техред H. Тепер Корректор Н.Стец

Редактор О.Половка

Заказ 3408/32 Тиран 390 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Ч1атент", г.унгород, ул.Проектная,4

13 929647 14

Полученные полидеэоксинуклеотиды где  — остаток тимина, N " аниэоицибыли использованы для ферментативно- тозина, N - бенэоиладенина и М го синтеза двухцепочечного полидезок- изобутирилгуанина, синуклеотида ?, кодирующего структур- R< =Н, п,п-диметокситритил, нУю часть гена гоРмона антиотензи- s R =H, 2-цианэтил, 2 на I . ? ТСААТТСАТССАССС TfiTTTACAT о т л и ч а ю u) и и с я тем, что

1САТССТТТССАТТТС ACTTAAGTACCTGGCA- 5 -0-диметокситритилнуклеозиды обСАААТОТАСаТАтАИажАААС. щей формулы