Способ получения глюкозоизомеразы

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЛЮКОЗОИЗОМЕРАЗЫ , предусматривающий культивирование штаммов-продуцентов на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, ростовые вещества, , минерёшьные соли, отличающийся тем, что,С целью повышения активности целевого продукта и снижения его себестоимости, в качестве источника азота используют творожную сыворотку, причем в случае применения в качестве продуцентов актиномицетов используют сыворотку с содержанием сухих веществ 18-19,5% в количестве б-10 об .%,а в случае применения в качестве продуцентов молочнокислых бактерий - нативную сыворотку, которая является.основой среды.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) &

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕ П.:НИЙ И ОТКРЫТИЙ (511 С 12 Н 9/92

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ -,.

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВ,Ф . )

3

° °

«Ф (21) 3433558/28-13 (22) 06.05.82 (46) 15.08.84. Бюл. Р 30 (72) А.М,Безбородов, И.В.Улезло, Е.Т.Тулеуова.и P.Í.Õàíäàê (71) Институт биохимии им. A.È.Áàõà (53) 663 ° 15 (088 ° 8) (56) 1.Авторское свидетельство СССР

Р 542763, кл, С 12 N 9/92 1975.

2.Авторское свидетельство СССР

9 534491 кл С 12 N 9/92, 1975. (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГУ ОКОЗОИЗОИЕРАЗЫ, предусматривающий культивирование штаммов-.продуцентов на питательной среде, содержащей источник| углерода, азота, ростовые вещества, минеральные соли, о т л и-ч а ю— шийся тем, что, с целью повыщения активности целевого продукта и снижения его себестоимости, в качестве источника азота используют творожную сыворотку, причем в случае применения в качестве продуцентов актиномицетов используют сыворотку с содержанием сухих веществ 18-19,5% в количестве 8-10 об. Ъ, а в случае применения в качестве продуцентов молочнокислых бактерий — нативную сыворотку, которая является основой среды.

1108107

30

1,0

Для A.olivocinereus 154 способ включает высушивание промытой дистиллированной водой биомассы, экстракцию буфером, фракционирование ацетоном и сульфатом аммония, гельхроматографию на сефадексе Ж-200, кристаллизацию гомогенного фермен-. та; для Lb.brevis 74- фракционирование бесклеточного экстракта сульфатом аммония,ионообменную хромато-; графию на ДЭАЭ-целлюлозе.

Однако согласно известным способам получения глюкозоизомеразы це55

Изобретение относится к микосбиологической промышленности, вчас ности к производстну ферментных препаратов, и может найти применение в микробиологической промышленности, крахмалопаточной, пищевой для полу- 5 чения глюкозно-фруктозного сиропа из гидролизатов крахмала.

Известен способ получения глюкозоизомеразы, предусматривающий культивирование продукта Actinomyces venerue-f0 а1е 332 на питательной среде, содержащей

П -ксилозу, пептон, дрожжевой экстракт, К НРО... MgSOg и агар. Активность полученной культуральной жидкости 10-11,0 мг 2-фруктозы íà l мл >5 культуральной жидкости 111.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту к предложенному является способ (2l. получения высокоочищенной глюкозоизомеразы из Actinomyces olivocinereus 154 и из молочно.кислой бактерии Lactobacillus brevis

74, предусматривающий культивирование штаммов продуцентов на питательных средах следующего состава, г/л

A.divoci- Lb.brevis 74

nereus . 154

Ксилоза 7 Ксилоза

Глюкоза 3 Глюкоза

Пептон 10 Пептон

Экстракт Экстракт солодовых СОЛОДОВЫХ ростков ростков (203-ная (20%-ная вытяжка) 20 мл вытяжка) 25 мл или или

Дрожжевой -Дрожжзвой экстракт 2 5 экстракт 25

Кукуруз- Натрийный экс- уксусно- 40 тракт 20 кислый 10

Натрий Марганец хлористый 5 сернокисКобальт лый хлористый 0,13 Кобальт

Магний хлористый 0,1 сернокис- Вода водолый 0,5 пронодВода водо- ная до 1,0 л; провод- 50 ная до 1,0 л рН среды б,5 рН среды 7,0 левой продукт получается с недостаточно высокой активностью, а также дорогой, так как культивирование штаммов-продуцентов осуществляется на среде, содержащей дорогостоящий компонент — пептон.

Целью изобретения является повышение активности целевого"продукта и снижение его себестоимости.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения глюкозоизомеразы, предусматривающему культивирование штаммовпродуцентон на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, ростовые вещества, минеральные соли, в качестве. источника азота используют творожную сыворотку, причем в случае применения в качестве продуцентов актиномицетов используют сыворотку с содержанием сухих веществ 18-19,5% в количестве 810 об.Ъ, а в случае применения и качестве продуцентов молочнокислых бактерий — нативную сыворотку, которая является основной среды.

Использование н составе сред молочной сыворотки способствует созданию безотходной технологии н молочной промышленности..

Предлагаемый способ получения глюкозоизомеразы включает следующие стадии: приготовление посевной культуры, выращивание штаммон-продуцентон на видоизмененной среде, отделение биомассы и отмывки ее.от остаткон среды путем центрифугирования при

2000 н течение 20 мин, высушинание биомассы или использование н сыром виде для получения целевого продукта.

Пример 1. Препарат глюкозоизомеразы A.olivocinereus 154 получают выращиванием продуцента на питательной среде, которую готовят следующим образом: к 300 мл водопроводной воды добанляют 7 г ксилозы, 3 г глюкозы, 5 г хлористого натрия, 0,5 r сернокислого магния, 0,13 г хлористого кобальта, перемешивают до растворения, добавляют 20 мл экстракта солодовых ростков (20%-ная вытяжка) или 25 г дрожжевого экстракта, затем добавляют 100 мл упаренной сыворотки (сухих веществ

18-19,5Ъ), объем раствора доводят до 1 л водопроводной водой, подщелачивают 0,1-1н, NaOH до рН 7,0.

Активность препаратов фермента, получаемых по предлагаемому способу увеличивается на 22% по сравнению с известным способом, а биомасса на 43,8%, если испольэовать в составе видоизмененной среды упаренную молочную сыворотку.

Пример 2. Препарат глюкозоиэомераэы Lb.brevis 74 получают выращиванием продуцента на.питательной

1108107

Среда

Продуцент глюкозоизомеразы актиномицета

100

100

С нативной молочной сывороткой

С упаренной молочной сывороткой

77,2

122

143,8

Продуцент глюкозоизомеразы молочнокислой бактерии

100

100

122

130

С нативной молочной сывороткой

С упаренной молочной сывороткой

101

Составитель И.Привалова

Редактор Т.Колб Техред М.Гергель Корректор.Ц. Мельниченко

Заказ 5838/18 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППЛ Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4 среде, которую готовят следующим образом: к 300 мл водопроводной воды добавляют 10 г ксилозы, 15 г ксилозы, 1 г глюкозы, 10 r уксуснокислого натрия, 1,0 г сернокислого марганца, 0,1 r хлористого кобальта, перемешивают до растворения, добавляют 25 мл экстракта солодовых ростков (25%-ная вытяжка) или 25 г дрожжевого экстракта, 100 мл нативной молочной сыворотки с содержанием

6,8-7,1% сухих веществ, объем раствора доводят до 1 л водопроводной водой, подщелачивают 0,1-1н . NaGH до рН 6,5. Среда может быть приготовлена на нативной молочной сыво-. ротке вместо водопроводной воды без пептона. Активность препаратов фермента, получаемых по предлагаемому способу, увеличивается на 22% по сравнению с известным способом, а биомасса — на 30%; если использовать в составе среды нативную сыворотку.

В таблице представлены сравнительные данные по активности и накоплению биомассы продуцентов глюкозоизомеразы, полученные по известно-. му и предлагаемому способу.

С пептоном и кукурузным экстрактом контроль

С пептоном и кукурузным экстрактом контроль

Предлагаемый способ позволяет повысить активность глюкозоизомеразы на на 22% за счет введения в состав питательной среды молочной сыворотки.

Удешевление способа происходит эа счет применения питательной среды с использованием отхода молочной промышленности — молочной сыворотки, которая представляет собой новый компонент среды для выращивания про10 дуцентов глюкозоизомеразы, причем пептон полностью заменен новым компонентом.

Применение молочной сыворотки обеспечивает возможность получения готового продукта в зависимости от цели, актиномицентного или бактериального происхождения, что расширяет ассортимент ферментов, а также

20 позволяет создать безотходную технологию в молочной промышленности.

При использовании предлагаемоГо способа отпадает необходимость приобретения ценного реактива за рубежом (пептона).

Вес .воздушно-.сухой. Активность глюкоэобиомассы, % .. ... j изомеразы, %