Штамм @ @ н/14 bts-393 n в-2547 для изготовления энтомопатогенного препарата против кровососущих комаров

 

Штамм Bacillus thuringiensis Н/14 BTS-393 № В-2547 (Коллекция ВНИИ генетики и селекции промыпшенных микроорганизмов) для изготовления эн .томопатогенного препарата против кровососущих комаров.

СОЮЗ СОВЕЧ-СНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ.

РЕСПУБЛИК

@(, го г1 1, ", Я

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

tl °

"й

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3548321/30-15 (22) 02.12.82 (46) 15.07.86. Бюп. В 26 (7 1) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии (72) Э.И.Соколова, Г.Я.Макарова, Д.В.Волжинский, Е.А.Ульянова и Н.М.Кулиева (53) 632 ° 951(088.8) (56) Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. Колос, N., 1976.

Патент США В 4165112, кл. А 01 N 15/00, 1979.

ÄÄSUÄÄ 1121806 А (58 4 А 01 N 63/00 (54) ШТАММ BACILLUS THURINGIENSIS

Н/14 BTS-393 У В-2547 ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННОГО ПРЕПАРАТА ПРОТИВ КРОВОСОСУЩИХ КОМАРОВ (57) Штамм Bacillus thuringiensis

Н/14 BTS-393 Р В-2547 (Коллекция ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов) для изготовления эн.томопатогенного препарата против кровососущих комаров.

1121806

Изобретение относится к области микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий, который может быть использован для производства препарата, применяе- 5 мого для борьбы с кровососущими комарами.

Известно, что одним из средств уничтожения личинок комаров являются бактериальные препараты, производство 1О которых осуществляется на основе культуры Bacillus thuringiensis.

Культуры бактерий, применяемые для производства препаратов, должны обладать значительной патогенностью в отношении личинок комаров, фагоустойчивостью, высокой продуктивностью и способностью использовать в качестве компонентов питательной среды сырьевые продукты, применяемые для крупнотоннажного производства энтомопатогенных препаратов.

В настоящее время при производстве препаратов для борьбы с комарами используется шт. ONR-60 А/У НО/ССВС

1897 Вас. thuringiensis, позволяющий получить препараты высокого качества. Недостатком штамма является то, что для культивирования его применяется среда, содержащая дорогостоящие ЗО и дефицитные компоненты (пшеничная мука, глюкоза, дрожжевой экстракт), мало пригодные в условиях крупнотоннажного производства. Кроме того,при выращивании на пшеничной среде шт.

0NR-60А проявляет более низкую патогенность для личинок комаров по сравнению с выделенным штаммом 393.

Целью изобретения является получение штамма бактерий Bacillus thurin- 40

giensis обладающего высокой антомоцидной активностью. Дпя достижения цели предлагается штамм Bacillus

thuringiensis Н l4 ВТ$-393 В-2547 (Коллекция ВНИИ генетики и селекции 45 промышленных микроорганизмов) для изготовления энтомопатогенного препарата против кровососущих комаров.

Штамм имеет следующие морфологическую и физиологическую характернс- 5р тики.

Крупные споровые палочки с закругленными концами, расположенные одиночно, парами или цепочками.

На мясопентонном arape величина 55 вегетативных клеток в экспоненциальной фазе развития равна (3,5-5,0)х х (1,2-1,5) мкм. Перитрихи. Грамположительны. В стационарной фазе образуют овальные споры величиной (1, 4-2, 2) х (1-1, 1) MKM в э нтомоцидные кристаллы неправильно-округлой формы с нечеткими краями, диаметр которых находится в пределах 0,3

1,1 мкм.

По Н-антигену штамм Н 14 N BTS-393 относится к 14 серотипу. Не продуцирует термостальный Р -экзотоксин.

Мясопептонный агар. На 3 сутки роста образует колонии до 0,1-0,2 см в диаметре, плоские с приподнятым центром, ровными или волнистыми краями, серовато-белого цвета. Пигмент не выделяет.

Органическая среда для поддерживающей селекции и размножения маточных культур — сухой питательный агар (СПА). На 3-5 сутки роста колонии округлой формы, плоские, матовые,белого цвета. Край колоний волнистый или радиально-изрезанный. Диаметр колоний 0,3-0,4 см. Рост обильный.

Пигмент не образует.

Иясопептонный бульон. Помутнение слабое, гомогенное, затем просветление с образованием вуали через 48 ч.

Осадок волокнистый при встряхивании.

На 7-8 сутки образование кольцеобраэной пленки.

Картофель ломтиками. Рост обильный. Культура слизистая, блестящая, затем сухая. Пигмент бледно-розоватого цвета. Субстрат не окрашивает.

Лакмусовое молоко. Пептонизация с подщелачиванием на поверхности (24 ч), затем подкисление и редукция молока. Коагуляция на 3-4 сутки с частичным перевариванием. Переваривание интенсивное на 6-8 сутки. Коагулированная сыворотка не окрашена.

Желточная среда. Образует розовый пигмент.

Агар-казеин. Рост обильный. Культура матовая, через 24 ч роста вызывает гидролиз казеина, сухая, белого цвета. Просветление полное, ореол вокруг колоний 2-3 мм.

Агар-желатина. Рост скудный. На

1-3 сутки умеренное послойное разжижение желатины, на 5-е сутки — полное.

Отношение к углеводам. Усваивает без выделения газа глюкозу, маннозу, мальтоэу, глицерин. Слабо усваивает сахарозу, эскулин. Не усваивает целлобиозу, арабинозу, лактозу, сорбит, 1121

-т

Виды комаров ЛК, через 24 ч, спор/мл ! штаммы

BTS-393

I 0NR-60À (WH0) CCBC 1987

, Goldberg

Aedes aegypti 1,0 ° 10

1,1 ° 10

Anopheles

stephensi

1,1 10

2,0 10

Anopheles

atroparvus

1,9 ° 10

Anopheles

saeharovi

1,3 10

Culex piз

p iens mo les tus 6,0 10

0,3 10

Техред М.Ходанич Корректор Л IIazaA

Редактор О . Ходакова

Заказ 3932/2

Тираж 679 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

3 дульцит, маннит, салмин. Крахмал гидролизует.

Отношение к источникам азота. Использует аммонийные и нитратные формы азота. Нитраты восстанавливает.

Растет на комплексных органических средах, используя азотные соединения, входящие в состав кукурузного экстракта, мясной воды, кукурузной муки, хлопкового шрота, дрожжевого автоли- 1О зата.

Хитин не разлагает.

Продуцирует ацетилметилкарбинол и лецитиназа.

Отношение к фагам. Собственные фа-15 ги не продуцирует. Устойчив к производственным штаммам фагов Bacillus

thuringiens

dendrolimus.

Антагонистические свойства. Йе проявляет антагонизма к штаммам Вас .

thuringiensis i-12 и 14 серотипов.

Патогенные свойства. Обладает токсичностью для личинок комаров Aedes

aegypti,, Anopheles atroparvus, An. 25

sacharovi, An. stephensi u Culex pipiens moles II-IV возрастов (см. таблицу). Не токсичен для гусениц пчелиной огневки и непарного шелкопряда, белой американской бабочки, . капустной белянки.

Пример. Для получения посевного материала культуру Н 14 N BTS-393, выращенную на СПА, переносят в колбы емкостью 100 мл с 10 мл кукурузноглюкозной среды рН 6,8-7,2. Культи35 вирование проводят при 30 С на круговой качалке, 240 об/мин. Через

48 ч роста споровая посевная культура в количестве 1-2 об.7 вносится

40 в ферментатор, содержащий 20 л дрожже-полисахаридной среды, рН 6,8-7,2.

Процесс ферментации осуществляется при 30 С, непрерывной работе мешалки и подачи стерильного воздуха в количестве 0,5 объема на 1 объем среды до 6 ч роста и 0,8 объема воздуха на 1 объем среды от 6 ч роста

806 4 до начала спорообразования. При полном спорообразовании и появлении единичных зрелых спор расход воздуха снижают до начального уровня (0,5 объема воздуха на 1 объем среды).

Титр жизнеспособных спор в 1 мл культуральной жидкости к концу культивирования достигает 3,0-3,5 млрд.

Для выращивания штамма в условиях глубинного культивирования используют более дешевую и доступную дрожжекукурузную среду, широко применяемую для производства энтомопатогенных: препаратов. (Применение среды позволяет повысить энтомоцидную активность культуры в отношениях кровососущих видов комаров в 10-20 раз по сравнению со штаммом ONR2 — 60A. .Патогенность культуры Bac.thuringiensis для личинок II возраста кровососущих комаров