Штамм @ @ 17-5,используемый для получения ингибитора трипсина

 

ШТАММ Streptomyces bikiniensis 17-5 ЦМПМ S-644 (Центральный музей промьшшенных микроорганизмов института ВНИИГенетика), используемый для получения ингибитора трипсина .. ю 4 1чЭ сл to 14;:

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (11) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕККЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21 ) 3759096/28-14 .(22) 05.07.84 (46) 07..07.86. Бюл. № 25 (71) Ордена Ленина институт биохимии им. А.Н.Баха и МГУ им. М.В.Ломоносова (72) А.M.Áåsáoðoäîâ, И.В.Улезло, М..В.Шульгина, Н.А.Куропаткина, А.Н.Полин и К.А.Виноградова (53) 577.15.08 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 659610, кл. С 12 P 1/06, 1977.

Авторское свидетельство СССР № 1130603, кл. С 12 P 1/06, 1983. (59 4 С 12 Р 1/06//(С 12 Р 1/06, С 12 R I:465) (54) ШТАММ STREPTOMYCES BIKINIENSIS

17-.5, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ

ИНГИБИТОРА ТРИПСИНА (57) lllTAMM Streptomyces bikiniensis

17-5 ЦМПМ S-644 (Центральный му- зей промышленных микроорганизмов института "ВНИИГенетика"), используемый для получения ингибитора трипсина.

55

1 124252

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения ингибриторов протеаэ.

Цель изобретения — повышение выхода ингибитора трипсина.

Штамм Streptomyces bikiniensis

1.7-5 выделен из образца буро" горной почвы из района Майкопа.

Штамм Streptomyces bikiniensis

17-5 хранится в центральном музее 10 промышленных микроорганизмов института "ВНИИГенетика под номером

I/KM S-644 и характеризуется следую- щими признаками.

Культурально-морфологические приз- 15 наки °

Споровые цепочки прямые, споровая оболочка гладкая.

На среде У 1 Гаузе субстратный мицелий неокрашен, воздушный бело-серый, серый. Растворимый пигмент отсутствует.

На среде Чапека субстратный мицелий бесцветный, в центре колонии чернеющий, воздушный мицелий белова- 25 тый, до светло-серого, растворимый пигмент отсутствует.

На глюкозо-аспарагиновой среде субстратный мицелий тонкий, грязнокремовый, воздушный мицелий беловатый, растворимый пигмент отсутствует.

На среде Линденбайна субстратный мицелий тонкий, бесцветный, воздушный мицелий слабый, белый, растворимый пигмент отсутствует.

На среде У 2 Гауэе субстратный мицелий тонкий, темно-бурый, воздушный мицелий обильный, светло-серый растворимый, пигмент бистровий.

На овсяной среде субстратный мицелий тонкий, бесцветный по краю 40 буровато-коричневый, воздушный мицелий обильный, порошистый, среднесерый, растворимый пигмент слабый, светло-ореховый. Меланинотрицательный.

Физиолого-биохимические свойства.

Желатин не разжижает, молоко пептонизирует, крахмал гидролиэует, на клетчатке растет. Усваивает глюкозу, рафинозу, маннит; не усваивает сахарозу, рамнозу, арабинозу, ксилозу, инозит, Антагонистические свойства: угнетает рост грамположительных и грамотрицательных бактерий.

H p и м е р 1.. Трехсуточную культуру штамма )7-5, выращенную на среде следующего состава, Е:

4 3 пептон 0,.5; перевар Хоттингера

3 об.Е, глюкоза 1; NaC1 0 5; вода водопроводная рН 6,8-7,2, стерилизация 0,5 атм 30,.мин, засевают в среду того же состава в количестве

10Å. Через 28 ч роста при 28 С с перемешиванием культуральную жидкость подвергают центрифугированию.

Активность ингибитора составляет в этот момент 130 ед./мл.

Характеристика целевого продукта: препарат ингибитора трипсина, частично очищенный из фильтрата культуральной жидкости адсорбцией на активированном угле, элюцией кислым спиртом, обессоливанием и частичным обесцвечиванием на смоле Dowex 1 8 (Serve) и хроматографией íà KM-целлюлозе, представляет собой смесь из трех пептидов с мол.мас. 400-500, щелочной и нейтральной природы. Активность препарата 25 ед./мг.

Пример 2 ° В качестве посевного материала используют трехсуточную культуру штамма на среде следующего состава, 7.: пептон 0,5; перевар XOTTHHrepa 3 (по объему);

МаС1 0,5; глюкоза 1; вода водопроводная:, рН 6,8-7,2, стерилизование при 0,5 атм 0,5 ч. Посевной материал засевают в количестве IOX в описанную среду без глюкозы. Культивируют в течение 28 ч при 28 С с перемешивао нием. Культуральную жидкость отделяют фильтрованием.

Активность ингибитора определяют по подавлению гидролиэа 17 казеина

5 мкг трипсина в 2 мл 0,1 M боратного буфера рН 7,4 за 30 мин при 37 С.

Реакцию останавливают добавлением

2 мл 10Х-ной трихлоруксусной кислоты.

Количество гидролизованного каэеина определяют спектрофотометрически JIo поглощению растворимых в трихлоруксусной кислоте компонентов при

280 нм. За единицу активности принимают такое количество ингибитора, которое вызывает 507-ное подавление гидролиэа казеина.

Активность в культуральной жидкости достигает 130 ед ° /мл по сравнению с 33 ед./мп при использовании известного штамма.

Препарат ингибитора, полученный хроматографией на КМ-целлюлозе, опробован на способность ингибировать грибные протеазы. При получении фермента N-ацетил-P-D-глюкозаминидазы

Составитель Г.Смирнова

Техред О.Сопко

Корректор Л.Пилипенко

Редактор В.Петраш

Тираж 490 Подписное

ВНИИНИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.„ д.4/5

Заказ 3668/26

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Óæãoðoä, ул.Проектная,4

3 1242524 4 из фильтрата культуральной жидкости ингибитора на 1 мл культуральной жидАсшепюп1шп 237 высаливанием сульфа- кости выход препарата увеличивается том аммония при добавлении 1О ед. на 20X..