Способ определения диссоциации оксигемоглобина

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ 1220637 (51) у А 61 В 5 00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

1Ф - --.-..

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3680866/28-14 (22) 21. 12.83 (46) 30.03.86. Бюл. № 12 (71) Казахский научно-исследовательский институт онкологии и радиологии и Институт зоологии АН КазССР (72) Т. Э. Старова, 3. С. Токтамысова и Б. С. Балмуханов (53) 511.111.2;612.11.11/.13(088.8) (56) Brittain F. J. СЬегп. Education, 1982, v. 59, № 3, р. 253 — 255. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИССОЦИАЦИИ ОКСИГЕМОГЛОБИНА путем внесения в полярографическую ячейку эритроцитов и биологического объекта, потребляющего кислород с постоянной скоростью, инкубации, определения напряжения кислорода и регистрации непрерывной кривой диссоциации оксигемоглобина, отличаюи1ийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве биологического объекта используют взвесь пекарских дрожжей в концентрации 3,3 — 10 мг/мл, а объемная концентрация эритроцитов составляет 0,015 вЂ,075.

1220637

log — — =и log (О), 1 — Y

Составитель Н. Гуляева

1зедактор Е. Копна Техред И. Верее Корректор В. Ьутяга

Заказ 1506, 4 Тираж 659 1!одписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раугвская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», .-. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к физиологии, а именно к разделу адаптации к гипоксии, и может быть использовано для изучения газотранспортной функции крови.

Цель изобретения — упрощение способа.

Пример. В термостатируемую ячейку с мягким перемешиванием магнитной мешалкой, содержа1цую l мл глицил-глицинового буфера (рН 7,4), вносят 0,2 мл цельной крови или суспензии эритроцитов (р как в цельной крови), предварительно уравновешенной по кислороду с атмосферой. После установления рО в образец добавляют

0,02 мл взвеси пекарских дрожжей, поглощающих кислород с постоянной скоростью, для чего их преинкубируют в том же буфере (10 мин, 37 С, 10 мМ глюкозы, 300 мг сырых коммерческих дрожжей/мл). Ячейку герметизируют. Изменения рО регистрируют электродом типа Кларка.

Записывают изменения р02 в ячейке при внесении взвеси дрожжей: в отсутствие цельной крови, эритроцитов, в присутствие цельной крови, в присутствие суспензии эритроцитов, в присутствие суспензии эритроцитов, предварительно инкубированных 40 мин с ингибитором гликолиза — кверцитином (2,5 10 М) . Для построения кривых диссоциации оксигемоглобина из полярографической записи для каждого значения р02 определяют степень насыщения гемоглобина кислородом — У. У находится как отношение количества кислорода, поглощенного в данный момент времени, к максимальному количеству поглощенного кислорода. В соответствии с уравнением Хилла где N — коэффициент Хилла (мера кооперативности);

Y — степень насыщения гемоглооина ! о кислородом, Скорость поглощения кислорода клетками дрожжей не зависит от условий эксперимента. Запись одной полярографической кривой занимает менее 30 мин. Кривая дис-!

5 социации оксигемоглобина суспензии интактных эритроцитов смещена вправо по отношению к кривой диссоциации цельной крови, а кривая диссоциации оксигемоглобина эритроцитов, инкубированных с кверцетином,— влево. Получаем аналогичные смещения кривых диссоциации оксигемоглобина суспензии интактных эритроцитов влево под влиянием других и нгибиторов гл икол из а (дитиопиридин, монофодацетат), фтористый натрий). Всего за 60 мин измерено 10 кривых диссоциации оксигемоглобина, причем скорость потребления кислорода клетками дрожжей в течение опыта не менялась. Линейность графиков Хилла свидетельствует об истинности измеренных кривых диссоциации оксигемоглобина в физиологических пределах оксигенации гемоглобина.