Способ диагностики туберкулеза

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) )7 А

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTWI (21) 3747760/28-14 (22) 05.06.84 (46) 15.03.86. Бюл. У 10 (71) Лейинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток, Ленинградский ордена Трудового Красного Знамени педиатрический медицинский институт и 1-й Ленинградский медицинский институт им. акад. И.П.Павлова (72) Э.А.Степанова, В.Б.Галкин, С.Н.Головачева, А.М.Яковлев и 3.И.Костина (53) 615 ° 373(088.8) (56) Степанова Э.А. и др. Иммунофлуо.ресцентный метод при диагностике туберкулеза. " Пробл. туберкулеза, 1973, У 11, с. 23-25.

СЮ4 А 61 К 39/00 А 61 В 10/00 (54)(57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА .путем обработки фиксированного на стекле туберкулезного антигена равным объемом исследуемой сыворотки с последующим нанесением меченой .антиглобулиновой сыворотки и выявлением специфических антител в люминесцентном микроскопе, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения точности, на стекле, фиксируют 0 05Х-ную взвесь эритроцитов, сенсибилизированных туберкулезным антигеном, а исследуемую сыворотку берут в разведении

1:4.

Изобретение отнрсится к медицине и может быть использовано для серологической диагностики туберкулеза.

Цель изобретения — упрощение способа и повышение его точности за счет фиксирования на стекле 0,05Хной взвеси эритроцитов, сенсибилиэированных туберкулезным антигеном.

Способ осуществляется следующим образом.

Для проведения реакции непрямой иммунофлуоресценции эритроцитарный антигенный туберкулезный диагностикум разводят физиологическим раствором до получения 0,05Х-ной взвеси.

Для каждой пробы на стекло наносят по О, 1 мл этой взвеси, которую высушивают и фиксируют в сухожаровом шкафу при 60 С в течение 50 мин ° аНа фиксированный диагностикум наносят по 0,1 мл сыворотки крови обследуемых в разведении 1:4 и инкубируют в течение 30 мин при 37 С и

6 относительной влажности 80-100Х ° Полученные препараты отмывают от непрореагировавшей сыворотки сначала физраствором, а затем водо" проводной водой по 10-15 мин, после чего их высушивают при комнатной температуре.

Пример 1. Больной Б., 45 лет. В детстве перенес туберкулез ннутригрудных лимфатических узлов.

В течение месяца отмечал общую слабость, сухой кашель, боли н левой половине грудной клетки. При флюорографическом обследовании обнаружены изменения н легких.

Госпитализирован с диагнозом: диссеминированный туберкулез легких?, леносторонняя пневмония? При рентгенотомографическом обследовании выявлена ячеистая деформация легочного рисунка с инфильтрацией по ходу сосудов и бронхов в основании верхней доли справа и сливная очаговая инфильтрация в С и у корня легкого слева. После курса противопненмонической терапии отмечен частичный положительный рентгенологический эффект.

В целях дифференциации туберкулеза и-пненмонии больной был обследонан предлагаемым способом. Для этого эритроцитарный антигенный т уберкулезный диагностикум разводят физиологическим раствором до получения

1217417 1

0,05Х-ной взвеси, которую наносят на стекло н количестве 0,1 мл, высушивают и фиксируют в сухожаровом шкафу при 60 С в течение 50 мин.

На фиксированный диагностикум наносят 0,1 мл сыворотки крови обсле" дуемого в разведении 1:4 и инкуби" руют в течение 30 -мин при 37 С и относительной влажности 80-100 .

1Î Полученный препарат промывают физраствором и водопроводной водой до 1015 мин и высушивают при комнатной температуре. Далее препарат обрабатывают антиглобулиновой антивидо15 вой люминесцирующей сынороткой

О, 1 мл в разведении 1:16, термостатируют при 37 С в течение 30 мин при относительной влажности 80100i. и тщательно промывают физиоло20 гическим раствором и нодой. На высушенный препарат наносят забуференный раствор глицерина и покрывают покровным стеклом.

При просмотре мазка в люминес25 центном микроскопе при увеличении

2250 отметили специфическую люминесценцию антигена н виде светящихся точек на поверхности эритроцитов.

Специфичность реакции контролируют щ путем просмотра мазков, не обработанных сывороткой исследуемого, и препаратов из нормальных эритроцитон барана, обработанных двухступенчатым методом. В контрольных

35, препаратах отмечали отсутствие спе цифического свечения. На основании результатов исследования сделали заключение о туберкулезной этиологии заболевания. В дальнейшем вы4 явление бактериологическим методом микробактерий туберкулеза в промывных водах бронхов подтвердило диагноз: диссеминированный туберкулез легких в фазе инфильтрации, БК+, В,цанном случае предлагаемым способом была проведена дифференциальная диагностика туберкулеза и неспецифического воспалительного заболевания легких.

П р и и е р 2. Больной К,, 47 лет.

Перенес н 1980 году очаговый тубер" кулез верхней доли правого легкого.

Прошел курс лечения с положительным эффектом. Последние 2 года туберкулезный процесс расценивался как неактивный. При контрольном флюорографическом обследонании выявлено незначительное нарастание изменений н легких. Госпитализирован

Составитель П.Бонарцев

Техред А.Бабинец Корректор E. Сиромах

Редактор М.Дылын

Заказ 1025/8 Тираж 659 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП ".Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

3 1 для определения активности туберкулезного процесса.При рентгенотомографическом обследованиив верхнейдоле правого легкого — скопление очерченных интенсивных очагов. Проведенные исследования и клинический анализ крови больного были в пределах нормы. Активность туберкулеза была сомнительной.

В целях определения активности туберкулезного процесса больной был обследован предлагаемым способом аналогично примеру 1.. В полученном препарате наблюдали специфическое свечение, на основании чего было сделано заключение о наличии активного туберкулеза. В дальнейшем диагноз: очаговый туберкулез верхней доли правого легкого в фазе инфильтрации, БК- (обострение) был подтвержден положительным эффектом от противотуберкулезного лечения.

В данном случае предлагаемым способом быпо проведено определение активности туберкулезного процесса.

Пример 3. Больная М., 59 лет.

При профилактическом флюорографическом обследовании выявлены изменения в С правого легкого. Госпитализирована с диагнозом: инфильтративный туберкулез С правого легкого, БК-.

При рентгенотомографическом исследовании в С правого легкого обнаружено неоднородное затемнение Зх4 см с бугристыми контурами. Природа патологического образования быпа неясна.

В целях дифференциации туберкулеза и злокачественной опухоли боль217417 4 ная была обследована предлагаемым способом. В препарате, полученном( аналогично примеру 1, специфического свечения не наблюдалось.

На основании этого было сделано заключение о нетуберкулезной этиологии заболевания. Исходя из результатов обследования больной предлагаемым способом и данных клинико10 рентгенологического обследования, выставлен окончательый диагноз: рак нижнедолевого бронха правого легкого..

Впоследствии больная была проопериоована. диагноз был подтвержден гистологически, В данном случае предлагаемым способом была проведена дифференциальная диагностика между туберкулезом и онкозаболеванием легкого.

2О Достоверность обследования предлагаемым способом на 10Х выше, чем известным (88,6-78,6 = 10,0X) при уровне значимости р > 0,05. При этом достигнуто также упрощение способа за счет изъятия операции приготовления мазков из предварительно выращенных микробактерий туберкулеза, что позволяет повысить технику безопасности. Кроме того, достигается экономия расхода сыворотки больного (предлагаемый способ по существу является микрометодом, так как на 1 анализ достаточно 0,025 мл сыворотки крови, что позволяет брать кровь из пальца, тогда как для постановки РНГА необходимо 2-3 мл крови, из которой получают 0,5 мл сыворотки, поэтому был необходим забор крови из вены) .