Способ разделения мононуклеарных фагоцитов на субпопуляции
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ НА СУБПОПУЛЯЦИИ путем фракционирования исходной суспензии клеток, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, клетки последовательно инкубируют в градиенте температуры 4-37°С на полистироловых чашках , предварительно обработанных 0,25%-ной фетальной телячьей сывороткой , и субпопуляции мононуклеарных фагоцитов получают в виде монослоя .
(19) ((>) СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
2 А (51j4 G 01 N 33/48 н у
-.ч
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСН0МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУД АРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3622962/28- 13 (22) 14.07.83 (46) 15.09.85. Бюл. 1(- 34 (72) С.В.Родионов, В.И.Пантин, И.Г.Макаренко и В.М.Земсков (53) 578.085.23 (088.8) (56) Се1LuLar ImmonoLogy. v. 38, 1978, р. 94-104. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ IIOHOНУКЛЕЛРНЫХ ФЛГОЦИТОВ НА СУБПОПУЛЯЦИИ путем фракционирования исходной суспензии клеток, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью упрощения способа, клет .и последовательно инкубируют в градиенте температуры 4-37 С на полистироловых чашо ках, предварительно обработанных
0,257.-ной фетальной телячьей сывороткой, и субпоиуляции мононуклеарных фагоцитов получают в виде Мо нослоя.
179223
Составитель В.Дроздов
Редактор М.Петрова Техред А.Бабинец Корректор В. Синицкая
Заказ 5666/45 Тираж 897 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
1 1
Изобретение относится к иммунологии и цитологии.
Цель изобретения — упрощение способа.
Пример. Разделение резидентных перитонеальных макрофагов.
Получают суспензию клеток перитонеального эксудата.от 30-35 интактных мышей самцов линии Г, (C8AxCC57B) весов ?0-25 r. На культуральных чашках из полистирола, предварительно пбкрытых 0,25Х-ной. фетальной телячьей сывороткой (ФТС), производят адгеэию полученных клеток в культуральной среде 199 с
0,25_#_-.сой ФТС и 20 мМ НЕРЕ-буфера при рН б,9 прн температуре 4оС в течениv. 1 ч. Затем неприлипшие клетки переносят на другие чашки для о адгеэии при 10 С в течение 1 ч. Далее суснензию клеток, неприлипших о при 10 С, переносят на новые чашки ,и проводят адгезию при 28 С 1 ч.
1 .Ha последнем этапе неприлипшие при о о
28 С клетки инкубируют при 37 С 1 ч, добавляя в среду ФТС до 10Х конечной концентрации. Все полученные в
1 виде монослоев субпопуляции тщательно отмывают для удаления лимфоцитов.
Для определения активности ферментов клетки лизируют дистиллированной
5 водой путем трехкратной процедуры замораживания-оттаивания. Для каждой иэ субпопуляций перитонеальных макрофагов определяют следующие показатели: число клеток, активность лактатдегидрогеназы, одного из ключевых ферментов гликолиза, активность цитохромоксидазы, ключевого фермента окислительного фосфорилирования, активность оргинаэы, ключевого фер15 мента цикла мочевины и одного из основных ферментов катаболиэма аминокислот, а также уровень Гс рецепторов, являющихся ключевыми структурами для осуществления макрофагами фа20 гоцитарного процесса, медиирования неспецифических и специфических иммунологических реакций.
Каждая иэ полученных субпопуляций перитонеальных макрофагов харак"
25 теризуется своими отличительными свойствами, различия между субпопуляциями носят достоверный характер,
