Способ получения ингибитора полимеризации фибрина

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА ПОШ1МЕРИЗАЦИИ ФИБРИНА из сыворотки крови, вкпючакиций отделение фибриногена, диализ сыворотки через целлофан, вьтаривание диализата и отделение ингибитора от низкомолекулярных соединений, отличающи и с я тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта и ускорения процесса, диализ проводят через целлофан с порами диаметром 1,66-1,82 X, а отделение ингибитора -от низкомолекулярных примесей проводят гель-ф€льтрацией на сефадексе -15 в присутствии 0,040 ,05 М аммонийно-ацетатного буфера с рН 7,4-7,6. (Л

СОЮЗ СОНЕТСНИХ

СОЗВЗ В . РЕСПУБЛИК

asl 01) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н llBTOPCNOMV C TSV

ЯМЩИК. ГОСУДАРС ГНЕННЬЙ. КОМИТЕТ СССР

Fl0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3534869/28-13 (22) 11. 11 ° 82 (46) 07.11.84. Бюл. У 41 (72) Е.А. Чирятьев и И.К. Умутбаева (7 1) Тюменский медицинский институт (53) 577. 15 (088 .8) (56) 1. Белицер В.А., Варецкая Т.В., Цинкаловская С.Н., Позднякова Т.М, Толстых В.М. Выделение и исследование высокомолекулярного триптического фрагмента фибриногена.

Укр. биохим. журнал, 1972, т. 44, с. 4.11-41.7.

2. Авторское свидетельство СССР

У 1044274, кл. А 61 3 10/00, 1981.

З(51) С 12 N 9/48 А 61 В 10/00 (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА ПОХЙМЕРИЗАЦИИ ФИБРИНА из сыворотки крови, включающий отделение фибриногена, диализ сыворотки через целлофан, выпаривание диализата и отделение ингибитора от низкомолекулярных соединений, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта и ускорения процесса, диализ проводят через целлофан с норами диаметром

1,66-1,82 А, а отделение ингибитора -от низкомолекулярных примесей проводят гель-фильтрацией на сефадексе g -15 в присутствии 0,040,05 М аммонийно-ацетатного буфера с рН 7,4-7,6.

1! 22695

Изобретение относится и медицине, а именно к способам выделения факторов, тормозящих процесс полимеризации (самосборки) биополимеров, и может быть использовано для получения ингибитора полимеризации в це" лях уточнения представлений о его свойствах., структуре и механизме участия в процессе полимеризации фибрина

Известен способ получения ингибитора полимеризации фибрина из плазмы крови, включающий выделение фибриногена высаливанием, гидролнз фибриногена трипсином, диализ, хроматографию на КМ-целлюлозе и лиофилизацию Pj .

Недостатки способа — сложность, длительность процесса (350 ч) и получение целевого продукта, содержащего в качестве примеси низкомолекулярные соединения.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ получения ингибитора полимеризации фибрина из сыворотки крови, включающий отделение фибриногена, диализ сыворотки через целлофан типа купрофан со средним диаметром пор 2,04 А, выпаривание диализата и отделение ингибитора от низкомолекулярных соединений с помощью хроматографии на ДЭАЭ-сефадексе А 25 f2).

Недостатками известного способа являются длительность (80,5 ч) и присутствие примесей (аминокислот) в целевом продукте.

Цель изобретения — повьиаение чис- 40 тоты целевого продукта и ускорение процесса.

Поставленная цель достигается тем, что при способе получения ингибито- 45 ра полимериэации фибрина из сыворотки крови, включающем отделение фибрииогена, диализ сыворотки через целлофан, выпаривание диалиэата и отделение ингибитора от ниэкомолеку- О лярных соединений, диализ проводят через целлофан с порами диаметром

1 66-1,82 А, а отделение ингибитора от .низкомолекулярных примесей проводят гель-фильтрацией на сефадексе

g-15 в присутствии 0,04 - 0,05 М аммонийно-ацетатного буфера с рН 7,47,6.

Сущность способа заключается в том, что замена целлофана "Купвофан" со средним диаметром пор 2,05 А на целлофан T-100 С диаметром пор 1,661,82 А обеспечивает более эффективное отделение высокомолекулярных соединений от ниэкомолекулярных, что исключает необходимость дополнительной очистки на ДЭАЭ-сефадексе А 25, а гель-фильтрация на сефадексе позволяет получить чистый целевой продукт.

Пример 1. 10 мл стабилизированной цитратом натрия (3,8Х, 9:1) плазмы крови нагревают на водяной бане (56 С) в течение 10 мин, затем полученную сыворотку освобождают от выпавшего фибриногена центрифугированием (1 250 я, 15 мин). Освобожденную от фибриногена жидкость (сыворотку) днализируют через целлофан Т-100 (диаметр пор 1,66-1,82 А) против дистиллированной воды (1:50), сменяя воду через каждые 4 ч (всего

4 раза).

Диализ через целлофан Т-100 приводит к получению препарата, свобод-. ного от белковых высокомолекулярных примесей, тогда как при диализе через "Купрофан" не происходит полного отделения белков.

Порции диализата концентрируют выпариванием на кипящей водяной бане по мере их получения.

Полученный концентрированный диализат (2-3 мл) вносят в колонку с сефадексом . Q -15, уравновешенную 0,04 М аммонийно-ацетатным буфером при рН 7,4. Элюируют этим же буфером, собирая фракции по 2 мл и в каждой иэ них определяют наличие ингибитора полимеризации. Порции элюата, содержащие ингибитор полимеризации, объединяют и удаляют летучий буфер выпариванием на выпарительных чашках (кипящая водяная баня) до полного удаления буферного раствора. Сухой остаток на чашках растворяют в необходимом количестве дистиллированной воды — целевой продукт. Выход продукта 997.

Пример 2. Проводят по примеру 1, но при гель-фильтрации используют буферы с другими параметрами: 0,05 М с рН 7,6 (выход 98,0X), 0,05 М с рН 7,.4 (выход 97,4X) и

0,04 М с рН 7,6 (выход 97,0X).

Составитель В. Муронец .

Редактор И. Николайчук Техред Т.Маточка Корректор А. Тяско

Заказ 8100/23 Тиразк 521

:ВНИИПИ Государственного.комитета СССР по делам изобретений .и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рауаская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г.. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 1 122695 4

Длительность, процесса получения рафии на бумаге в системе бутанолг ингибитора и его чистота не изменяют- ледяная уксусная кислота — вода ся при варьировании параметров бу- в соотношении 4:1:5 (двукратное фера в указанных пределах. пропускание) и 4:1: 1 (двукратное

Время, .необходимое для получения g пропускание) не содервит примесей ингибитора, составляет 25.,5 ч. аминокислот.

При многократном применении спосо- Таким образом, предложенный ба выход ингибитора 97-1003.от его способ позволяет получать ингибитор содержания в исходном материале. полимеризации фибрина, свободный

Получаемый предлагаемым способом 10 от примесей, а такие в 3,5 раза усцелевой продукт по,данным хроматог- корить процесс .