Способ получения орторомбической монолитиевой соли @ - никотинамидадениндинуклеотид-дигидрата
Оп ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ЛАУЕНТУ (6l) Дополнительный к патенту (32) Зааьлено 18. 08. 77(2l) 2511705/23-04 (23) ПРиоРитет - (32) 20. 08 7б (31) Р 26 37 598.4 (331 ФРГ
Союз Советски и
Соцкалнстическми
Республик 11>932992 (512 М. Кл, 07 Н 21/00//
С 12 М 9/00
3Ъоударотоанный комитет
СССР ао делом нзооретений и открытий
Опубликовано 30. 05. 82. Бюллетень tp 20 (53) УЙK 5" 7.963 °.3 (088.8) Дата опубликования описания 30.05.82.
"Берингер Ианнхайм ГмбХ" (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ-ОРТОРОИБИЧЕСКОЙ МОНОЛИТИЕВОЙ
СОЛИ Я-НИКОТИНАИИДАДЕНИНДИНУКЛЕОТИДДИГИДРАТА ки (2 J.
Изобретение относится к способу получения нового соединения — орторомбической монолитиевой соли Р -ни" котинамидаденийдинуклеотиддигидрата (P-НАД ) с пространственной группой
P 2т 2,т 2 с размерами клетки
0=10,073 -0,003А Ь "15,839+0,004А
t =17,821+0,004А и углами о = P о"
= 90О, которое может быть использовано в ферментативном анализе при определении ферментативных актив" ностей и концентраций субстрата для клинической диагностики.
Известно получение кристаллическо" Q го никотинамидадениндинуклеотида в виде свободной кислоты (13.
Однако данная кислота очень гигроскопична и быстро расплывается на воздухе, что вызывает определенные 3) трудности при использовании ее в ферментативном анализе при определе" нии активности и концентрации субстрата для клинической диагностиИзвестен также способ получения кристаллических солей и водных растворов путем осаждения целевого про,дукта органическим растворителем (3$.
Цель изобретения - получение но" вого кристаллического соединения, расвирякнцего арсенал средства воздействия на живой организм.
Поставленная цель достигается тем, что в способе получения орторомбической монолитиевой соли 1 -никотинамидадениндинуклеотиддигидрата с пространственной группой P 2 2 2т с размерами клетки с(10,073"0,003А Ь= 1,839+ 0,004À ; С = 17,821 +
0,004 и углами с = Р Д 90о к разбавленному, водному раствору Р -ни. котинамидадениндинуклеотида в форме свободной кислоты прибавляют гидроокись лития или катионообменных в литиевой форме до рН 3-7, предпочтительно 3;7-4,0 или к водному раствору аморфной монолитиевой соли -ни" котинамидадениндинуклеот ида прибавляют гидроокись лития до рН 3- т.
93299
Пример 2. 1 г лиофилизированной соли лития Р -НАД растворяют в 2 мл воды и при комнатной температуре при перемешивании каплями добавляют 3,6 мл метанола до начала помутнения. ДЯлее аналогично примеру 1, После сушки получают
900 мг (904 использования) кристало о лизованной соли лития.
Пример 3. 1 г Р -НАД в виде лиофилизированной свободной кислоты растворяют в 0,75 мл Н О и при перемешивании путем накапываниц 1,3 мл
1-й-гидроокиси лития доводят рН до 4.
Затем добавляют 2 мл метанола и оставляют ni30 ч при 20-25 С. После обработки, аналогичный примеру 1, получают 900 мг (90 использования) кристаллизованной соли лития -НАД.
Пример 4. 1 г лиофизированной соли лития Ъ -НАД растворяют в 2 мл воды и аналогично примеру 1 добавляют 0,8 мл изопропанола. После отсасывания, промывания и сушки получают 800 мг (803 использования ) кристаллиэованной соли лития.. 3 предпотительно до рН 3,7-4,0, к полученному водному раствору при 10-50 С, предпочтительно при комнатной температуре, прибавляют смешивающийся с водой органический растворитель до начала помутнения раствора и кристаллизуют целевой продукт при 4-30 С.
В качестве смешиваемого с водой органического растворителя в предлагаемом способе может применяться >0, в основном любой растворитель, обладающий этими свойствами. Однако предпочтение отдается низким спиртам, кетонам, нитрилам и циклическим эфирам, в частности метанолу, этанолу, is
Н-пропанолу, изопропанолу, ацетону, ацетонитрилу или диоксану. . Пример 1. 1 r соли лития
1 -НАД (полученной пропусканием раствора свободной кислоты через zo
0 -50 в виде лития. с последующей лиофилизацией растворяют в 2 мл воды,. при комнатной температуре при перемешивании каплями добавляют 1,2 мл ацетона до начала помутнения. При
20-25 С происходит кристаллизация.
Выкристаллизованный продукт спустя
30 ч отсасывают, дважды промывают небольшим количеством ацетона с водой (1:2 ) и просушивают в вакууме над . Р О . Выход составляет 900 мг (903 использования лиофилизата).
2 4
Пример 5 0 5 мг лиофилизированной соли лития Р -НАД растворяют в 1 мл воды и аналогично примеру 1 . добавляют 0,85 мл диоксана. Выход кристаллизации составляет 70/ от использованного лиофилизата.
Пример 6. 0,5 г лиофилизированной соли лития P --..НАД растворяют в 1 мл воды и аналогично примеру
1 медленно добавляют 0,4 мл ацетонитрила. Кристаллизационную соль лития получают с выходом 803 относительно использованного лиофилизата. р и M e p 7 0,5 г лиофилизированной соли лития Р -НАД растворяют в 1 мл воды и оставляют при комнатной температуре. Спустя 5-6 сут начинается осаждение кристаллов. Для полной кристаллизации оставляют еще на 3-4 сут при комнатной температуре.
Выход составляет 40 относительно использования лиофилизата.
Анализ орторомбической соли монолития
Суммарная формула
С Н И О,, Pg Li 2HzО
Иолярный вес 705,4
НАД (ферментативный с АДХ), 3-, 93,5
Вода, 3 5,5
Литий,i 1,17 т.пл., ОС 203-203,5
Элементный анализ:
Найдено,31С 35,28;Н 3,99; N 13 59
Р 8,73 °
Вычислено,Ф: С 35,76; Н 4,28; и 13,90; P 8,78.
Кристаллографические данные:
Система кристаллов Орторомбическая
Угол 4, Р 90
Пространственная группа Р2 2 2
Размеры клетки,А
0 10,073 + 0,003
Ъ 15,839 0,004 с 17,821 - 0,004
Плотность кристаллов, г/см 1,653
Кристалл состоит из единицы формулы в ассиметрическом единстве.
Пример 8. (дополнительный для верхнего предельного значения
pH)1 r P -НАД лиофилизованной свободной кислоты растворяются в 0,8 мл
Н 0 и при перемешивании с помощью
1,4 мл 1 н.гидроокиси лития регулируют рН до. 7. После этого добавляют 2,2 мл метанола и раствор оставляют при 20-25 С на 24-48 ч.
932992 б
Формула изобретения
Составитель Л.Никулина
Редактор Л.Пчелинская Техред И. Рейвес Корректор Г.Решетник
Заказ 3823/79 Тираж 390 Подписное
ВНИИПИ Государственного коМитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, 8-35, Раушская йаб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, кл. Проектная, 4
После переработки, аналогичной примеру 1, получают 900 мг (904 ввода) кристаллизованной р- НАД соли лития.
Пример 9 дополнительный.
1 г Р -НАД лиофилиэованной свободной кислоты растворяют в 1 мл Н О при комнатной температуре и при помощи 0,4 мл 1 н. гидроокиси лития при перемешивании регулируют рН tO до 3,3. Затем добавляют 1 мл метано-. ла и смесь оставляют для кристаллизации при 20-25 С в течение 3-5 дн.
После переработки, аналогичной примеру 1 получают 200 мг (203 ввода) 35 кристаллизованной !". -НАД соли лития.
П р и м-е р 10 дополнительный.
1 г лиофилизованной Р -НАД соли лития растворяют в 2 мл H O (величина рН составляет 3,7) и при ох- . щ лаждении до + 10 С смешивают с 2 мл метанола. Осажденный приблизительно после 30 ч отстаивания при 20-25 С о кристаллизат перерабатывают аналогично примеру 1. Получают 900 мг 25 (90/ ввода) кристаллизованной
1-НАД соли лития.
Пример 11.дополнительный.
1 г лиофилизованной Р -НАД соли лития растворяют в 2 мл Н О (вели- эв чина рН составляет 3,7), раствор нагревают до+ 50 С и в него добавляют при перемешивании 2 мл метанола. Оставляют смесь на 24-30 ч для кристаллизации при 20-25 С и затем перерабатывают аналогично примеру
Получают 850 мг (854 ввода) кристал.лизованной р -HAfl соли лития.
Способ получения орторомбической монолитиевой соли -никотинамидаде" ниндинуклеотиддигидрата с пространственной группой Р2 2 2 g с разме, рами клетки O = 10,073+0,003À;
Ь= 15 839фО,ООИ ; С 17,821
0,004А и углами о = = ф = 90 отличающийся тем, что к разбавленному водному раствору"
Р-никотинамидадениндинуклеотида в форме свободной кислоты прибавляют гидроокись лития или катионообменник в литиевой форме до рН 3-7, предпоч тительно 3,7-4,0 или к водному раствору аморфной монолитиевой соли -никотинамидадениндинуклеотида прибавляют гидроокись лития до рН
3-7, предпочтительно 3,7-4,0, к полученному водному раствору при 1050 С, предпочтителвио при комнатной температуре, прибавляют смещивающийся с водой органический растворитель до начала помутнения раствора и кристаплизуют целевой продукт при
4-30 С.
Источники информации, йринятые во внимание при экспертизе
1. Winer А.О. Кристаллизация никотинаминадениндинуклеотида.J.Biol. Chem, 239 (10) 3598, 1964.
2. Оа1ziel К.Очистка . никотинамидадениндинуклеотида и кинетичес кие эффекты нуклеотидных примесей.J,Вiol Chem., 238, 1538 (l963) °
3. Патент США 1 " 3700654 кл. 260-211,5, опублик. 1972.
