Способ получения фосфолипидов из микроорганизмов
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ с;
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
llO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3673599/28-13 (22) 15.12.83 .(46) 15.04.86. Бюл. N - 14 (71) Всесоюзный научно-исследователь ский институт особо чистых биопрепаратов (72) И.В. Камышенцев (53) 665.3(088.8) (56) J. Biol. Chemistry, 1977., 226, с. 497.
J. BioEogicaE Chemistry, 1963, 238, с, 29. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФОЛИПИДОВ ИЗ МИКРООРГАНИЗМОВ, включающий получение биомассы, предвариÄÄSUÄÄ 1224335 A
» 4 С 12 И 1/Об (С 12 m 1/Об, С 12 R1:01 тельную обработку ее трихлоруксусной кислотой, экстракцию с использованием метанола и хлороформа в качестве экстрагента, отделение из полученного экстракта целевого продукта и промывку его водным раствором солей, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода,улучпения качества фосфолипидов и сокращения времени процесса, хлороформ и метанол берут в виде смеси при их соотношении (О,5:1)-(2:1), экстракцию ведут при комнатной температуре, а экстракт перед отделением целевого продукта нейтрализуют едким кали.
1224335 2 раствора гидроокиси калия и продолжают перемешивание. в течение 3 мин.
Затем центрифугируют, верхнюю фазу декантируют и высушивают в токе бэста, получая "неочищенную", форму препарата, а затем промывают водным солевым раствором в течение 1 мин.
Продолжительность процесса 2,5 ч, выход 21,7 мг/г. Получсн препарат
10 чистьпл, без белковых примесей.
Пример 2. Способ осуществляется, как в примере 1, но обработке подвергают биомассу бактерии Saccha
romyces cerevisiae, а соотношение
15 хлороформа и метанола составляет
0,5: 1, продолжительность процесса
2,3 ч, выход 21,51 мг/г.
Получен препарат чистый, без белковых примесей.
20 Сравнительные данные представлены в табл. 1.
Таблица
l I
При25 меР
21, 7 Чистый, без бел2,5 ковых примесей
2,3
21,51 То же
Прототип !
1,8
1,45 Белковые примеси
Выход,, Качество мг/г
Хлороформ:метанол 0,1:1
0 5:1
1,0:1
2,0:1
4,0:1
10,0:1
10,34
16,37
18,52
18, 54
Примеси
Чистый
То же
4,82 Примеси
4,21
То же
Изобретение относится к биотехнологии и касается способов получения фосфолипидов микробиологическим путем.
Целью изобретения является повышение выхода, улучшение качества фосфолипидов и сокращение времени процесса.
Согласно данному способу обработка едким кали создает оптимальные условия вьделения "cI Такая обработка приводит к увеличению степени денатурации примесей, не затрагивал фосфолипиды, что позволяет повысить качество продукта. Способ осуществляется следующим образом. Биомассу микроорганизмов обрабатыI3QfoT трихлоруксусной кислотой (ТХУ) до 5-87. конечной концентрации. К суспензии прибавляют свежеприготовленную смесь хлороформа и метанола при соотношении (0,5: 1) -(2:1), интенсивно перемешивают в течение 3-5 мин при комнатной температуре и в перемешиваемую смесь медленно в течение 1-2 мин добавляют водньпл раствор гид- 35 роокиси едкого кали до состояния нейтрализации смеси в объеме, соответствующем 1/5 объема смеси, центрифигируют для разделения смеси на две фазы (4000 д, 10 мин), отбирают нижний хлороформовый слой, содержащий фосфолипиды, получая "неочищенную" форму препарата, затем хлороформовый слой промывают равным объемом водного солевого раствора в течение 45 1-2 мпн и высушивают его в токе азота. П р и и е р 1. Биомассу бактерий Esclierichia co1i И-17 в количестве 8,9 r равномерно распределяют в восьми центрифужных стаканах по l00 мл. В каждый стакан приливают по 0,2 мл 57.-ного раствора ТХУ. Перемешивают в течение 2 мин и вливают в нее 30 мл свежеприготовленной смеси хлороформа и метанола 2: I продолжают 55 перемешивать в течение 4 мин при комватной температуре, после чего добавляют в течение 1,5 мин 6 мл водного Время про- Выход Качество цесса, ч продук- продукта та,мг/г Зависимость. выхода продукта и его качества от соотношения хлороформа и метанола представлена в табл. 2. Таблица 2 1224335 вышается возможно белковых Составитель E.Буданцева:. ТехредН.Бонкало Корректор JI. Патай Редактор Н. Швыдкая Заказ 1893/25 Тираж 490 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретен я и открытий 113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 При использовании предлагаемого способа сокращается время процесса по сравнению с известным в 20 раз, по4 выход в 14 раз, кроме того, получение фосфолипидов без примесей.
