Способ получения 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина

 

U. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 9-

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (!9) (3!) (51)4 С 07 П. 473/18

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТ У

ОН

R-co-HN но о

0Н

1.осУДАРст 1еннцй KQMHTET cccP

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬПИЙ (21) 3443852/23-04 (22) 20.05.82 (31) 267 210 (32) 21.05.81 (33) US (46) 30.08.85. Бюл. Р 32 (72) Джульен И Верхейден, Be Джон

С Мартин (0$) (71) Синтекс (Ю,С,А.) Инк (US) (53) 547.857.7.07(088.8) (56) Патент США Ф 4199574, класс

424.200.

К. К. 0gilvie, N. P. Gillen Ring

open analogues îf deoxynucleotides.

Tetrahedron Letters. 21, 325-330 (1980) .. (54) (P7) 1» СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ (1 3-ДИОКСИ-2-ПРОПОКСИЯтИЛ) ГУАНИЧА общей формулы или его солей с щелочными металлами, заключающийся в том, что гидролизуют соединение формулы И: б где R — низший алкил, с получением 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина и при необходимости преобразуют 9-(1,3-диокси-2-пропокси. метил) гуанин в соль щелочного металла или производят обмен катиона щелочного металла в соли 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина.

1176

Изобретение относится к способу получения 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина-, основанному на известном методе и его солей, щелочных металлов, обладающих противовирус-5 ной активностью

f0 . . ы

Н2 О но-

ОН

Целью изобретения является получение нового соединения 9-(1,3-диок-.. си-. 2-пропоксиметил)гуанина, обладающего преимуществами в противовирусной активности по сравнению со структурными аналогами того же .действия, А

Пример 1. (А) Получение N—

-ацетил-9-(1,3-дибензилокси-2-пропоксиметил)гуанина.

N 9-диацетилгуанин (15,61 r, 66 ммоль), 2-0-ацетоксиметил-1,3-дибензилглицерин (19 г, 55 ммоль) и . бис в (и-нитрофенил)фосфат (0,5 r) перемешивают вместе со 150 мл ди- З0 этилового эфира. Растворитель отгоняют и остаток нагревают при 175 С на о масляной бане в течение 1,5 ч в токе азота. Хроматография в колонке приэлюировании метанолом/метиленхлоридом (1:9) и последующая перекристаллизация из этипацетата дают 4,76 г

N -ацетил-9-(1,3-дибензилокси-2-про1 поксиметил)гуанина т.пл. 145-146 С, (Б) Получение N -ацетил-9-(1,3- 40

-диокси-2-пропоксиметил)гуанина.

К раствору 11 -ацетил-9-(1,3-диz бензилокси-2-пропоксиметил) гуанина (4,62 г, 9,67 ммоль) в 150 мл метано..ла плюс 40 мл воды добавляют 20%-ную 45 гидроокись палладия на угле в виде суспензии в 10 мл воды. Смесь гидрируют в гидрогенизагоре. Парра при давлении водорода 4,2 кг/см в тече- . ние 38 ч затем фильтруют через целит 50 и концентрируют до белого твердого вещества. Перекригталлиэация из мег танола/этилацетата дает 1,4 r N -ацетил-9-(1 3-диокси-2-пропоксиметил)

У о гуанина, т,пл. 205-208 С. 55

Матсчный раствор затем восстанавливают 10% палладия на угле (1 r) в

150 мл метанола плюс 50 мл воды при

841 г

60 фунт/кв. дюйм (4,2 кг/смг) в течение 47 ч, Общий выход N --ацетил-92

1 — (1, 3-диокси-2-пропоксиметил) гуанина составляет 2,11 г. (В) Получение 9- (1,3-диокси-2-пропоксиметил) гуанина.

N -ацетил-9-(1,3-диокси-2-пропокг симетил)гуанин (721,9 мг, 2,4 ммоля) перемешивают с 50 мл метанольного раствора аммиака (метанол, насыщено ный аммиаком при О С) в течение 17 ч. при 21 С. Раствор концентрируют до о белого твердого вещества, а остаток перекристаллизовывают из метанола с получением 582,3 мг 9-(1,3"диокси-2-пропоксиметил)гуанина, т.пл. 250 С ,(с разложением), Пример . 2. 9-.(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанин растворяют в водном растворе, содержащем один .моль-эквивалент гидроокиси натрия.

Раствор затем лиофилизуют с получением натриевой соли 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина в виде белого порошка: УФ Ъ „„, = 265 мм; 1 = 11400.

Пример 3. Натриевую соль

9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил) гуанина растворяют в минимальном количестве воды и добавляют разбавленную хлористоводородную кислоту для доведения рН до 7. Иэ раствора кристаллизуют 9†(1,3-диокси -2-пропоксиметил) гуанин. т.пл., 250 С.

Пример 4. В раствор натриевой соли 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина (0,83 r, 3 ммоль) в воде (10 мл) добавляют хлористый аммоний (0,48 г, 9 ммоль) и полученный раствор охлаждают до .О С. Полученные кристаллы отфильтровывают и сушат. Затем их растворяют в 100 мл воды, содержащей KOH (0 17 г, 3 ммоль).

Полученный раствор вымораживают и- затем лиофилизуют для получения калиевой соли 9 †(1,3-дигидрокси-2-пропоксиметил)гуанина.

Пример 5. К раствору натриевой соли 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил) гуанина (0,83 г, 3 ммоль) в воде (10 мл) добавляют хлористый аммоний (0,48 r 9 ммоль) и полученный раствор рхлаждают до 0 С, Кристаллы о выделяют фильтрацией, вакуумной сушкой и затем концентрируют из М„Я-диметилформамида (10 мл) остаток

1 подвергают взаимодействию с гексаметилдисиланом (5 мл) в И М вЂ диметилз 1176 формамиде (10 мл) в течение 5 ч с последующим добавлением пиридина (1О мл)

i и изобутилангидрида (10 мл).

Полученный раствор перемешивают

18 ч. Затем добавляют метанол (20 мл)

Раствор упаривают до объема приблизительно 15 мл. и продукт осаждают добавлением в соотношении 1:1 раствора диэтилового эфира гексана (50 мл).

Осадок перекристаллизовывают из !0 смеси 2:1 метанол/сода, получая 9†(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина.

Пример 6.. Раствор N -ацетил-9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил) гуанина (0,89 r 3 ммоль) в метаноле (40 мл) прибавляют в концентрирован-.

I ный раствор гидроокиси аммония (10 мл), перемешивают 24 ч при комнатной температуре, затем концентрируют и осадок подвергают вакуумной сушке.

Остаток затем растворяют в воде (100 мл), содержащий NaOH (0,12 r, 3 ммоль). Полученный раствор вымора- 25 живают и амофилизуют с получением натриевой соли 9-(1,3-диокси-2-пропоксиметил)гуанина.

Пример 7. Исключительная противовирусная активность соедине- . ния согласно изобретению иллюстрируется следующими данными.

В клеточных культурах. НЕр-2 подготавливают вирус Негрех sineplez

1»штамм 6 для инфицирования. Вирус ад-;— сорбируют 1 ч, на клетки помещают свежую среду и все это инкубируют при 35 С до тех пор, пока не будут о инфицированы все клетки. Суспензию клеток замораживают при (-70) 0С от- 4р таивают и центрифугируют для удаления клеточных обломков..Бадосадочную жидкость сливают и хранят в за841 4 мороженном состоянии при f-70) С до употребления, 1.0 разведение над6,7 осадочной жидкости дает 503-ную инфицирующую дозу 50Х-ной .клеточной культуры (CC1Dso) в клетках НЕр-2;

1,г а 1 0 разведение дает 507-ный летальный: Hexog (С qo) Hcl Mbllssx

Группы по 20 мышей самок Swiss

Webstev (15-17 г) заражают " внутрибрюшинно с использованием 0,2 мл

ЕМЕМ, содержащего вирус в количестве 10 с D жппь. Мьппей заражают количеством вируса в 1Оц раз боль-. ше ипи меньше, чем доза 10(.D 0

50 у служащая в качестве контроля вирулентности, что сделано для обеспечения работоспособности модели.

Лечение испытуемыми соединениями начинают через 6 ч после заражения.

Мышам, поделенным на группы по 20 особей, вводят соединения в соленом растворе в количестве 5 мг/кг, 10 мг/кг и 20 мг/кг. Одна группа из

20 особей используется как контроль и получает солевой физиологический раствор. Лечение повторяют спустя

24, 48, 72 и 96 ч после заражения;

Испытуемые соединения: соединение согласно изобретению и три соединения, описанные в патенте.США.. й= 4199574, имеющие частичное структурное сходство с соединением согласно изобретению (таблица).

Приведенные результаты наглядно демонстрируют сравнение между числом выживших животных, получавших соединение согласно изобретению, и числом выживших животных, получавших три иэ" вестных соединения, что дает ясное представление об исключительно высокой противовирусной активности описываемого соединения.

1176841 исло выживших особей из 20 сут. после заражения

Испыт, соединенйе

Доза, мг/кг

"Ъ

Контроль (без лечения) 0.0

0- (1, 3-Дибензокси-2-пропоксиметил)аденин

0

9-. (1,3-Дибензокси-2-пропоксиметил)-6-меркаптопурин

10

20

9- (1-Гидр ок си-2-э ток симе тил) гуанин

20 9-(1,3-Дигидрокси-2-пропоксиметил)гуанин

14

18

18

20

15

Тираж 384 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений-.и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5380/56

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Составитель 10. Белоусов

Редактор М. Келемеш Техред З.Палий Корректор С. Шекмар