Способ прогнозирования выхода жизнеспособного потомства по инкубируемой икры рыб на ранних стадиях эмбриогенеза

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) Ш 4 А 01 К 61/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР (21) 3825155/28-13 (22) 05. 11. 84 (46) 15. 04.86. Бюл. Ф 14 (7i) Научно-производственное объединение по промышленному и тепловодному рыбоводству (72) А.А.Ахмедов, Б.К.Каримов, Л.А.Лесников и Н.M.Àðøàíèöà (53) 639.3.034(088.8) (56) Шиндавина Н.И. Ранний прогноз выживаемости эмбрионов радужной форели.. — Рыбное хозяйство, 1983, В5, с. 30-31.

Инструкция по выдерживанию производителей, сбору, оплодотворению и инкубации икры, выдерживанию и подкашиванию личинок лосося в условиях северо-западной части СССР.

М.: Пищепромиздат, 1955.

Инструкция по искусственному разведению тихоокеанских лососей.

M., 1958. (54) (57) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВЫХОДА ЖИЗНЕСПОСОБНОГО ПОТОМСТВА ИЗ ИНКУБИРУЕМОИ ИКРЫ РЫБ НА РАННИХ СТАДИЯХ

ЭМБРИОГЕНЕЗА, преимущественно радужной форели, включающий отбор пробы икры, окрашивание и визуальную оценку состояния эмбрионов, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения надежности и точности прогнозирования при одновременном упрощении способа, пробу отбирают на стадии крупноклеточной бластулы, окрашивание проводят в водном растворе смесью красителей — тетранитротетразоле" вого синего и феназинметасульфата, взятых в количестве 40-50 и 10-14 мг на 1 л раствора, в котором икру выдерживают в течение суток при 20—

22 С, визуально оценку проводят по интенсивности окрашивания икринок, при этом о проценте выхода жизнеспособных икринок судят по доле икринок, неокрашенных и имеющих точечную окраску в области бластодиска.

122

3866

Изобретение относится к рыбному хозяйству, в частности к рыбоводству, и предназначено для прогнозирования выхода жизнеспособного потомства при промышленном разведении .таких лососевых рыб, как радужная форель.

Цель изобретения — повышение надежности и точности прогнозирования выхода жизнеспособного потомства из инкубируемой икры на ранних стадиях эмбриогенеза и упрощение способа.

Согласно предлагаемому способу применение смеси красителей позволяет дифференцировать от нормально с развивающихся эмбрионов не только неоплодотворенные икринки, но и оплодотворенные, но развивающиеся аномально, что способствует повышению эффективности форелевых хозяйств при одновременном сокращении трудоемкос-. ти процесса и снижении требований к уровню квалификации рыбоводов.

Способ осуществляют следующим образом.

Приготовляют раствор красителей тетранитротетразолевого синего (ТНТС), и феназинметасульфата (ФМС). Готовый раствор сохраняет свое качество в течение двух суток при выдерживании в темноте, при 2-4 С. Берут пробу икры на стадии крупноклеточной бластулы в. количестве 100-200 шт., помещают в чашки Петри и заливают раствором красителя в соотношении 50 мл на 100 шт. икринок, после чего чашки с пробой помещают в темное место о и выдерживают при 20-22 С. Через сутки чашки с пробой ставят на белую бумагу и в течение 10-15 мин проводят визуальный анализ окрашивания.

При этом отбирают икринки не окрашенные и приобретшие точечную окраску в области бластодиска, подсчитывают их и по их суммарной доле в пробе судят о вЫходе жизнеспособного потомства.

Неоплодотворенные икринки окрашиваются более 1/10 части поверхности желтка. Икринки оплодотворенные, но аномально развивающиеся, окрашиваются менее 1/10 части поверхности желтка, но окраска расплывчатая. Икринки оплодотворенные и нормально развивающиеся не окрашиваются или приобретают точечную окраску в области бластодиска, т.е. окрашивается только бчастодиск

Предварительно приготовили водные растворы ТНТС и ФМС в двух разведениях каждый, содержащих эти компоненты на 1 л раствора в количествах

40,0 и 50,0 мг первый и 14,0 и 10,0 второй, отвечающих граничным значениям концентрации согласно предлагаемому способу, и два раствора ТНТС с концентрациями, содержащими 30,0 и 60,0 мг вещества на 1 л раствора.

Из приготовленных растворов составили их смеси в восьми сочетаниях каждого из четырех разведений ТНТС с каждым из двух разведений ФМС.

Для реализации способа использовали часть икры радужной форели из производственной закладки на инкубацию, которая была осеменена 13.03.84.

На четвертые сутки инкубации

17.03.84 по достижении стадии крупноклеточной бластулы из этой партии отобрали 2000 икринок. Отобранную икру разделили на пять равных групп по 400 шт. в каждой. Опыты при каждом значении концентрации раствора основного красителя ТНТС, а также в

5

1О

25 контроле проводили в двух партиях по

200 шт, в каждой. Окрашивание проводили в чашках Петри. Выдерживание икры в смеси красителей проводили при 21 С. Экспозицию икринок в смео си растворов красителей проводили через 0,5 сут, через 1 сут и через

1,5 сут.

Пример 1. B два водных раствора красителя, содержащих ТНТС и ФМС в количестве 40,0 мг и 10 мг (а) соответственно и 40 мг и 14 мг (б) соответственно, помещали по

200 шт. икринок, которые вьдерживали вначале 0,5 сут, затем 1 сут и

1,5 сут.

Пример 2. В два водных раствора красителя, содержащих ТНТС и ФМС в количестве 50 мг и 10 мг (a) соответственно и 50 мг и 14 мг (6) соответственно, и помещали по 200икринок, которые выдерживали при условиях, аналогичных примеру 1.

Пример 3. В два водных раствора красителя, содержащий ТНТС и ФМС в количестве 30 мг и 10 мг (а) соответственно и 30 мг и 14 мг (6) соответственно, помещали такое же количество икринок в аналогичные условия,как в примере 1.

1223866 а

Содержание в I л раствора,мг

Количество икринок по характеру окрашивания при выдержке в течение, су-т

Пример

1,5

1,0

0,5

I шт Уа штà 7o IUT ° Ж

ТНТС ФМС шт. 7 шт. шт. Ж

1а

40,0 10,0 0 и 200 100 29 14,5 171 85,5 58 29,0 142 71,0

0 200 100 31 15,5 169 84,5 58 29,0 142 71,0

40,0 14,0 0

Всего в опыте

400 100 60 15,0 340 85,0 116 29,0 284 71,0

50,0 10,0 0 0 200 100 31 15,5 169 84,5 58 29,0 142 71,0

2а

0 200 100 33 16,5 167 83,5 60 30,0 140 70,0

50 0 140 0

Всего в опыте

400 100 64 16,0 336 84,0 118 29,5 282 70,5

0 200 100 28 14,0 172 86,0 57 28,5 143 71,5

0 200 100 29 14,5 171 85,5 56 28,0 144 72,0

Зо

30,0 10,0 0

300 140 0

Всего в опыте

400 100 57 14,2 343 85,8 113 28,2 287 71,8

Пример 4. Вдваводных раствора, содержащих ТНТС и ФМС в количестве 60 мг и 10 мг (а) соответственно и 60 мг и 14 мг (б) соот, ветственно, помещали такое же количество икринок в аналогичные условия, как в примере 1.

Результаты осуществления способа по примерам приведены в таблице.

Из таблицы видно, что при всех концентрациях растворов ТНТС и ФМС в течение 0,5 сут не происходит окрашивания бластомеров, по которым можно судить о жизнеспособности икринок.

Наибольшее совпадение доли жизне-! способных икринок с контролем оказалось при окрашивании красителем ТНТС в концентрациях 40,0 мг и 50 мг, при концентрациях ФМС 10 мг и 14 мг на литр в течение одних суток. В этих условиях отход икры, определенный путем окрашивания, составил 16Х, а в контроле — 17K. Окрашивание икринок в течение 1,5 сут при всех концентрациях растворов приводило к их большему отходу 29-347.

Таким образом, доля икринок, неокрашенных и получивших точечную окраску бластодиска через сутки экспозиции в смеси растворов красителей от общего количества икринок в каждой партии, служила основанием для прогнозирования процента выхода жизнеспособного потомства в исходной партии икры.

Кон гроль инкубации икры проводили кристаллизаторах, в которых воду

1 меняли два раза в сутки. Температура воды, в которой развивалась контроль,ная партия икры, была 6 — 7 С; содеро жание кислорода, растворенного в воде — не менее 9,0 мг/л; рН 7,3. Контрольную партию икры продолжали инкубировать при указанных условиях в течение 62 дней, вплоть до вылупления

20 личинок (15.05.84) и вели налюдения за личинками в течение 10 дней (до 26.05,84). Отход икры и личинок в контроле составил 17Х.

Сопоставление данных в таблице с

25 результатами контроля показывает, что осуществление способа согласно предлагаемому режиму дает результаты, хорошо согласуемые с контролем.

1223866

Продолжение таблицы

Пример

0 5

1,0

1,5

I ТТ

ТНТС Фмс шт. 7 m7 . (7 шт. 7 шт. 7 шт. 7 шт. Х

60,0 10,0 0 0 200 100 40 20,0 160 80,0 70 35,0 130 65,0

60,0 14,0 0 0 200 100 42 21,0 158 79,0 68 34,0 132 66,0

4а

Всего в опыте

П р и м е ч а н и е. I — икринки со значительной и расплывчатой окраской — доля отхода, II — икринки неокрашенные и с точечной окраской, доля жизнеспособных„

Редактор С.Лисина

Заказ 1851/1 Тираж 679 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Содержание в 1 л раствора,мг

Количество икринок по характеру окрашивания при выдержке в течение, сут

400 100 82 20,5 318 79,5 138 34,5 262 65,5

Составитель О.Якименко

Техред В.Кадар Корректор Е.Сирохман