Способ выявления эндотелиоцитов в стенке кровеносных сосудов

 

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ЭНДОТЕЛИОЦИТОВ В СТЕНКЕ КРОВЕНОСНЫХ СОСУДОВ путем перфузии сосуда раствором азотно-кислого серебра, гематоксилина и последующего приготовления гистологических препаратов, отличающийся тем, что, с целью одновременной окраски ядер и контуров границ клеток эндотелия, перед перфузией азотно-кислого серебра в сосудистое русло вводят раствор Рингера с гепарином, а затем стенку сосуда многократно инъецируют г 50-60%-ным раствором гематоксилина и после видимой покраски сосудов осуществляют их промьюку водопроводной водой в смеси с глицерином в течение 510 мин. сл с

(l9) (! !!

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

О 9 А (5!) 4

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3658188/28-13 (22) 02.11.83 (46) 23.09.85. Бюл. М - 35 (72) И.И.Бобрик, Е.А.Шевченко, В.Г.Черкасов, А.И.Парахин и Я.М.Ена (71) Киевский медицинский институт им. акад. А.А.Богомольца (53) 615.475 (088.8) (56) Чернокульский С.Т. Микроциркуляторное русло периметрия и смежных с ним участков брюшины человека.

Канд. дис. Киев: 1974, с. 41-42. (54)(57) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ЭНДОТЕЛИОЦИТОВ.В СТЕНКЕ КРОВЕНОСНЫХ СОСУДОВ путем перфузии сосуда раствором азотНо êèñëîãî серебра, гематоксилина и последующего приготовления гистологических препаратов, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью одновременной окраски ядер и контуров границ клеток эндотелия, перед перфузией азотно-кислого серебра в сосудистое русло вводят раствор Рингера с гепарином, а затем стенку сосуда многократно инъецируют ." 50-60Х-ным раствором гематоксилина и после видимой покраски сосудов осуществляют их промывку водопроводной водой в смеси с глицерином в течение 5. 10 мин.

l I 80739 ираж 896 Подписное

Изобретение относится к экспериментальной медицине, точнее к гис-, тологическим способам окраски ткани.

Целью изобретения является одновременная окраска ядер и контуров 5 границ клеток эндотелия.

Способ выявления эндотелиоцитов в стенке кровеносных сосудов осуществляют следующим образом.

Согласно известному способу, 10 включающему введение в сосудистое русло раствора азотно-кислого серебра, окраску ядер гистологическими красителями и приготовление просветленных препаратов, перед введением в сосудистое русло раствора азотнокислого серебра осуществляют перфузию сосудистого русла раствором Рингера с гепарином, производят последовательную инъекцию сосудистого 20 русла 50-60Х-ным раствором гематоксилина и промывку сосудов водопроводной водой с глицерином в течение

5-10 мин.

Указанная концентрация раствора 25 гематоксилина для инъекции кровеносного русла позволяет эффективно окрасить ядра эндотелиоцитов. Раствор гематоксилина свыше 60Х использовать не следует, так как при этом ядра 30 перекрашиваются и появляется дополнительный этап обработки кровеносного русла слабым раствором соляной кислоты для дифференцировки ядер. Если концентрация раствора гематоксилина менее 50, то ядра эндотелиоцитов слабо окрашиваются и препараты получаются некачественными. После инъекции сосудистого русла раствором гема. токсилина необходима промывка водо- 4р проводной водой, имеющей слабо щелочную реакцию. В течение указанного времени при перфузии сосудистое русло отмывается от избытка ядерного красителя, а слабо щелочная реакция водопроводной воды способствует тому, что ядра, окрашенные гематоксилином, приобретают синий цвет, Если промывка водопроводной водой длится менее

5 мин, то качество препаратов значи- 5р тельно снижается. Если промывать сосудистое русло более 10 мин, наблюдается гидротация тканей, что также отрицательно сказывается на качестве препаратов. 55

ВНИИПИ Заказ 5912/40 .Т

Пример. Кровеносное русло освобождают от форменных элементов крови путем перфузии раствором Рингера с добавлением гепарина по общепринятой методике. Затем инъецируют сосудистое русло 55Х-ным раствором гематоксилина до тех пор, пока сосуды, видимые невооруженным глазом, не приобретут красный цвет. Затем русло промывают водопроводной водой с глицерином в течение 7 мин. После этого кровеносное русло инъецируют

0,15Х-ным раствором азотно-кислого серебра. Инъекцию раствором азотнокислого серебра проводят до тех пор, пока сосуды не приобретут белый цвет. После этого. инъекцию прекращают. Извлекают орган, необходимый для исследования. Приготовление просветленных препаратов производят по общепринятой схеме. При последующем микроскопическом изучении полученных препаратов определяются коричневые (темно-коричневые в артериолярных звеньях гемомикроциркуляторного русла и светло-коричневые в венулярных микрососудах) контуры границ эндотелиоцитов, а их ядра окрашиваются в темно-лиловый цвет.

По сравнению с известным способом предлагаемый менее трудоемкий и менее длительный, так как позволяет исключить этап гистологической окраски полученных просветленных препаратов, который длится 2-3 ч. Предлагаемый способ позволяет одновременно выявить ядра и контуры границ эндотелиоцитов, в то время как окружающие ткани остаются неокрашенными, что значительно улучшает качество полученных препаратов и повышает их информативность.

Предлагаемый способ отличается надежностью, хорошим качеством получаемых препаратов и высокой информативностью, он позволяет на одном срезе одновременно определить контуры границ эндотелиоцитов и характер расположения их ядер, что имеет большое значение для изучения звеньев специфичности и органоспецифичности эндотелиоцитов гемомикроциркуляторного русла различных органов. филиал ППП "Патент", r.Óæãoðîä, ул.Проектная, 4