Способ получения эритроцитарного диагностикума

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сотоз Соаетсинх

Соцналнстнчесинх

Ресттублнн

«i>935108

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6! ) Дополнительное к авт. свнд-ву(22)Заявлено 16,07,80 (21) 2960078/28-13 (51) М. Кл.

A 61 K 39/385 с присоединением заявки М

3Ьаударствснхый квнитет

CCCP ао делам иза6ретенкк и открытий (23)приоритет(53) УДК 616-07 (088.8) Опубликовано 15. 06. 82. Бюллетень М 22

Дата опубликования описания 15.06.82 (72) Авторы изобретения

Ю. A. Кузьмин, Б. В. Каральник и Л. П. Волкош!

Казахский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО

ДИАГНОСТИКУМА

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Известен способ получения эритроцитарного диагностикума путем смешения взвеси фиксированных эритроцитов и антигена в присутствии конъюгиру5 ющего агента с последующим инкубированием смеси и отмыванием сенсибилизированных эритроцитов (1).

Однако известный способ не обесто печивает высокои чувствительности гепатитного В и эхинококкового диагностикумов.

Целью изобретения является повышение чувствительности гепатитного В

15 и эхинококкового диагностикумов.

Эта цель достигается тем, что согласно способу получения эритроцитарного диагностикума путем смешения взвеси фиксированных эритроцитов и антигена в присутствии конъюгирующего агента с последующим инкубированием смеси и отмыванием сенсибилизированных эритроцитов в качестве конъюгирующего агента используют фуксин основной в концентрации 0,01-0,li, компоненты смешивают в соотношении 2:1:1 и смесь инкубируют при 40-80 С в течение 30180 мин.

При этом используют 3-12 -ную взвесь фиксированных эритроцитов.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Смешивают 1 мл

103-ной взвеси фиксированных формалином по Вайнбаху бараньих эритроцитов, 0,5 мл раствора HBsAg (концентрация белка 20 мкг/мл) и 0,5 мл водного раствора 0,054-ного фуксина основного.

Смесь выдерживают 180 мин при 60 С, встряхивая через каждые 15 мин, после чего сенсибилизированные эритроциты трижды отмывают 0,853-ным раствором NaCl, содержащим 0,1i желатины и 2 об.1 1/15 М фосфатного буфера, рН 7,2. К осадку отмытых сенсибилизированных эритроцитов добавляют ?О мл такого же раствора, который используТаблица 1

Титр РПГА при сенсибилизации с помощью

Доза антигена, мкг/мл предлага- емого способа

СгС1 танина риванола

1 : 2 х 10 1 : 32 1 : 256000 1 : 1 х 10

224

1 : 128000 1 : 1 х 10

1 : 2 х 10 1 : 16

112

1: 2х10

1: 2х10

1: 2 10

1: 1 х 10

1:1х10

1: l х10

28 l4

П р и м е ч а н и е. Титр РПГА меньше 1 : 8 (отрицательный результат) Т а б л и ц а 2

Доза эхинококкового антигена, мг/мл

Титр РПГА при сенсибилизауии с помощью предлагаемого способа

С r С l та ни на риванола

1 : 96000

1 : 96000

1 : 96000

1 : 38400 1 : 28800 1 : 48000

1 : 24000 1 : 28800 1 : 48000

1 : 12000 1 : 24000 1 : 48000

Предлагаемый способ позволяет по- обладающие более высокой чувствительлучить эритроцитарные диагностикумы, ностью по сравнению с известными, так

3 93 ют для отмывания, содержащего дополнительно 0,13 азида натрия. Получают

0,5Ô-ную взвесь стабильных сенсибилизированных эритроцитов, используемых в качестве эритроцитарного диагностикума.

Пример 2. Смешивают 1 мл

53"ной взвеси фиксированных формалином по 8айнбаху бараньих эритроцитов, 0 5 мл раствора эхинококкового антигена (концентрация 2000 мкг/мл) и

0,5 мл водного раствора 0,03 3-ного фуксина основного. Смесь выдерживают

120 мин при 50 С, встряхивая через каждые 15 мин, после чего сенсибили зированные эритроциты трижды отмывают 0,853-ным раствором NaCl, содержа5108 4 щим нормальную лошадиную сыворотку в разведении 1:200 и 2 об. r„ 1/15 М фосфатного буфера, рН 7,2, К осадку отмытых сенсибилизированных эритроцитов добавляют 10 мл такого же раст вора, который используют для отмывания эритроцитов, содержащего дополнительно 0,1i азида натрия. Получают

0,53-ную взвесь эритроцитов, которые

1в используют в качестве эритроцитарного диагностикума.

Характеристика чуствительности и специфичности реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с эритроцитарными

1 диагностикумами, полученными по известным и предлагаемому способам, представлена в табл. 1 и 2. формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор О. Персиянцева Техред Е. Харитончик Корректор И. Демчик

Заказ 4091/10 Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 9351 чувствительность гепатитного 8 диагностикума повышается в 2 раза и эхинококкового в 3,5-4 раза.

1. Способ получения эритроцитарного диагностикума путем смешения взвеси фиксированных эритроцитов и анти- 10 гена в присутствии конЪюгирующего агента с последующим инкубированием смеси и отмыванием сенсибилизированных эритроцитов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения чув- 1S

08 6 ствительности гепатитного В и эхинококкового диагностикумов, в качестве коньюгирующего агента используют фуксин основной в концентрации 0,01-0,1ti компоненты смешивают в соотношении

2:1: 1 и смесь инкубируют при 40-80 С в течение 30-180 мин.

2. Способ по и. 1, о т л и ч аю шийся тем, что используют

3- 123-ную взвесь фиксированных эритроцитов.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

У 634749, кл. A 61 K 39/00, 1977.