Способ диагностики гипопластической /апластической/ анемии

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ШПОПЛАСТИЧЕСКОЙ (АПЛАСТИЧЕСКОЙ) AHEbDffl путем добавления сыворотки больного в культуру клеток человека, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, ускорения и упрощения способа, в качестве культуры клеток используют эритроциты лиц, страдающихi эритремией в стадии развернутых клинических проявлений одинаковой группы крови АВО, и резус с исследуемым больным.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧНжИХ

РЕСПУБЛИН..Я0„„1111763 А зсю А 61 К 39/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

А0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК ABTOPCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ л

1 ( ( (21) 3537077/28-13 (22) 10.01,83 (4б) 07.09,84. Бюл. 9 33 (72) Е.А. Зотиков, Л.П, Порешина, В.Э. Файнштейн и Н.С. Турбина (71) Центральный ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (53) 615.375(088.8) (56) 1. Gordon М.Y. Circulation

inghibitors of Granulopoesis in

Patents with Aplastic Anemia.—

"Brit. J. Haematol". 1978, 39, Ф 4, 491-496. (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПОПЛАСТИЧЕСКОЙ (АПЛАСТИЧЕСКОЙ) АНЕЛИ путем добавления сыворотки больного в культуру клеток человека, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности, ускорения и упрощения способа, в качестве культуры клеток используют эритроциты лиц, страдающих эритремией в стадии pasвернутых клинических проявлений одинаковой группы крови АВО, и резус с исследуемым больным.

111 17бЗ

Изобретение относится к медициНе, в частности к иммунологической диагностике заболевания системы крови, а именно гематологического заболевания гипопластической (апластической) анемии.

Известен способ диагностики гипопластической (апластической) анемии путем добавления сыворотки больных 1g в культуру клеток костного мозга здорового человека, после чего подсчитывают количество колонеобразующих клеток, при снижении которого диагностируют гипопластическую анемию r13.

Однако данный способ длителен— (8-15 дней) и сложен в исполнении.

Целью изобретения является повышение точности, ускорение и упрощение диагностики.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики гипопластической (апластической) анемии путем добавления сыворотки д больного в культуру клеток человека, в качестве культуры клеток исполь. зуют эритроциты лиц, страдающих эритремией в стадии развернутых клинических проявлений одинаковой

30 группы крови ABO и резус с исследуемым больным.

Пример, Сыворотку больного в объеме трех капель соединяют в малсньких пробирках с одной каплей

35 трижды отмытых эритроцитов от двух больных эритремией с группой крови

0(I)Rh+ v от двух больных с группой крови 0(I) Rh- . Содержимое пробирок перемешивают и иккубируют в течение

1 ч при 37 С. Затем эритроциты отмывают три раза изотакическим раствором

NaC1 путем центрофугирования при

1000 об/мик по 10 мин. Из осадка

I" oToBHT 1 OX кую Взвесь эритроцитов g5 в физиологическом растворе. Одну каплю 107.-кой взвеси каждого образца эритроцитов переносят на белую фарфоровую пластину, добавляют к ней одну каплю актиглобулиновой сыворотки и перемешивают. При слабом покачивании в течение 10 мик производят учет результа гов. В сыворотках больных гипопластической анемией наблюдается агглютинация в каплях с эритроцитами больных эритремией. Агглютинация эритроцитов в преобладающем большинстве случаев появляется через 3-S мик и бывает достаточно выраженной. Сыворотки больных гипопластической анемией не должны реагировать с эритроци тами здоровых лиц.

Правильная трактовка результатов предлагаемого способа предусматривает обязательное выполнение контрольных исследований.

Первое контрольное исследование направлено ка исключение сывороток, содержащих изоиммуккые антитела, которые могли возникнуть в результате гемотрансфузионкой терапии. Это достигается путем испытания сывороток больных гипопластической (апластической) анемией с эритроцитами 0(I)Rh+ и 0(I)Rh- по два образца каждой специфичности. Это контрольное исследование должно быть отрицательным. Другое контрольное исследование направлено ка исключение из числа больных эритремией лиц с положительной прямой пробой Кумбса. Для тест-панели (клетокмишеней) используются эритроциты только тех больных эритремией, у которых прямая проба Кумбаса является отрицательной.

В качестве мишеней выбраны эритро циты группы 0(I) поскольку оки ке содержат групповых актигеков и поэтому являются совместимыми с сывороткой любой группы крови. Помимо эритроцитов группы крови 0(1) для исследований могут быть использованы эритроциты больных эритремией одинаковой или совместимой группы крови с больным гипопластической анемией.

Так, например, сыворотку больного гипопластической анемией А(ТТ) можно исследовать с эритроцитами тест— системы 0(I) и A(II) групп крови; сыворотку В(III) — с эритроцитами 0(I)и

В(1И);сыворотку AB(IV) — с эритроцитами

0(I), A(II), B(III) и AB(IV) . При нарушении классических законов групповой совместимости наступает реакция агглютинации, т.е. склеивание эритроцитов за счет наличия в сыворотке естественных гемагглютикирующих антител. Использование эритроцитов группы 0(1) позволяет исключить агглютикацию за счет группового несоответствия и выявлять актите-ла, встречающиеся у больных гипопластической анемией.

Эритроциты больных эритремией содержат дифференцировочкые актигекы, характерные для определенной

1111763 т

Заболевания, КолиАнтитела чество

Гипопластическая ане40

S1 мия

Параксизмальная ночная

15 гемоглобинурия

Аутоиммунная гемолитическая анемия

20 4

20 Контроль сыворотки здоровых лиц

55

Составитель Г. Крюкова

Редактор Л. Гратилло Техред Т.Маточка Корректор В. Гирняк

Заказ 6368/4 Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 стадии развития этих клеток. Природа гипопластической анемии противоположна эритремии и возможно возни кает вследствие образования антител, направленных против дифференциро- 5 вочных антигенов эритроцитов, которые представлены на эритроцитах боль ных эритремией в стадии обострения.

Свидетельством диагностической ценности предлагаемого способа являются сравнительные исследования сыворотки больных гипопластической (апластической) анемией с сыворотками больных другими, близкими по клинической картине гематологически- 15 ми заболеваниями — аутоиммунной гемолитической анемией (АИГА) и параксизмальной ночной гемоглобинурией (ПНГ).

В таблице представлены результаты исследования с помощью предлагае- 2О мого способа — геммагглютинационной пробы с эритроцитами больных эритремией — сывороток больных гипопластической (апластической) анемией и других гематологических заболеваний.

Ни в одной сыворотке больных параксизмальной ночной гемоглобинурией и аутоиммунной гемолитической анемией не выявлены антитела. Антитела, реагирующие с клетками-мишенями— эритроцитами больных эритремией в стадии обострения, обнаружены в 40 сыворотках иэ 51, больных гипопластической анемией.

С помощью известного способа определения ингибитора гранулопоэза антитела выявляют только у 1/3 больных, что соответствует примерно ЗОХ. С помощью предлагаемого способа антитела, реагирующие с клет ками-мишенями, выявлены в сыворотке 41 больного из 50, что соответствует 78Х. Эти цифры свидетельствуют . о повышении точности предлагаемого способа более, чем в два раза.

Предлагаемый способ быстрее известного более чем в 100 раз. Согласно известному способу ответ может быть получен через 8-15 дней, а с помощью предлагаемого — через 2 ч.

Упрощение предлагаемого способа состоит в том, что отпадает необходимость применения довольно трудоемкой методики, требующей специального дорогостоящего оснащения (газовый культиватор, планшеты, автоматические микропипетки), культуральных сред, в основном импортных, стерильных условий и т.д. Предлагаемый способ диагностики не требует специального оснащения и легко выпол" ним в обычных лабораторных условиях.

Таким образом, предлагаемый иммунологический способ может найти применение в практике как способ, дополняющий существующие лабораторные методы диагностики гипопластической (апластической) анемии, позволяющий выявить вариант гипопластической анемии, протекающей с иммунологическими наоушениями опвепеленного типа (аутоантителами) а также оказать существенное влияние на выбор средств лечения.