Способ получения молоди русского осетра

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОЛОДИ РУССКО.ГО ОСЖТРА, предусматривающий . стимулирование полового созревания произЬод итёлей гипофизарными инъекциями искусственное оплодотворение икры, ее инкубирование и выращивание личинок, отличающийся тем, что, с целью повышения устойчивости молоди к дефициту кислорода и обеспечения ее большей жизнестойкости , при оплодотворении осуществляют подбор родительских пар для скрещивания по фенотипу гемоглобина крови, при этом подбор проводят так, чтобы получить 50-100% молоди с гетерозиготным гемоглобином. Ofpaaei/ ш со 6уфе{К1

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

l (19) (П) щ) A 01 К 61/00 (—

1 -

Й Ы

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHO}NV СВИДДТЕЛЬСТВЪ

Ф

Ф (21),3350921/28-13 (22) 19.08.81 (46) 23.12.83 ° Бюл. )) 47 (72) А.С.Чихачев (71) Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства (53) 639.3.032(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

В L05596 кл, А Ol К 61/00, 1956 °

2. Мильштейн В.Б. Осетроводствое" М. ° Ïèùåâàÿ промышленность

1972, с. 3 ?-54. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОЛОДИ

РУССКО1 О ОСЕТРА, предусматривающий

AS И

Аи.1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬП ИЙ

6

1 стимулирование полового созревания произЬо4нтелей гипофизарными инъекциями, искусственное оплодотворение икры, ее инкубирование и выращивание личинок, отличающийся тем, что, с целью повышения.устойчивости молоди к дефициту кислорода и обеспечения ее большей жизнестойкос. ти, при оплодотворении осуществляют подбор родительских пар для скрещивания по фенотипу гемоглобина крови, при этом подбор проводят так, чтобы получить 50-100% молоди с гетерозиготным гемоглобином.

10б1779

Изобретение относится к рыбному хозяйству, в частности к способам получения молоди русского осетра, и может быть использовано на рыбоводных заводах, занкмаюшихся искусственным воспроизводством русского осетра.

Известен способ пблучения молоди осетровых. рыб, предусматривающий стимулирование полового созревания производителей гипофиэарными инъекциями, выдерживание их в бассейне с проточной водой до полного созревания откладывания половых продуктов, отвод Оплодотворенной икры, ее инку бирование и выращивание личинок,:

При осуществлении этого способа 15

° производители, содержащиеся в бассейне, достигают половой зрелости после гипофизарных инъекций, в результате чего самки откладывают икру, оцлодотворяемую самцами, Не- 70 рест, таким образом, происходит в условиях, приближенных к естественным, без подбора производителей fl), Наиболее близким к изобретению по технической сущности является спо;75 соб получения молоди русского осет-" ра,.предусматривающий стимулирование полового созревания производителей гкпофизарными инъекциями, получение половых продуктов, искусственное Оплодотворение икры, ее инкубирование и выращивание личинок f2)i, Однако в процессе осуществления известного способа производителей для скрещивания выбирают произволь" но по мере кх созревания, в результате чего молодь, выпускаемая из рыбоводных заводов, имеет недостаточную жизнестойкость и, попадая в

< неблагоприятные условия, в большин .стве своем погибает от дефицита кис 4О лорода на местах нагула, что снижа ет промысловый возврат.

Целью изобретения является повышение устойчивости молоди к дефициту кислорода и обеспечение ее боль- 45 шей жизнестойкости., Поставленная цель достигается тем,, что согласно споеобу получения молоди русского осетра, предусматривающему стимулирование полового созревания производителей гипофизарными инъекциями, получение половых продуктов, искусственное оплодотворение икры, ее инкубирование к выращивание личинок, при оплодотворении осу- 55 ществляют подбор родительских пар для скрещивания по Фенотипу гемоглобина крови, при этом подбор про водят так, чтобы получить 50-100% молоди с гетерозиготным гемоглобкном.

60 с

Способ основан на том, что функ.цию переноса кислорода в организме осуществляет дыхательный пигмент крови гемоглобин, биохимический поли 65 морфиэм которого (множественность гемоглобиновых компонентов) имеет адаптивное значение.

Способ осуществляется следующим образом.

Всех производителей, используемых для воспроизводства, метят и после мечения у них прижизненно берут про бы крови и готовят образцы гемоглобина .

Приготовленные образцы i емоглоби. на (Нв) анализируют методом электрофореэа в блоках 5,5Ъ-ного полиакриламидного геля и определяют их фрак. ционный состав (фенотип). Обычно для фракционирования сывороточных белков крови применяют 7,53-ный гель.

Увеличение размера пор геля при снижении концентрации акриламида до 5,5% и соответствующее снижение концентрации сшивающего агента (метиленбисакриламида) позволяет удлинить трек разгонки белка. При этом разрешающая способность геля увеличивается и позволяет выявить дополнительные фракции.

Гемоглобин русского осетра по фракционному составу разделяется на три типа Нв-AA Нв-ВВ и Нв-AB (фиг. 1) .

Гомозиготный фенотип Нв-ВВ отличается от гомозиготного фенотипа

Нв-AA наличием фракции 1 с высокой анодной подвижностью, а в фенотипе

Нв-AA самым быстрым является компонент 3.

Гетерозиготный компонент Нв-AB образуется в результате кодоминаитного наследования прк подборе для скрещивания родителей с Нв-AA u

Нв-ВВ, поэтому гетерогенность его наиболее велика - из 7 Фракций, при.чем гвтерозиготы с Нв-АВ обладают повышенной резистентностью к дефициту кислорода.

Для получения гетерозигот Нв-AB родительские пары для скрещивания подбирают по следующей схеме:

Нв-AA х Нв-ВВ 100% Нв-АВ;

Нв-АА х Нв-AB 50% Нв-AA

M 50% Нв-АВ1

Нв-AB х Нв-ВВ 504 Нв- ВВ и 50% Hs-AB.

В данном случае используется явление одногенного гетерозиса по локу су с известной функцией. Гетерозис создается за счет сочетания разных аллельных вариантов гемоглобина, существующих в природной популяции.

Лосле смешивания икры со спермой, полученных от подобранных родительских пар, и оплодотворения таким образом икры последнюю закладывают на инкубацию, полученные личинки выращивают, а по окончании цикла вйращивания выпускают в естественный водоем для дальнейшего нагула.

1061779

53+4

67+4

Р<0, 05

Рс0,05

120

90-5

120

70х5

При осуществлении способа был провещен анализ частот вариантов Нв в 17 генерациях русского осетра в выборке более чем 2000 рыб, в результате чего обнаружена тесная корреляция между частотой Нв-AB кис5 лородным режимом в естественном водоеме (Таганрогском заливе, в котором осуществлено наблюдение нагула молоди) и выживаемостью рыб этой генерации.

На фиг. 2 приведены данные, полученные при этих наблюдениях, где кривая 1 иллюстрирует частоту гетероэиготного гемоглобина Нв-АВ в генерациях русского осетра за 1964- 15

1978 гг (В); кривая 2 - процентное содержание кислорода в воде Таганрогского залива в период нагула моло ди, При неблагоприятном кислородном 2() режиме в период нагула молоди иа первому году жизни увеличивается смертность молоди, а среди выживших .рыб повышается доля особей с фенотипом Нв-АВ, что свидетельствует 25 о селективном преимуществе рыб с таким гемоглобином.

Коэффициент корреляции между со-. держанием кислорода в воде и выжи.ваемостью молоди составляет 0,83, а между содержанием кислорода и час тотой Нв-AB в генерациях - 0,81.

Пример1,Родительские пары русского осетра подбирали по фено- . типам гемоглобина, для этого произ- водителей метили порционовыми красителями и прижизненно отбирали пробы крови из хвостовой вены. В пробах крови опредвляли эритроциты, проводили их гемолиэ и немедленно анализировали фракционный состав гемо- . 40 глобина методом диск-электрофореза: в вертикальных блоках 5,5%-ного цо-, лиакриламидного геля с рН-8,9. Разделяющий и концентрирующий гели гоиз табл. 1 следует, что молодь., с гемоглобином Нв-AB имела больший процент выживаемости при дефиците кислорода. товили на трис-глициновом электродном буфере с рН-8,3 и 6,9, .соответственно. Окраску белков проводили бензидином или амидомерным 10В."

После определения фенотипа гемо» глобина осуществляли подбор родительских пар с фенотипами Нв-AA и Нв-ВВ и их скрещивание, в результате чего после инкубации икры было получено 100% молоди с гетерозиготным Нв-AB.

Пример.2. Способ осуществляли также, как в примере 1. После. определения фенотипа гемоглобина для скрещивания были отобраны родительские пары с фенотипами гемоглобина

Нв-AA и Нв-BB в результате чего было получено 50% молоди с гемоглобином Нв-AA и 50В молоди с гемоглобином Нв-AB.

Пример 3. Способ осуществляли также, как в примере 1. После определения фенотипа гемоглобина для скрещивания были отобраны родительские пары с фенотипами гемоглобина

Нв-ВВ и Нв-AB.

После инкубации икры .было получено 50% молоди с гемоглобином Нв-ВВ и 50% молоди с гемоглобином Нв-AB.

Молодь, полученная в результате скрещивания, затем выращивали в идентичных условиях (при равной проточности, плотности посадки и одинаковом- рационе кормления) в течение .

55 сут ..

Молодь, полученную при скрещивании > с гемоглобином Нв-AA и Нв-AB подвергли раздельно действию остроо дефицита кислорода (снижали концентрацию кислорода с,помощью вакуумного насоса), выдерживая ее 1 ч при содержании кислорода 2,9 мл/л (контрольные рыбы находились в воде,- содержащей

6 мл/л кислорода.

Полученные данные приведены в табл. 1.

Таблица 1

Смешанную группу молоди с гемо-глобином Нв-AA и Нв-AB подвергали воздействию дефицита кислорода.

Данные приведены в табл. 2.

1061779.66

45

53 2

46 8

До гипоксии

После гипоксни

46ю 4

53 6

РСО 01

Р<0 01

61 1 68+1

2550-95 3150+120

924. 55

Как видно нз табл .. 2, среди выживших после . стресса рыб наблюдался сдвиг частот фенотипов геМоглобина на 13,6В в пользу гетерозитот с

Ha-AB, Молодь с гетероэиготным гемогло- бином Нв-AB.имела навеску на

;11,5-23,5Ъ больше по сравнению с молодью, имеющей гемоглобин Нв-АА, В природе при скрещивании двух гетерозигот AB в соответствии с законами Менделя происходит расщепление, при котором образуется 25% особей с Нв АА,- 50%-особей с Нв-AB и 25% особей с Нв-ВВ. В следующей генерации скрещивание разных говоэигот AA u BB даст 100% гетерозигот

AB и их суммарная доля повысится до

75%, в третьем noaîëåíèí - находит;ся. в состоянии динамического равновесия.

Предлагаемый способ, направленный на подбор родительских пар по ,фенотипу гемоглобина, позволит сдвинуть это равновесие в сторону преоб. падания Нв-АВ, характеризующихся

Прн исследовании анализа температура темпа роста молоди с разными

> фенотипами гемоглобина Нв выявилось достоверное преимущество рыб с гетерозиготным гемоглобином Нв-AB.

Данные анализа приведены в табл. 3, ., большей выживаемостью и пластичностью.

Это позволяет даже при получении

35 только 503 молоди с Ha-AB в годы с неблагоприятным кислородным режимом .повысить ее выживаемость íà 20%> что при промысловом возврате только в бассейне Азовского моря даст допол4р нительно до 2000 т товарной рыбы или до 1 млн. Руб. прибыли в год..

Кроме того предлагаемый способ поз» воляет получить молодь с повышенным темпом роста, которая, следовательно, 4 быстрее достигнет промысловых размеров, и улучшить адаптационную пластичность полуляции в целом, так как при нересте рыб, гетерозиготным по гемоглобину, будут чаще выцепляться ред»

5 кие гомозиготы Нв-ВВ, котоРые при скрещивании с распространенными гомо. эиготами Нв-AA вновь дадут рыб с фенотипом Нв-АВ.

1061779

Составитель С. Филиппова

Редактор О.Черниченко Техред С.Легеза Корректор М.Шарсхаи

Заказ 10088/4 Тираж 721 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãîðoä ул.Проектная, 4