Среда для дифференциации энтеробактерий

 

СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ, содержащая источник азотистого питания, лактозу, фукси-н основной, сульфит натрия, двузамещенный фосфорнокислый натрий, карбонат натрия, хлорид натрия, агар, воду дистилированную, отличающаяся тем, что, с целью повышения чувствительности среды и снижения ее себестоимости, в качестве источника азотистого питания, лактозы и витаминного питания среда содержит панкреатический гидролизат смеси молочной сыворотки и обезжиренного молока, взятых в соотношении 1:1, с содержанием аминного азота 2600-2800 мг%, общего азота 5700-5970 мг% и лактозы 62-65% в сухом гидролизате и.диаммонийфосфат при следующем соотношении ингредиантов, г/л дистиллированной воды: Панкреатический гидролизат молочной сыворотки и обезжиренного . 16,00-20,00 молока 2,30-2,50 ДиаммСНИй фосфат 1,60-1,61 Сульфит натрия 0,30-0,33 Фуксин основной Днузамещенный фосфорнокислый 0,46-0,48 натрий 0,01-0,02 Карбонат натрия 3,40-3,60 Хлорид натрия 9,40-9,60 Агар

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

„„"u„„1049541 А 1511 C 12 N 1/20

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

16, 002,30-2

1,60-1

0,30-0

0,46-0

0,01 — 0

3, 40- 3

9, 40-9,48 ,02 ,60 ,60

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3414921/28-13 (22) 24.03.82 (46) 23.10.83. Вюл. Р 39 (72) С.Н.Карликанова, В.В.Молочников, A.Í.Èâàíoâà, Л.Г.Бендас и А.Я.Сыпченко (71) Северо-Кавказский филиал Всесоюзного научно"исследовательского института маслодельной и сыродельной промышленности (53) 663.15(088.8) (56) 1. Проспект фирмы Оксоид .

Лондон, Оксоид Лимитэд, 1962, c . .124.

2. Каталог сухих питательных сред, выпускаемых в СССР для медицинской бактериологии. М., 1980, с. 78 (прототип) . (54 ) (57 ) СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕРЕН11ИА11ИИ

ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ, с оде ржаща я источник азотистого питания, лактозу, фуксин основной, сульфит натрия, двузамещенный фосфорнокислый натрий, карбонат натрия, хлорид натрия, агар, воду дистилированную, о т л и ч а ю щ а я с я тем,,что, с целью повышения чувствительности среды и снижения ее себестоимости, в качестве источника азотистого питания, лактозы и витаминного питания среда содержит панкреатический гидролизат смеси молочной сыворотки и обезжиренного молока, взятых в соотношении 1:1, с содержанием аминного азота 2600-2800 мгЪ, общего азота 5700-5970 мг% и лактозы

62-65Ъ в сухом гидролизате и.диаммонийфосфат при следующем соотношении ингредиантов, г/л дистиллированной воды:

Панкреатический, гидролизат молочной сыворотки и обезжиренного

С2

Ю молока 20,00

Диаммснийфосфат,50

Сульфит натрия,61

Фуксин основной,33

Двузамещенный фосфорнокислый натрий

Карбонат натрия

Хлорид натрия

Агар 1 049541

Изобретение относится к микробиологии, в частности к микробиологическим исследованиям, основанным на применении питательных сред, включая методы контроля.

Известна среда Эндо-с-Агар, предназначенная для дифференциации энтеробактерий. Основными компонентами этой среды янляются пептон, как источник азотистого питания, мясной экстРакт, дифференцирующий комплекс, лактоза-фуксин оснонной - сульфит натрия и соли (лнузамещенный фосфорнокислый натрий и карбонат натрия), обеспечивающие определенное э. ачение РН среды. Она используется для дифференциации эшерихии и других микроорганизмов кишечной группы.

При этом ферментирующие лактоэу эщерихии образуют на средах темно-красные колонии с характериным металлическим блеском вследствии взаимодействия образующихся в процессе Ферментативной реакции альдегидов с Фуксином н присутствии сульфита натрия (1 ).

Недостатком этой среды является наличие в состане дополнительных компонентов для обеспечения достаточной питательной .ценности, например мясного экстракта, получаемого из ценного пищевого продукта.

Наиболее близкой к изобретению по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является среда для дифференциации знтеробактерий (агар Эндо), содержащая источник азотистого питания(гептон )и дрожженой 35 экстракт, дифференцирующий комплекс лактоза-Фуксин основной - сульфит натрия и соли для обеспечения буферности среды днузамещенный фосфорнокислый натрий и карбонат натрия), 4() хлорид натрия, агар и воду (2 ).

Однако пептон предстанляет собой ферментатинный гидролизат кильки, который получают из ценного пищевого продукта. К тому же, он не обеспечивает достаточного азотистого и витаминного питания микроорганизмов, поскольку в состав среды вводится дополнительно дрожжевой экстракт, который содер>кит набор угленодородов, отрицательно влияющих на проявление дифференциальных свойств среды.

Пель изобретения — понышение чувствительности и снижение себестоимости йреды.

Поставленная цель достигается тем, 55 что среда для дифференциации энтеробактерий, содержащая источник азотистого питания и лактоэу,фуксин основнОй,сульфит натрия,двузамещенный фосфорнокислый натрий и карбонат натрия,, 60 хлорид натрия, агар, воду дистиллированную,н качестне источника азотистого питания, лактозы и витаминного питания, содержит панкреатический гидролиэат смеси молочной сыворотки и обезжиренного молока, взятых в соотношении

10:1, с содержанием аминного азота

2600-?BOO мгЪ, общего азота 5700-.

5970 мгЪ и лактозы 62-65% в сухом гидролизате идиаммонийфосфат при следующем содержании ингредиентов, г/л дистиллированной воды:

Панкреатический

rицролизат молоч—

O ной сыворотки и обезжиренного молока 16,00-20,00

Диаммонийфосфат 2,30-2,50

Сульфат натрия 1,60-1,61

Фуксин основной 0,30-0,33

Двузамещенный фосфорнокислый натрий 0,46-0,48

Карбонат натрия 0,01-0.02

Хлорип натрия . 3,40-3,60

Агар 9, 40-9,60

I1pN данном составе среды TIHTàòåëü". ную основу составляет панкреатический гидролиз ат молочной сыворотки и обезжиренного молока (ПГСМ-1 ), являющийся одновременно источником пептонов, витаминов и лактозы. Необходимая питательная ценность спелы обеспечивается определенным соотношением молочной сыворотки и обезжиренного молока при составлении смеси перед гидролизом — 10:1. Содержание лактозы в ПГСМ-1 обеспечивается наличием сыворотки. В зависимости от исходного количества лактозы в сыворотке определяется доза ПГСМ-1 при введении его в среду. Содержание лактозы в сыворотке колеблется в пределах 4,25,6Ъ и зависит от свойств сырья, Этим определена необходимость использования при составлении смеси

10 ч сыворотки. Увеличение содержания сыворотки н составе смеси приводит к снижению содержания пептонов

«а счет уменьшения количестна обезжиренного молока, что снижает рос-товые свойства среды. Содержание сыворотки в смеси менее 10 ч создает дефицит углеводного состава и ухудшает дифференциальные свойства среды.

Колебания содержания лактозы н

ПГСМ-1 определяют дозу его и составе среды. . Панкреатический гидролизат получают путем Ферментативного гидролиза смеси молочной сыворотки и обезжиренного молока панкреатином в присутствии хлороформа. В процессе гидролиза происходит расщепление белка до легко усвояемых форм азотистого питания бактерий. Это сопронождается накоплением аминного азота, которое достигает 2800 мгЪ в сухой основе.

Аминокислотный состав гидролизата: треонин, серии, аспапгин, поолин. аланин> валин, цистин и цистатнонин, метионин, изолейцин, лейцин. тиоозин. Фенилаланин, Р -аланин,.

1049541 у-аминомаслянная кислота, лизин, 1-метилгистидин, креатинин и глутаминовая кислота.

Гидролиэат содержит минеральные соли, летучие жирные кислоты (муравьиную, уксусную, масляную, пропио- 5 новую,. кальций, фосфор, магний и железо, витамины A, E, B, В 2, В6 холин,, PP и С.

Таким образом, панкреатический гидролизат представляет собой белко- ) p во-углеводный продукт, содержащий

2600-2800 мгЪ аминного азота и

5700-59-70 мгЪ общего азота. Содержание сухих веществ 95-96Ъ; степень расщепления белка 0,467-0,469, 15 содержание лактозы в сухом гидролиэате 62-65Ъ.

Дополнительное введение в среду диаммонийфосфата обеспечивает яркое окрашивание ферментирующих лактозу колоний эшерихий и усиливает их металлический блеск, что является основным дифференциальным признаком среды данного назначения.

Приме р 1. К 100 г сухого препрепарата ПГСМ-1, полученного из

25 смеси сыворотки (c содержанием лактозы 4,2Ъ )и обезжиренного молока в соотношении 10:1, добавляют 65 г лактозы. Для обеспечения необходи " мого количества лактоэы в среде в ЗО состав вводится 20 г сухого ПГСМ-1;

3,4 г хлорида натрия 0,3 r фуксина основного; 1, б г сульфита натрия i

0,46 г двузамещенного фосфата натрия; 0,01 г карбоната натрия и 9,4 г

arapa.

Данное соотношение компонентов рассчитано на приготовление 1 л среды.

Пример 2. В 100 r сухого препарата ПГСМ-l, полученного из сме-си сыворотки (с содержанием лактозы 5, 6Ъ) и обезжиренного молока в соотношении 10:1, содержится 86 r лактозы. Для обеспечения необходимого количества лактозы в среде в состав вводится 16 r сухого ПГСМ-1 у 2, 5 r диаммонийфосфата; 3, б r хлорида натрия; 0,33 г фуксина основного

0,48 г двузамещенного фосфата натрия;

0,02 г карбоната натрия и 9,6 г агара.

Полученный препарат по питательной ценности обеспечивает интенсивный рост энтеробактерий. Содержание лактозы в составе ПГСМ-1 обеспечивает дифференциальные свойства среды на уровне агара Эндо, имекщего в составе кристаллическую лактозу в количестве 12,9-13,0 r. В результате сравнительных испытаний выявлено явное преимущество предлагаемой среды, что подтверждается данными, приведенными в =аблице.

1049541

«» 1

»» иод

o((( дooQ (- и о

0 и о

I » и(«;д

o(»(( аОИOЯ и о а

«< 1

»» и ид

o(((.

0 OO9 (ч и о и

«» о

I (-» и ид

o((( с о и 9 (ч и о а и (-( о

Н и (» о д

D 1»

» х

z g

2 х н х и м

;-ы ю с в с

<Л с д I

L д И( о > I

tD .д 1 1 о с.!1 с(<5 X б ° г

СЬ>

ОЪ д д с (1Я С

Qp ,с сьев л «н л х

О 5

3 М ой а 0 о л

Х д (л и (ч

» и (ч о

Q Э

К K о о (-<

3 х

О 5 3 Y: о 4 .Ъ D с л

Х д

I (ч

» и о о

Я

Q e и м о . о

«-(«-

0 х е

Ю Х ца

5 9

0 Е

0a а х

O é

Ц ф ц о

Q ао

0-1

1

I !.

I I! х е (Хм«

0 Х 9

Rf 9 g lD це о явилаc ах хях

0ц=(«а.

I он

0 д х и

Я Ц

ЦО0 а» д0

0,m0

0Х

0„

Я

Х М

Ю

Цх 0, Э 5 9 ад v

0 О7

1«д

«ч (ч о.и и е

0 с1

И ж х юж х ци а

9 Ct 9 ,аа и

10 Ц

2 1 х

9 V

М

» Е

2 й»! д од!

1

М I х 1

Э I . I

Ф од!

I

I (1

I

l

I 1

0(, И =

М

9 М

ЦХ 0, Э С 9 ахи

0 Cf

Е о

5 ж х (» и о Э х 1:.о

Veto! цяеи

О х е ай

9 C

ХQ Х

g9aO

Ц 9

Ж 29 Х

99@%2 ха дх

ДЛООД ндхдм и хди

«ое х

»оао е идей« (Ц(0ig

I 1 I I I

+/4.

1049541

Составитель И.Привалова

Редактор Г.Безвершенко Техред И.Метелева Корректор В.Бутяга

Эаказ 8361/28 Тираж 523, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, E-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óÿòîðîä, ул.Проектная,4

Производство предлагаемой дифференциальной среды взамен известной позволяет высвободить и направить на производство пищевых про.дуктов ежегодно 150 т кильки высокого качества глубинного улова, а также 20 т високоочищенной кристаллической лактозы - дефиаитного компонента, используемого при производстве продуктов детского питания и лечебных препаратов.

Экономический эфФект от произ5 водства и использования предлагаемой среды составит 344 100 руб.