Способ выделения гиббереллиновой кислоты из культуральной жидкости

 

СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ ГИББЕРЕЛЛИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ , включающий пропускание культуральной жидкости через сорбент с последукяцей десорбцией гиббереллиновой КИСЛОТЫ водным раствором десорбента , отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода гиббереллйновой кислоты, в качестве сорбента используют высокопористую,неионную , неполярную или среднеполярную смолу, представляющую собой сополимер дивинилбензола со стиролом или со сложными эфирами акриловой или метакриловой кислот, в качестве десорбента гиббереллиновой кислоты используют водный растворацетона с концентрацией 70-100% или 20-45%, или метанола с концентрацией 35-80%, или этанола с концентрацией 50-96% и О) дополнительно осуществляют десорбцию примесей водным раствором ацес . тоиа с концентрацией 45-70% или метанола с концентрацией 80-95%, или этанола с концентрацией 20-35%. т К и 70 и so «о 30 го ю 00 о 4;; to го 30 «о so м п и п /во фиг.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

3(И) С 12 P 27 00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

М1,ЮййфФЭ

13 „„„„ „„„ „, Ц

ЙИММФЩА

К ПАТЕНТУ

СР

Ю 4

«В (21) 2881550/30-15 (22) 12.02.80 (31) Р-213442 (32) 15.02.79 (33) ПНР (46) 15.03.84 Бюл. N 10 (72) Рышард Хэрополитаньски, Анджэй

Казьмерчак, Ирэнэуш Гаевски и Хальина Восько (ПНР) (71) Институт Хэмии Пшемыслоэй и Кутновске Заклады Фармацэутычнэ

"Польфа" (ПНР) (53) 631.811 ° 98(088.8) (56) 1. Мельников И.-Н., Баскаков Ю.А.

Химия гербицидов и регуляторов роста.

И., Госхимиздат, 1962, с.204.

2. Патент ПНР В 49464, кл. 6 в 16/03, 1964. (54)(57) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГИББЕРЕЛЛИНОВОЙ КИСЛОТЫ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ, включающий пропускание куль,.SU „„1080747 А туральной жидкости через сорбент с последующей десорбцией гиббереллино- вой кислоты водным раствором десорбента, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода гиббереллйновой кислоты, в качестве сорбента используют высокопористую,неионную, неполярную или среднеполярную смолу, представляющую собой сополимер дивинилбензола со стиролом или со сложными эфирами акриловой или метакриловой кислот, в качестве десорбента гиббереллиновой кислоты используют водный раствор ацетона с концентрацией 70-100Х или 20-457, или метанола с концентрацией 35-807, I или этанола с концентрацией 50-96Х и дополнительно осуществляют десорб- цию примесей водным раствором ацетона с концентрацией 45-70Х или метанола с концентрацией 80-95Х, или

Вй этанола с концентрацией 20-35Х.

1 1080

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к способу получения регуляторов роста растений.

Известен способ выделения гиббереллиновой кислоты из культуральной жидкости, заключающийся в адсорбции гиббереллиновой кислоты на активированном угле с последующей десорбцией метанолом или ацетоном(1).

Недостатком этого способа является невысокий выход конечного продукта (40 ), обусловленный тем, что гиббе риллиновая кислота не полностью де, сорбируется с угля.

Известен также способ выделения

15 гиббереллиновой кислоты иэ культуральной жидкости, включающий пропускание культуральной жидкости через сорбент, в качестве которого используют анионит в гидроксильной форме, 20 с последующей десорбцией гиббереллиновой кислоты при помощи водных раст. воров десорбента, в качестве которого используют галогениды, сульфаты или нитраты.щелочных ипи щелочноземельных металлов(23.

Недостатком этого способа является невысокий выход конечного продукта (60-65X) вследствие нестабильности гиббереллиновой кислоты в щелочной (а также кислотой) среде.

Цель изобретения — увеличение выхода гиббереллиновой кислоты.

Указанная цель достигается тем, что в качестве сорбента используют высокопористую, неионную, неполярную З5 или среднеполярную смолу, представляющую собой сополимер дивинилбензола со стиролом или со сложными эфирами акриловой или метакриловой кислот, в качестве десорбента гиббереллиновой 40 кислоты используют водный раствор аце тона с концентрацией 70-100Х или

25-45, или метанола с концентрацией 35-80, или этанола с концентрацией 50-96 и дополнительно осуществ-45 ляют десорбцию примесей водным раствором ацетона с концентрацией 45-70 или метанола.с концентрацией 80-95 или этанола с концентрацией 20-35Х.

На фиг.1 представлена десорбция гиббереллиновой кислоты и примесей водным раствором метанола, при этом на оси ординат указана десорбция, выраженная в процентах, а на оси абсцисс — концентрация метанола в объем-55 ных процентах (штриховая линия означает десорбцию гиббереплиновой кислоты, а непрерывная линия — де747 2 сорбцию примесей; на фиг.2 — десорбция гиббереллиновой кислоты и примесей при помощи ацетона (на оси абс- цисс указана концентрация ацетона в объемных процентах, остальные величины сохраняют те же обозначения, что и на фиг.1) .

Извлечение гиббереллийовой кислоты согласно предлагаемому способу позволяет получать конечный продукт с выходом выше 70 ..

Пример 1. Через ионообменную колонну известной конструкции (или две последовательно работающие колонны), заполненную смолой Амберлайт

ХАД-4, пропускают сверху вниз культуральную жидкость после биосинтеза гиббереллиновой кислоты (содержащую

350 ед/см гиббереллиновой кислоты) со скоростью 4 объема на объем шихты сорбента в час (4 ч ") до момента появления в элюате следов этого продукта. Затем пропускают через колонну в этом же направлении водный раствор, содержащий 95% ацетона, со скоростью 2 ч . После небольшого изменения окраски элюата меняют фракцию и начинают собирать главную гиббереллиновую фракцию. Собрав главную фракцию в количестве, равном двум объемам шихты, начинают дозировать водный раствор, содержащий 50 . ацетона. Собрав очередную фракцию объемом 0,5 объема шихты,меняют фракцию и продолжают пропускать 50 -ный ацетон до получения почти бесцветного эпюата. Иэ главной гиббереллиновой фракции под .уменьшенным давлением отгоняют ацетон, добавляя по ходу перегонки небольшое количество воды, из водного остатка после отгонки ацетона выделяют известным способом кристаллическую гиббереллиновую кислоту. Выход — 80X в рассчете на сырой продукт.

Пример 2. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральной жидкости после биосинтеза как в примере 1, с тем отличием, что для десорбции гиббереллинов применяют водный раствор, содержащий 35 ацетона, а для регенерации сорбента — водный раствор,содержащий 65% ацетона.

Пример 3. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральной жидкости после биосинтеза как в примерах 1 и 2, с тем отличием, что для десорбции гиббереллинов применяют водный раствор, содержащий 70 метанола, а после отбора главной гиббереплнноПример 9. Извлекают гиббереллнновую кислоту из культуральной жидкости после биосинтеза как в примерах 4 и 5, с тем отличием, что для десорбции гиббереллинов применяют водный раствор этанола, содержащий

50 спирта, а дл,. регенерации сорбента — водный раствор, содержащий

20Х этанола. Получают результаты примеров 4 и 5, с тем бтличием, что для полной десорГции гиббереллиновой кислоты следует испольэовать в 1,5 раза больше . элюирующего раствора.

В итоге получают гиббереллиновую кислоту с выходом 72Х от количества, содержащегося в культуральной жидкости.

3 10807

-вой фракции регенерацию сорбента проводят водным раствором, содержащим

90Х метанола.

Пример 4. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральной жид5 кости после биосинтеза как в примере 1, с тем отличием, что для десорбции гиббереллинов применяют водный раствор, содержащий 85Х этанола, а для регенерации сорбента - водный 10 раствор, содержащий 25Х этанола.

После конечного выделения гиббереллиновой кислоты известным способом получают выход продукта 75Х от количества, содержащегося в культуральной)g жидкости.

Пример 5. Извлекают гиббе. реллиновую кислоту из культурапьной жидкости после биосинтеза как в . примере 1, с тем отличием, что для заполнения колонн используют высокопористую,среднеполярную сорбционную смолу неионного характера типа

Амберлайт ХАД-7.

Пример 6. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральной жидкости, содержащей 350 ед/см гиббереллиновой кислоты. Культуральную жидкость пропускают через колонну, заполненную смолой Диайон ХП-10 со скоростью 3 ч ", а примеси элюируют 35Х этанолом. Получают продукт с выходом 85Х в перечете на гиббереллиновую кислоту, содержащуюся в растворе после биосинтеза. Сырой продукт содержит 95,5Х гиббереллиновой кислоты.

Пример 7. Извлекают гиббереллиновую кислоту из культуральной жидкости после биосинтеза как в примере 1, с тем отличием, что культу ральная жидкость содержит 180 ед/см

47 4 гиббереллиновой кислоты, а в качест- ° ве сорбента используют неионную, неполярную смолу Диайон ХП-20. РастВор после биосинтеза пропускают со скоростью 8 ч ".Получают выход 81Х в пересчете на сухой продукт, в котором содержание гиббереллиновой кислоты равно 89,3Х.

Пример 8. Извлекают гиббереллиновую кислоту иэ культуральной жидкости после биосинтеза как в примере 4, с тем отличием, что для десорбции гиббереллинов применяют водный раствор этанола, содержащий

96Х спирта, а для регенерации сорбента — водный раствор, содержащий

35Х этанола. Получают результаты, аналогичные результатам примера 4, с тем отличием, что главные фракции элюата содержат гиббереллиновую кислоту в большей концентрации. После окончательного выделения получают гиббереллиновую кислоту с выходом

70Х от количества, содержащегося в культуральной жидкости.

1080747.

20 о о гп за м и юо м го fo яа фиа2

Составитель Д.Сатарова

Редактор С.Тимохина Техред О.Неве Корректор А.Ильин

Заказ 1386/55 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4