Способ идентификации пневмококка и зеленящего стрептококка

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 22 4 A (51)4 С 2N 1 0

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

"Ь.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3702694/28-1 4 (22) 08. 12.83 (46) 07.04.86. Бюл. № 13 (71) Львовский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (72) Л.В.Колотилова и Л.К. Клепикова (53) 576.8.093. 1(088.8) (56) Лабораторное дело, ¹ 2, 1983, с. 54. (54)(57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПНЕВМОКОККА И ЗЕЛЕНЯ!ЦЕГО СТРЕПТОКОККА путем посева исследуемого материала на кровяной агар, инкубирования посевов в присутствии антибиотика с последующим пересевом выросших колоний на питательную среду, инкубированием и дифференциацией культур, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, выделенные колонии пересевают на питательную среду с локально засеянной культурой стафилококка, дающего неполный гемолиз, после инкубирования определяют степень гемолиза и при повышении степени гемолиза в зоне роста исследуемой культуры идентифи. цируют ее как пневмококк, а при отсутствии такового — как зеленящий стрептококк.

122267.4

Составитель E.ßðíûõ

Техред И.Попович Корректор И.Эрдейн

Редактор Т.Кугрышева

Заказ 1668/24 Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1130350 Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии..

Целью изобретения является ускорение способа, Способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый клинический материал (мокрота, заднеглоточная слизь, экссудат) засевают на чашку с питательным агаром, содержащем 5% кро— ви человека или животных, водный раствор генцианвиолета 1:500000 и дополнительно полимиксин M сульфат

50-100 ед/мл. Генцианвиолет и полимиксин М в указанных концентрациях полностью ингибируют рост посторонней микрофлоры и обеспечивают рост микроорганизмов рода Стрептококкус.

Посевы инкубируют в течение 20-24 ч о при 37 С. Выросшие колонии, подозрительные на пневмококк, отсевают на агар с 5 крови барана и одновременно подсевают стафилококк, образующий неполный гемолиэ бараньих эритроцитов. После 20-24 ч инкубации при о

37 С учитывают характер гемолиза вокруг, стафилококка, в секторе роста пневмококка происходит усиление гемолиза в отличие от других oL-гемолитических стрептококков, не изменяющих характер гемолиза.

Пример, Для посева исследуемого клинического материала готовя: среду, содержащую кровь человека:л. животных, генцианвиолет и полимиксин М сульфат. Для этого к 94 мл стерильного расплавленного и остужено ного до 50 С питательного агара добавляют 5 мл дефибринированной крови человека или животных, 0,2 мл 0,1 .— ного водного раствора генцианвиолета и 1 мл раствора полимиксин М сульфата (одну таблетку, содержащую

500000 ед. антибиотика, растворяют в 100 мл стерильной дистиллированной воды). Среду разливают в чашки и на .них прозводят посев клинического материала. После 24 ч инкубации при о

37 С посевы просматривают и отсевают подозрительные на пневмококк колонии — мелкие, плоские, полупрозрачные, окруженные небольшой зоной позеленения, возникшей вследствие превращения гемоглобина в метгемоглобин.

Колонии отсевают секторами на чашку с питательным агаром, содержащим 5 .

10 крови барана, и одновременно з центре чашки подсевают бляшкой стафилококк. Для этого подбирают BITGMM стафилококка, способный образовывать зону неполного гемолиэа бараньих

15 эритроцитов радиусом не менее 2 мм.

На одну чашку производят посев до восьми исследуемых культур. Через

24 ч инкубации при 37 С определяют характер гемолиза вокруг бляшки ста2р фнлококка. Усиление гемолиза свидетельствует о росте пневмококка. При отсутствии феномена усиления гемолиза посевы выдерживают сутки при ком-натнои температуре„ так как некото25 рые штаммы пневмококка дают этот феномен через 48 ч. Культуру, .з секторе ро та которой отмечалось усилеННс гемолиза, микроскопируют, испытываю.. на чувствительность к желчи в реакции агглютинации со специфи- еской сывороткой.

При проведении исследований 546 эталонных и свежевыделенных штаммов

35 о -гемолитнческих (зеленящих) стреп— тококков установлено, что феномен усиления гемолиза бараньих эритроцитов вызывают 91,7 штаммов пневмококков. Другие зеленящие стрептококки не изменяют характер гемолиза вокруг стафилококка °

Использование изобретения облегчает выделение пневмококка из клинического материала, содержащего сопутствующую микрофлору, и сокращает продолжительность анализа до трех суток.