Способ определения устойчивости эритроцитов

 

СОЮЭ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„,, 1219967 A (ä! 4 6 О1 М 33/48 А 61 В 5 00

ВС тю!тq :- . „.,,,!3

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (56) Бенисович В.Н. Йдельсон Л.И.

Вопросы медицинской химии, 1973, Ф 6, с.595-599. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ путем забора крови, получения взвеси эритроцитов, К ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ 21) 373301 2/28-14 (22) 29.04.84 (46) 23.03.86. Бюл. !! 1! (71) Ордена Ленина и ордена Трудо: вого Красного Знамени научно-исследо-.. вательский институт педиатрии

AMH СССР (72) В.В.Банкова и Ю.А.Юрков (53) 616.155.1 (088.8) инкубации и определения степени гемолиза и содержания малонового диальдегида, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью сокращения количества крови, необходимого для анализа, и времени определения, инкубацию проводят в течение 1015 мин, затем пробу центрифугируют, определяют степень гемолиэа в супернатанте, смешивают супефйатант и осадок и определяют в этой пробе содержание малонового диальдегида, а устойчивость эритроцитов определяют по отношению содержания малонового диальдегида к степени гемолиза, которое пропорционально устойчивости эритроцитов.

Группы детей

Доношенные новорожденные, и 15

Г группа недоношенных детей, и = 1.5

3,05+0,75

6,06+0,35

t I

Изобретение относится к медицина, а именно к способам определения мембранных нарушений у новорожденных при различных патопогических процессах, сопровождающихся изменениями липидной пероксидации.

Цель изобретения — сокращение количества крови, необходимого для анализа, и времени определения.

Пример осуществления способа, 0 15 мл (3-4 капли) крови помещают в пробирку с 3 мл физиологического раствора с цитратом натрия (100 мл+

+ 20 мл 0,2 и раствора соответственно). Эритроциты трижцы отмывают физраствором и 0,07 мл отмытых эрит,роцитов разбавляют 1,33 мл 25 rn

М Трис-НС1. буфера (РН=7,4) . Затем в три пробирки помещают по 0,4 мл . взвеси эритроцитов. В первую пробирку добавляют 0,43 мл буфера и

0,02 мл 1%-ного раствора сапонина, во вторую — 0,45 мл буфера, в третью — 0,3 мл буфера . + 0,1 мл

0,5 мМ аскорбата.и 0,05 мл

0,3 мМ раствора сернокислого железа. Вторую и третью пробирки помещают в баню при 37 С на 10 мин, непрерывно помешивая, затем центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин и в надосадочной жидкости определяют выход гемоглобина по отношению к пробе с полным гемолизом (проба 9 1 с сапонином). При этом надосадочную.жидкость переносят в кювету для счета пастеровской пипеткой и после измерения экстинции при

532 им полностью сливают в ту же пробирку, перемешивая осевшие эритроциты. Затем в эту же пробу добавляют 0,5 мл 30 ТХУ, 0,15 мл 5 н, Соляной кислоты и 0,6 мл 0,67 -ной тиобарбитуровой кислоты. Пробы. встряхивают и ставят в баню при 9095 С на 20 мин, развившуюся окраску после осаядения осадка спектрофотометрируют при 532 нм, Расчет про219967 В водится по коэффициенту молярной экстинции, равному 1,56 х 10, и ответ выражают в наномолях малонового диальдегида (МДА) на 10

5 эритроцитове

В таблице показано количество

МДА в эритроцитах, степень гемолиэа эритроцитов и коэффициент устойчивости (отношение этих параметров)

10 у доношенных и недоношенных детей в первые 10 дней их жизни.

Как видно из таблицы, у недоношенных детей с небольшим сроком недоношенности (гестационный возраст 36 недель) и без видимых отклонений в весе тела и развитии (наиболее благополучные" новорожденные, 1 группа) степень гемолиза и количество МДА в эритроцитах вьппе, gp чем у доношенных новорожденных, тогда как коэффициент устойчивости у первых не изменен. Эти данные указывают на то, что у недоношенных детей 1 группы, несмотря на повышенное образование МДА в эритроцитах, нет.его накопления и, видимо, структурно-функциональные свойства зритроцитов не нарушены. У недоношенных детей 1I группы с тем же гестационным возрастом, но с внутриутробной гипотрофией (маловесные к сроку), отмечается еще большее количество МДА в эритроцитах, но без увеличения их...аутогемолиза в условиях, in vitro.,Êîýôôèöèåíò устойчивости значительно увеличен.

Еще более повышенным этот коэффициент у детей с глубокой недоношенностью, у которых чаще отмечаются энцефалопатии (наиболее "неблагополучные"дети).

Таким образом, коэффициент ус тойчивости пропорционален степени устойчивости мембран эритроцитов и

45 указывает на степень изменения структурно-функциональных свойств мембран эритроцитов.

2,16+0,42 0,54+0,10

3,83+0,30 0,65+0,063

1219967

Продолжение таблицы 3 Ф

1,7710,22

4,60+0,42

2,89+0,32

5,83+0,62 2,92+0,65

2,50+0,45 %

Р <,0 05 с группой доношенных новорожденных, P i 0,05 с Х группой недоношенных детей.

Редактор Т.Кугрышева

Заказ 1317/52 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r..Ужгород, ул. Проектная, 4

П группа недоношенных детей

И= 16

Ill группа недоношенных детей, h= 14

Сост авит ель Н . Гуляев а

Техред В.Кадар Корректор С.Шекмар