Питательная среда для выделения гемокультур стрептококков

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЕМОКУЛЬТУР СТРЕПТОКОККОВ, содержащая питательную. основу, стимулятор роста , углевод, натрий хлористый и дистшшировгтную-воду , отличающаяся тем, чго, с целью повыщения чувствительности среды , она дополнительно содержит глутамин. натрий уксуснокислый и натрий бикарбонат, в качестве питательной осжжы она содержит ферментативный гидролизат .крови животных :и кислотный гидролизат казеина среднее степени расщепления, в качестве стимулятора ростаэкстракт кормотьи дрбжжет и в качестве углевода - декстрозу при следующем количественном соотношении когаюнентов, г/л дастиллировашюй воды: Ферментативный гищюлизат крови животных7Д-8,8 Кислотный гидролизат казеина7 -8,8 Экстракт кормовых 1фожжвй4,5-5,5 Декстроза4,5-5,5 Натрий хлористый2,7-3,3 (Л Глутамии0,2-03 Натрий уксуснокислый0 ,9-1,1 Натртга бикарбонат 1,75-2,25,

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (и) 3(51) С 12 @ 1/04

fg

Л

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

4,5 — 5,5

4,5-5,5

2,7-3,3

0,2-0,3

0,9-1,1

1,75 — 2,25.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОЧНРИТИЙ (21) 3480919/28-13. (22) 21.06.82 (46) 15.01.84. Бюл. No 2 (72) Г. Н. Хлябнч, Б. М. Раскин, А. С. Jhбинская и С. К. Османов (71) Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (53) 576.8;093.1 (088.8) (56) 1. Справочник по микробиологическим и вирусологичеаким методам исследования.

Под ред. М. О. Биргера. М., "Медицина", 1973, с. 74 (прототип). (54) (57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЕМОКУЛЬТУР СТРЕПТОКОККОВ, содержащая питательную. основу, стимулятор роста, углевод, натрий хлористый и дистиллированную-воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения чувствительности среды, она дополнительно содержит глутамнн, натрий уксуснокнслый и натрий бнкарбонат, в качестве питательной основы она содержит ферментативный гидролизат .крови животных и кислотный гидролизат казеина средней степени расщепления, в качестве стимулятора роста — экстракт кормовых дрожжей и в качестве углевода — декстрозу при следующем количественном соотношении компонентов, г/л дистиллированнои воды:

Ферментативный гидролизат крови животных 7,2-8,8

Кислотный гидропизат казеина 7,2-8,8

Экстракт кормовых дро жжет

Декстроза

Натрий хлорисгый

Глута мин

Натрий уксуснокислый

Натрий бикарбонат

1067

7,2-8,8

Изорретение относится к медицине, в частности к бактериологической диагностике стрептококкового сепсиса и септицемнй.

Известна питательная среда для выделения гемокультур стрептококков, содержащая питательную основу — перевар Хоттингера и . мясную воду, стимулятор роста — дефибринированную кровь, глюкозу, хлористый натрий и воду (1).

Однако известная среда не обеспечивьет,.вы- 10 сокой чувствительносж.

Целью изобретения является повышение чувствительности среды.

Эта цель достигается тем, что питательная среда для вьщеления гемокультур стрептококков, содержащая питательную основу, стимулятор роста, углевод, натрий хлористый и дистиллированную воду, дополнительно содержит глутамин, натрий уксуснокислый и натрий бикарбонат, в качестве питательной основы она содержит ферментативный гндролизат крови животных и .,ислотный гидролизат казенна средней степени расщепления, в качестве стимулятора роста — экстракт кормовых дрожжей н в качестве углевода —. декстрозупри следующем количественном соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

Ферментативный гндролизат крови животных 7,2-8,8

Кислотный гидролизат казеина

Экстракт кормовых дрожжей 4,5-5,5

Декст роза 4,5 — S,5

Натрий хлористый 2,7 — 3,3 35

Глута мин 0,2-0,3

Натрий уксуснокислый 0,9 — 1,1

Натрий бикарбонат 1,75-2,25

Среду готовят следующим образом.

Дпя приготовления 1000 мл жидкой шпательной среды 32 г сухого порошка среди растворяют в 1000 мл холодной дистиллированной воды, доводят до кипения и кипятят

-3 йин, затем среду фильтруют и разпива- 45 ют в пробирки по 10 мл, стерилизуют в автоклаве при 112 С в течение 30 мин.

Для приготовления сухого порошка среды используются следующие варианты.

Вариант 1. Ферментативный гидролиэат кро1 ви животных (аминопептид) 7,2 r, кислотный гндролизат казенна 7,2 r, экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) 4,5 г, глутамнн 0,2 r, декстроэа 4,5 г, натрий хлористый 2,7 r, натрий уксуснокислый 0,9, натрий бикарбонат

1,75 г. Сухие. компоненты в указанных концентрациях смешивают в шаровой мельнице.

043 2

Вариант 2. Аминопептид 8,0 г, кислотный гидролизат каэеина 8,0 г, ЭКД 5,0 г, глутамин 0,25 r, декстроза 2,5 г, натрий хлористый,3,0 r, натрий уксуснокислый 1,0 г, натрия бикарбонат 2,0 г.

Вариант 3. Аминопептнд 8,8 г, кислотный гидролиэат казеина 8,8 г, ЭКД 5,5 r, глутамин 0,3 г, декстроза 5,0 г, натрий хлорнстый

3,3 r, натрий уксуснокислый 1,1 г, натрий бикарбонат 2,25 r.

Среды используют следующим образом.

И р и и е р 1. Среды 1, 2, 3 вариантов разливают по 10 мл в пробирки, вносят по 1 0 мл крови донора, искусственно зараженной различными дозами стрептококка группы А (1000, 100, 10 микр. тел/мл крови). В качестве контроля используют мясопептонный бульон с глюкозой и сывороткой.

Посевы инкубируют и учитывают рост.

В табл. 1 представлены сравнительные данные по чувствительности сред.

П р и и е р 2. 1 мл гепариннзированной крови больного. (из расчета 10 ЕД на 1 мл крови) засевают в пробирку с 10 мл жидкой питательной среды следующего состава, г: фер»ментатнвный гидролизат крови животных (аминопептид) 8,0; кислотный гидролизат казеина средней степени расщепления 8,0; экстракт кормовых дрожжей 5 0; глутамин, 0,25; декстроэа 5,0; натрий хлористый 3,0; натрий уксуснокислый 1,0; натрия бикарбонат 2,0. аросев инкубируют при 37 С и через каждые

24 ч производят учет результатов путем высева из жидкой питательной среды на плотную (5%-ный кровяной мясопептонный агар) и приготовлением мазков, которые окрапщвают по Граму и микроскопируют. На 7 сут независимо от наличия в жидкой llHTRTOJlbHQH среде видимого роста производят пересев гемокультуры в пробирку с 10 мл свежей питательной среды того же состава и продолжают исследо; ванне, как описано выше, в течение следующих

7 сут.

При иеследоващы 120 проб крови больных ревматизмом в активной фазе и подострйм септическим эндокардитом показатель высеваемости нв известной среде составляет 1,5%, на питательной среде — 10,8%.

Биологические показатели предлагаемой среды (скорость . роста, чувствительность, эффективность) значительно превосходят известную отечественную питательную среду — мясоиецтонный,бульон с добавлением 0,2% глюкозы и 10% сыворотки и не уступают, а в ряде случаев и превосходят показатели импортной среды (бульон Тодд-Хейвита, производства фирм Оксоид и Дифко).

В табл. 2 приведены результаты биологических испытаний опытной и конт1»аьных

1067043 4 экслоненциальная фаза — 5,2 ч, в то время, как на бульоне Тодд-Хейвита она равна 4,4 ч, а на мясопептонном бульоне — 4,4 ч.

В табл. 3 приведены значения параметров роста Str. pyogenes грА 4М 1115, полученных прн выращивании на опытной и контрольных средах. сред по показателям скорости роста и чув, ствительности.

Более выраженные преимущества предлагаемой среды обнаруживаются при оценке ее качества по параметрам роста, полученных в процессе культивирования (см. табп. 3), так при использовании предлагаемой среды длительность лат-фазы в 4,8 раэ короче, чем на мясопептоином бульоне с добавлением 0,29о глюкозы и )0% сыворотки и в 3,5 раза короче,.чем на бульоне Тодц-Хейвита. На-предлагаемой среде отмечается более вырааеннм

Использование модифицированной питательюй среды позволит улучшить бактериологическую диагностику стрептококкового сепсиса за счет повышения чувствительности среды.

Та

Контроль в "+" — наличие роста при высеве на агар.

"-" — отсутствие роста при высеве юй агар.

5 o-ныи кровяной

r на 5%-ный кровяТаблица 2

Str, pyogenes гр

4М 1115

10 . .10

12 10" 12

)0 а г

Этг. руо9апеа грА

2М 59.

10 а IO

12 10" 10

10-а

8тг. pyo()ense грА

"Myxyaaos"

107 )0 s 12

)0-е 10

10"а 10

)2 10 е 10

10-а

Str, руовапеа rpA

У 682

)2 10 10

10"а 10

10-а

Str. ega)sot)ae грВ

S-84

)4 10 т 10

10 а 10

)0-в

Str. ega)actiae грВ ч-9

Streptococus rpG

)(е 6199

12 10 7 10

10 а 10

10-8

)067043

Streptococus грс

"Price"

)г Ю- 10

)p 8 )p ю-

Str. fecceIis грР

"Ма)юпау

10 10 7 8

10-в 8

1р-а

Таолнца 3

3,8

0,58

4,4

0,3

Бульон Тодд-Хейвита Оксоид) 2,8 4,1 0,6 ),15

0,56

Предлагаемая среда 0,8 5,2 0,52 1,3 — лаг — длительность лаг-фазы; 4 — экс — длительность зкцкЪенциэльной, фазы, час;ф„,,„- максимальная удельная скорость роста; минимальное время генерации; Q$ — оптическая плотность суспензии через 5 ч щнсубацни.

1,16

Редактор Т. Веселова

Тираж 525

ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушсхая наб., д. 4/5

Подписное

Заказ 11154/29

Филиал ППП "Патент"„г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Мясопентониый бульон + 0,2% глюкозы + 10% сыворотки

Составитель Г. Смирнова

Техред Л.Микеш Корректор О. Тигор