Применение белков в качестве агентов против аутоиммунных заболеваний

 

Изобретение относится к медицине, в частности к белкам и применению белков, выделенных с помощью хлорной кислоты из органов животного для приготовления лекарственных препаратов, эффективных против аутоиммунных заболеваний, в частности, эффективных против артрита, атеросклероза, множественного склероза, диабета. Изобретение позволяет снижать развитие или предотвращать указанные патологические состояния. 2 с. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к применению белков, выделенных из органов животного, в частности, из печени млекопитающего для приготовления лекарственных препаратов, эффективных против аутоиммунных заболеваний, в частности, эффективных против атеросклерозов, артрита, множественного склероза, диабета.

Введение полного адъюванта Фрейнда доказало возможность индуцирования экспериментального артрита, очень близкого к ревматоидному артриту у крыс. С другой стороны, введение адъюванта кроликам индуцирует не артритную патологию, а атеросклероз. Проведенные исследования показали, что при обоих заболеваниях иммунореактивность к эндогенному фактору проявляется наличием белка теплового шока 60 (БТШ-НSР60). Последующие исследования подтверждают эти наблюдения, доказывающие, что введение полного адъюванта Фрейнда может быть заменено введением HSP60, вызывая те же самые патологии. Впоследствии было доказано, что предварительное введение крысам адъюванта, HSP60 или их фрагментов предотвращает атаку артрита по неизвестному механизму, тогда как дополнительное введение адъюванта ухудшает развитие заболевания.

Совсем недавно было обнаружено, что предварительное введение адъюванта предотвращает также другие исследуемые патологии; в основном речь идет об аутоиммунных заболеваниях, таких как диабет или экспериментальный аллергический энцефаломиелит (ЕАЕ). Наконец, стало понятно, что HSP60 имеют структурные аналоги с высокомолекулярными аутогенами, следовательно, они борются с большим количеством заболеваний, чем предполагалось ранее.

WO 92/10197 описывает белковые фракции, выделяемые с помощью хлорной кислоты из органов млекопитающих, и их применение в качестве противоопухолевых агентов. В этих фракциях при электрофорезе в геле можно различать три основных компонента, имеющих молекулярные массы 50, 14 и 10 кДа. Очищенный экстракт, содержащий эти три компонента, впоследствии обозначили как UK101. Последовательность белкового компонента с массой 14 кДа, которая является главной, если не единственной ответственной за описанные активности, приведена ниже в таблице и в WO 96/02567, и это совпадает с описаниями других авторов (Levy-Favatier, Eur. Biochem. 1903, 21(3) 665-73), которые предполагали, что новые выявленные последовательности относятся к семейству белков, известных как шаперонины, к которым относятся и HSP (белки теплового шока).

Белки, описанные в WO 92/10197, а также в WO 96/02567 (в последующем обозначенные как UK114), проявляют некоторые свойства, никогда не исследовавшиеся у шаперонинов или схожих белков. В большей степени это доказывается утверждением, что белки могут быть применены в профилактике и лечении аутоиммунных заболеваний, в особенности атеросклеротических расстройств, таких как атеросклероз, вызванный трансплантацией органа, артрит, множественный склероз и диабет.

Изобретение предпочтительно относится к применению очищенных белков UK101 и UK114 для приготовления лекарственных препаратов для предотвращения и лечения аутоиммунных заболеваний, таких как атеросклероз, вызванный трансплантацией органа, множественный склероз, диабет.

Более того, изобретение относится к применению белков, имеющих высокую степень схожести с UK114, по крайней мере, на 80%, а предпочтительно на 90%.

АТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ Было установлено, что в настоящее время наиболее часто причиной неудачи трансплантации органов в большей степени является не отторжение, а образование атеросклеротических бляшек в месте контакта между сосудами трансплантируемого органа и сосудами хозяина. Эта патология усугубляется введением иммуносупрессоров, таких, как циклоспорин, в который входит AZT, являющийся очень токсичным при применении.

Эффективность белков UK101 и UK114 очевидна при их применении в двух обычно используемых атеросклеротических моделях, в одной из которых используется кролик с предварительно введенным полным адъювантом Фрейнда, и атеросклеротическая модель при трансплантации. В первом случае подкожно введенный адъювант индуцирует в течение 21 дня образование атеросклеротических бляшек в подвздошном ответвлении и дуге аорты. Предварительное введение (за 7 дней) UK101 и UK114 полностью предотвращает развитие патологии в большинстве случаев, в отличие от введения только адъюванта, который только снижает развитие заболевания у всех животных.

Вторая рассматриваемая модель атеросклероза при трансплантации заключается в шунтировании артериальных сосудов у крыс. Через короткое время образуются атеросклеротические бляшки в сосудах хозяина аналогично, как показывают исследования, как эта патология проявляется у человека. Предварительное введение (за 7 дней) UK101 и UK114 полностью предотвращает развитие патологии в большинстве случаев, по сравнению с обследованной группой животных, которым предварительно не вводились белки перед трансплантацией.

АНТИАРТРИТНАЯ АКТИВНОСТЬ Эта активность очевидна и в обычной артритной модели, при которой артрит индуцируется адъювантом. В этой модели Lewis-крысам делают инъекцию в основание хвоста полного адъюванта Фрейнда, на 7-й день патология проявляется в виде опухания конечностей и артрозов. Пик развития патологии приходится на промежуток между 14 и 21 днями, затем конечности возвращаются в нормальное состояние. Предварительное введение (за 7 дней) UK101 или UK114 полностью предотвращает развитие патологии в большинстве случаев, в отличие от введения только адъюванта, которое приводит к развитию патологии у 100% животных. Введение UK101 или UK114 после введения адъюванта снижает развитие патологии.

Следовательно, это приводит к пониманию того, что UK101 и UK114 обладают способностью снижать развитие или предотвращать патологические состояния, такие как артриты и ревматоидные артриты.

АКТИВНОСТЬ ПРОТИВ МНОЖЕСТВЕННОГО СКЛЕРОЗА Эта активность очевидна при обычной модели множественного склероза: экспериментального аллергического энцефаломиелита. Патология индуцируется подкожной инъекцией Lewis крысам гомогената спинного мозга морских свинок вместе с полным адъювантом Фрейнда. Патология проявляется в виде прогрессирующего паралича конечностей, которая проявляется на 12-й день, достигает пика на 21-й день и исчезает на 30-й день после введения иммуногена. Предварительное введение (за 7 дней) UK101 или UK114 полностью предотвращает развитие патологии в большинстве случаев и снижает опасность течения заболевания по сравнению с введением только смеси гомогената и адъюванта, которые приводят к развитию патологии у 100% животных.

Следовательно, UK101 и UK114 действительно обладают способностью снижать развитие или предотвращать патологию множественного склероза.

АНТИДИАБЕТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ Она очевидна в обычной модели диабета, представленной ВВ крысой, у которой спонтанно развивается диабет приблизительно на 45-й день жизни. Животным вводят на 30-й день жизни UK101 или UK114 и наблюдают развитие патологии по сравнению с контрольной группой животных, которым не ввели белки. Предварительное введение приводит к снижению количества и тяжести патологии в исследуемой модели. Пациентам, имеющим различные виды опухолей, а также страдающим диабетом, вводили UK101 в щадящем режиме. У всех пациентов, которым ввели белки, независимо от вида опухолевой патологии, снижался диабет с выходом, в дальнейшем, из инсулиновой зависимости.

Следовательно, UK101 и UK114 обладают способностью изменять течение диабета или предотвращать его.

Антидиабетическая эффективность фактически подтверждается, несмотря на ограниченное число известных случаев, при которых ввели in vivo пациентам, страдающим от диабета.

Белки согласно изобретению могут быть многократно введены в виде инъекций с соответствующим наполнителем.

Схемы введения (дозы, частота введения и т.д.) может варьироваться в соответствии с обстоятельствами, зависящими от таких факторов, как: состояние пациента, стадии заболевания и т.д., но обычно ежедневная дозировка варьируется в пределах от 1 до 100 мг, в зависимости от необходимости.

Формула изобретения

1. Белок, имеющий следующую последовательность (см. графическую часть).

2. Белок по п. 1, выделенный с помощью хлорной кислоты из печени млекопитающего.

3. Белок по п. 2, где выделенный белок по меньшей мере на 80% гомологичен белку по п. 1.

4. Белок по п. 1 для приготовления лекарственных средств, эффективных против аутоиммунных заболеваний.

5. Белок по п. 1 для приготовления лекарственных препаратов для предотвращения и лечения атеросклероза, связанного с трансплантацией.

6. Белок по п. 1 для приготовления лекарственных препаратов для предотвращения и лечения артритов.

7. Белок по п. 1 для приготовления лекарственных препаратов для предотвращения и лечения рассеянного склероза.

8. Белок по п. 1 для приготовления лекарственных препаратов для предотвращения и лечения диабета.

9. Фармацевтическая композиция, эффективная против аутоиммунных заболеваний, содержащая в качестве активного ингредиента белки по пп. 1-4 в смеси с подходящими наполнителями.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4