Способ аффинной хроматографии биологически активных веществ

 

1. СПОСОБ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ виологачЕски АКТИВНЫХ ввищств отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, комплекс лиганд-аффинант хроматографируют на сорбенте при, градиенте концентрации соли 0,02-1,5 М. 2. Способ по П.1, отличающийся тем, что, с целью повьшения степени чистоты, целевой продукт хроматографируют на сорбенте, у которого молекулярная масса исключения равна молекулярной массе лиганда, а нижний предел разрешения равен молекулярной массе аффинанта.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) (51)4 В 01 D 15 08

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbITMA (21) 3650787/28-14 (22) 10. 10. 83 (46) 30. 10.85. Бюл. № 40 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии (72) М.И.Болезнин, Е.Л.Моисеева и В.В.Смолянинов (53) 543.544(088.8) (56) J. Biochem., 1982, 91, р. 1411-1417. (54) (57) 1. СПОСОБ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ,. отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, комплекс лиганд-аффинант хроматографируют на сорбенте при градиенте концентрации соли 0,02-1,5 М.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения степени чистоты, целевой продукт хроматографируют на сорбенте, у которого молекулярная масса исключения равна молекулярной массе лиганда, а нихний предел разрешения равен молекулярной массе аффинанта. З (1 11878

Изобретение относится к биохимии, в частности к способам получения и очистки макромолекул из микробиологического и другого вида сырья.

Целью изобретения является ускоре- g ние способа, повышение степени чистоты целевого продукта.

Пример. 1, Колонку2,5 М 95см с Сфероном 1000 (пределы разрешения по мол.м. для белков 800000-5000000) 10 уравновешивали 1,5 л 20 мМ Трис-НС1 буфера, рН 7,5, содержащего 1,5 M KCl.

Затем в колонку вводили линейный градиент концентрации КС1 от 1,5 .до

0,1 M (160 мл) со скоростью 70 мл/ч. 15

3 мл раствора альбумина (20 мг) в

10 мМ Трис-НС1 буфере рН 7,5, содержащем 0,1 М КС1 и 60 мг голубого декстрана (мол.м. 2000000), наносили на колонку вслед за градиентом соли 2б и промывали 10 мМ Трис-НС1 буфером, рН 7,5 — 0,1 М КС1. Профиль элюции альбумина показан на фиг.1. Для срав- . нения показан профиль элюции альбуми35 2 на, полученный при хроматографии его без голубого декстрана. На фиг.2 показана денситограмма, полученная после электрофореза альбумина до и после очи с тки указанным с посо бом.

Пример 2. Колонку 1,6Х 40 см с Toyopearl — 75Г (пределы разрешения по мол.м. для белков 5 00000—

50000000) уравновешивали 0,3 л 0,05 М натрий-ацетатным буфером (pH 4,0), содержащим 1,5 М КС1 со скоростью

60 мл/ч. Затем в колонку вводили градиент концентрации КС1 от 1,5 до

0,05 M (30 мл). 0,8 мл смеси, содержащей 3 мг ДНК тимуса теленка и

3,0 мг ДНКазы 1 в 0,05 М натрий-ацетатном буфере (рН 4,0),.наносили на колонку вслед за градиентом соли и промывали 0,05 M натрий-ацетатным буфером (рН 4,0), содержащим 0,05 М

КС1. Первой с колонки элюировалась

ДНК, затем ДНКаза 1 (2,48 мг) и следом примеси, загрязняющие препарат фермента.

1187Я35

1 187835

ИапраЬение элекяроц)ореза

ИаораВление эиектро роре за

Фиг. 2

ВНИИБИ Заказ 7 188 Тираж 658 Поднисное

4ипиал ШШ "Пагеат", г.Ужгород., уя.йроектмая, 4