Способ хроматографического разделения веществ

 

СПОСОБ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВ, включающий многократное прохождение пробы разделяемых веществ в потоке подвижной фазы циркуляцией через две последовательно соединенные хроматографические колонки, отличающийся тем, что, с целью снижения потерь разделяемых веществ при обеспечении их концентрирования, пробу после прохождения через колонку смещивают с потоком элюента, элюирующая сила которого меньще элюирующей силы подвижной фазы. (Л 00 00 00 Од

СОЮЗ СОВЕТСНИХ Ъ

РЕСПУБЛИК..SU„„1187836 A

ИО4 В 01 Р 1508

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3782596/23-26 (22) 16.05.84 (46) 30.10.85. Бюл. № 40 (72) М. П. Забокрицкий, В. В. Ландау, Н. В. Стерхов, Э. П. Скорняков, В. В. Ульяшин и В. П. Чижков (71) Всесоюзный научно-исследовательский и конструкторский институт хроматографии и Специальное конструкторское бюро института органической химии СО АН СССР (53) 543.544 (088.8) (56) Чижков В. П,, Матюков А. А., Гуревич Я. А. Циркуляционная установка с устройством для импульсно-термического обогащения хроматографических зон.

Заводская лаб., 1971, № 9, т. 37. с. 1038—

1041.

Авторское свидетельство СССР № 345433, кл. G Ol N 31 08, 1972. (54) (57) СПОСОБ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВ, включающий многократное прохождение пробы разделяемых веществ в потоке подвижной фазы циркуляцией через две последовательно соединенные хроматографические колонки, отличающийся тем, что, с целью снижения потерь разделяемых веществ при обеспечении их концентрирования, пробу после прохождения через колонку смешивают с потоком элюента, элюирующая сила которого меньше элюирующей силы подвижной фазы.

1187836

Изобретение относится к хроматографии, преимущественно препаративной, и может быть использовано при разделении и анализе трудноразделяемых веществ.

Целью изобретения является снижение потерь разделяемых веществ при обеспечении их концентрирования.

На чертеже изображено устройство, реализующее предлагаемый способ, Устройство состоит из двух хроматографических колонок 1 и 2, входы которых соединены с восьмиходовым циркуляционным краном 3, канала 4 для подачи основного потока подвижной фазы, соединенного через устройство для ввода пробы 5 с одним из входов циркуляционного крана 3, детектора 6, установленного в циркуляционной схеме между колонками 1 и 2 и соединенного с ними через соответствующие каналы в циркуляционном кране 3, канала 7 для подачи дополнительного потока подвижной фазы и сумматора потоков 8, в котором осуществляется смешивание основного и дополнительных потоков подвижной фазы.

Пример l. Разделение выполняют в хроматографической системе из двух колонок по 250х25 мм, собранных в циркуляционную схему согласно чертежу. Колонки наполнены сорбентом — Силасорб-С 1g с частицами 10 мкм. Подвижная фаза (основной поток) — ацетонитрил-вода (80:20), дополнительный элюент — ацетонитрилвода (60:40). Скорость основного потока

10 мл/мин, а дополнительного 1,5 мл/мин.

Давление на входе в систему 48 атм, температура комнатная, детектор УФ-254 нм.

Пробу вводят с помощью крана-дозатора с объемом петли 200 мкл. Разделяемая смесь — антрацен и фенантрен по 30 мг каждого.

После прохождения пробы через первую колонку (регистрируется с помощью детектора) в сумматор потоков подают дополнительный элюент, элюирующая сила которого вследствие уменьшения содержания ацетонитрила уменьшается. Вместе со смешанным элюентом проба поступает во вторую колонку (регистрируется детектором по исчезновению сигнала от разделяемых соединений) . Переключением циркуляционного крана 3 (чертеж) в эту колонку подают основной поток, обладающий большей элюирующей силой. При этом происходит сжатие хроматографической зоны из-за большей скорости движения задней границы зоны. Одновременно поворот крана 3 обеспечивает изменение последовательности соединения колонок и колонка 2 становится первой по ходу движения подвижной фазы.

Количество циклов движения веществ пробы через хроматографические колонки для полного разделения указанной смеси составляет !О. Фракционирование указанных соединений не сопровождается потерями

55 вещества и характеризуется их концентрированием (объем элюата после 10 циклов, в котором распределена проба, составляет

25 мл).

По сравнению с известным способом при том же количестве циклов концентрирование выше в 3 раза (1,2 мг/мл разделенных веществ по сравнению с 0 4 мг/мл), при этом исключены потери веществ. Потери веществ при осуществлении известного способа составили 17О/р.

Пример 2. Хроматографические колонки 1 и 2 заполняют окисью алюминия.

Циркуляционную хроматографию осуществляют в парах воды в смеси с гелием. В сумматор потоков подают чистый гелий. Производят разделение углеводородов. Вследствие снижения парциального давления пара после смешения с основным потоком. гелия увеличивается адсорбционная активность алюмогеля, и зона разделяемых веществ сжимается (фронт зоны замедляет продвижение по колонке) .

Таким образом, происходит концентрирование храм атографической зоны без потери разделяемых веществ.

Пример 3. Колонки заполняют сорбентом с октадецилсилильной привитой фазой.

Циркуля ционную хроматографию проводят в потоке проявителя, представляющего смесь метанол-вода. Разделению подвергают смесь фенилтионидантоиновых производных аминокислот, удерживание которых в хроматографии на неполярных адсорбентах с полярными элюентами (водаметанол) возрастает с увеличением концентрации воды в растворе подвижной фазы.

В промежуток между колоннами осуществляют непрерывную подачу потока с большим содержанием воды. В результате смешивания основного и дополнительного потоков во вторую по ходу движения элюента колонку подается проявитель с меньшей элюирующей силой. После поступления разделяемой. смеси во вторую колонку кран 3 (чертеж) поворачивают так, что последовательность соединения колонок меняется на обратную и на вход второй колонки поступает элюент с болыпей элюирующей силой (основной поток) . Происходит сжатие хроматографической зоны без потерь ра здел я ем ых ве ществ.

Пример 4. Хроматографические колонки заполняют катинообменной смолой.

Циркуляционную хроматографию осуществляют в потоке проявителя, представляющего собой цитратный буфер с рН 4,2

В случае разделения смеси свободных аминокислот наблюдается увеличение их удерживания с повышением рН подвижной фазы. В промежуток между колонками непрерывно подают поток элюента с большим значением рН (т. е. меньшей элюирующей силой) . Это приводит к снижению

1187836

Составитель С. Староверов

Техред И. Верес Корректор М. Максимишинец

Тираж 658 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, ж — 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор Т. Митейко

Заказ 6578/6

3 элюирующей силы суммарного потока, с которым разделяемые вещества поступают во вторую по ходу движения колонку.

Переключением циркуляцион ного крана в эту колонку подают основной поток (колонка становится первой по ходу движения разделяемых веществ), обладающий меньшим рН, а значит большей элюирующей силой. Задняя часть хроматографической зоны приобретает большую по сравнению с фронтом скорость и происходит концентрирование зоны разделяемых веществ.