Способ определения сульфгидрильных групп в крови

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

Ы11 4 А 61 В 5 00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /. " :::: ., "

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ /

1 I

f (21) 3627098/28-14 (22) 13.05.83 (46) 07.05.86. Бюл. № 17 (71) Ленинградское научно-производственное объединение «Буревестник» (72) В. В. Добрынина, Ю. А. Липкович и В. А. Демин (53) Л616-07 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 167471, кл. А 61 В 5/00, 1963.

„.SU,„, 1228809 д1 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП В КРОВИ путем смешивания аммиачного буферного раствора, раствора азотно-кислого серебра и исследуемой пробы с последующей регистрацией диффузионного тока, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и сокращения времени исследования, пробу добавляют к буферному раствору, затем приливают раствор азотнокислого серебра при молярном соотношении с сульфгидрильными группами 1:(1,5 — 2), а диффузионный ток измеряют однократно.!

228809

Изобретение относится к биохимии, в частности к способам физико-химического (электрохимического) анализа крови на содержание сульфгидрильных (SH)-групп.

Цель изобретения -- повышение точности способа и сокращение времени исследования за счет изменения последовательности добавления реагентов и определенного соотношения азотно-кислого серебра и сульфгидрильных групп.

Способ осуществляется следующим образом.

Вначале пробу крови приливают к буферному раствору, затем добавляют раствор азотно-кислого серебра в количестве, заведомо большем, чем необходимо для связывания сульфгидрильных групп в крови, в соотношении с сульфгидрильными группами 1: (1,5— -2) и измеряют диффузионный ток, по величине которого с помощью номограммы определяют содержание сульфгидрильных групп.

Пример. 0,1 мл исследуемой крови гемолизируют в бидистиллированной воде при разведении 1:20, 0,5 мл полученного гемолизата переносят в электролитическую ячейку,содержащую 20 мл буферного раствора

NH4OH и NH< NO>. Затем добавляют

0,6 мл 0,001 М раствора азотно-кислого серебра. Далее измеряк>т диффузионный ток, характеризующий концентрацию избытка ионов серебра, оставшихся в исследуемом растворе, по величине которого определяют содержание SH-групп. При этом исследовательская установка снабжена номограммой, на которой отражена линейная зависимость диффузионного тока, измеряемого на последней стадии анализа, от концентрации избыточного азотно-кислого серебра.

Для повышения точности определения указанная линейная зависимость (для данного комплекта аппаратуры) может быть выражена простейшей формулой. Сила тока зависит от концентрации электролитов в растворе и от величины потенциала. При амперометрических исследованиях разность потенциалов между двумя электродами электролитической ячейки поддерживают постоянной, что позволяет по силе тока судить о величине (и за изменением) концентрации электролитов в растворе.

Учитывая, что мл 0,001 М раствора азотно кислого серебра эквивалентен 1 мкМ сульфгидрильных групп, содержание которых обычно относят к !00 мл субстрата, формула имеет вид — количество SH-групп субстрата на 100 мл крови, в мкМ 100 мл; — объем исследуемого субстрата, мл; степень разбавления крови; — объем раствора 0,001 М азотнокислого серебра, мл; — масштабный коэффициент, определяемый для данного комплекта аппаратуры в холосто vl опыте, в м кМ/м кЛ; диффузионный ток, соответствуюидй избытку А О>, мкА; — фоновой диффузионный ток, мкЛ.

lДЕ Я

11çè постоянных условиях опыта (степень разбавления, объемы используемых растворов) формула может упроститься: — (> (1I 1о), 20 где с = 100 — — а.V „

V, К анализируемому раствору (гемолизату, растворенному в буферном растворе NH40Н и NH,INO;I), не содержащему электроактивных ;îìïîíåíòîâ, которые могли бы обусловить диффузионный ток более — 2 мкА, добавляют избыпгок раствора ANNO>. Последний взаимодействует с имеющимися SHгрупг.ами анализируемого раствора, в результате чего диффузионный ток, измеряемый после этой добавки, соответствует концентрации избыточной части введенного азотнокислого серебра. Зная исходное количество

Ау(1) ионов и величину их остатка, по израсходованному количествч определяют концентрацию SH-групп (С = С,>,) .

Б описываемых условиях опыта V,h

05 мл; а = 20; Vg,, = 06 мл;

h =-= 40 мкМ/мкЛ; 1 = 32 мкЛ;

4О II> =- 1 мкА. Тогда S = 1160 мкМ/100 мл.

При постоянных условиях опыта (постоянны степень разбавления, объемы исследуемого субстрата и раствора азотно-кислого серебра) С = 2400 мкМ/100 мл и S также равно 1160 мкМ/100 мл.

В таблице приводятся дополнительные примеры па средние и граничные значения соотношения количеств SH-групп и

ANNO;I при определении SH-групп в 0,1 мл крови.

1228809

ОтносительДлительность ананая погрешность опрелиза, мин

4-5

+1,6

1220

1:1,5

4-5

-2,0

1176

1:1,75

4-5

1216

+1,2

1:2

Составитель Н. Гуляева

Редактор Г. Гербер Техред И. Верес Корректор В. Бутяга

Заказ 2208/1 Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Молярное со- Количество отношение SH-групп, (SH): (AgN0q) мкМ/100 мл деления

SH-групп

ЛБ, 7.