Состав для криоконсервации миелокариоцитов

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ÄÄSUÄÄ 1246967 (51) 4 А 01 N 1 02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

17,0 — 20,0

10,0 — 11,0

Поливинилпирролидон

Глюкоза

Натриевая соль сахарной кислоты

Трехзамещенный фосфор кислый натрий

Аминокровин

Апирогенная бидистиллированная вода

2,0 — 2,2 ноI,0 — 1,1

5,0 — 6,0

До 100,0 мл

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3864333/28-14 (22) 11.03.85 (46) 30.07.86. Бюл. № 28 (71) Киевский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови и

Киевский институт органической химии

АН УССР (72) С. С. Лаврик, Г. И. Когут, Н. И. Ларичева, Г. Т. Глухенькая, М. С. Волошина, М. О. Лозинский, IO. И. Геваза и Л. И. Шевченко (53) 615-015. 12 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 609524, кл. А О! N 1/02, 1976.

Лесняк А. И. и др. К вопросу о криоконсервировании и аутотрансплантации костного мозга.— В кн.: Новое в гематологии

Ташкент, 1983, с. 58 — 59. (54) (57) СОСТАВ ДЛЯ КРИОКОНСЕРВАЦИИ МИЕЛОКАРИОЦИТОВ, содержащий поливинилпирролидон, глюкозу, апирогенную бидистиллированную воду, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности миелокариоцитов в процессе консервации и увеличения срока сохранения криопротекторных свойств состава, состав дополнительно содержит натриевую соль сахарной кислоты, трехзамещенный фосфорнокислый натрий и аминокровин при следующем соотношении компонентов, r:

1246967

Изобретение относится к медицине, а именно к консервированию и трансплантации биологических тканей, в частности клеток костного мозга, и может найти применение в клиниках и станциях переливания крови.

Целью изобретения является повышение жизнеспособности миелокариоцитов в процессе консервации и увеличение срока сохранения криопротекторных свойств состава за 1О счет повышения криозащитных свойств состава и его стабильности благодаря дополнительному введению натриевой соли сахарной кислоты, аминокровина и трехзамещенного фосфорнокислого натрия.

Состав содержит поливинилпирролидон (ПВП), глюкозу, апирогенную бидистиллированную воду, натриевую соль сахарной кислоты (НССК), трехзамещенный фосфорнокислый натрий и аминокровин при следующем соотношении компонентов„г;

Г!оливинилпирролидон 17,0 — 20,0

Глюкоза 10,0 — 11,0

Трехзамещенный фосфорнокислый натрий 1,0 -1,1

Натриевая соль сахарной кислоты 2,0 — 2,2

Аминокровин 5 — 6

Апирогенная бидистилированная вода Дс 100 мл

Состав готовят следующим образом.

Сухую навеску ингредиентов, входящих в раствор, растворяют в 50 мл апирогенной 30 бидистиллированной воды, после чего прибавляют 5 — 6 мл аминокровина и доводят апирогенной бидистиллированной водой до

100 мл. Для более быстрого растворения колбу с содержимым можно подогреть. После полного растворения веществ раствор фильт- 35 руют, разливают во флаконы. Флаконы укупоривают, стерилизуют автоклавированием при режиме 1,2 атм 30 мин, рН раствора

5,7 6,6. Консервирующий раствор сохраняет свои криопротекторные свойства на протяжении 24 мес. При консервировании миелокариоциты смешивают с консервирующим раствором в соотношении 1:1.

Подготовленную к замораживанию взвесь клеток костного мозга пропускают через трансфузионную систему для переливания крови с капроновым фильтром в алюминиевый контейнер емкостью 160 мл. Затем контейнер с взвесью миелокариоцитов помещают в аппарат для программного замораживания, где скорость охлаждения клеток до температуры хранения биоматериала (- — 85 С, — 196 М) осуществлялась по ранее установленной программе. После оттаивания контейнера с костным мозгом в водяной бане при

40 С число морфологически сохранных клетоек по пробе Шрека составляет 91,2+-0,9.

Согласно изобретению были приготовлены составы, рецептуры которых приведены в табл. 1 (составы 1 и 5 содержат ингредиенты в запредельных концентрациях (меньше минимальных и больше максимальных)

Результаты испытаний составов приведены в табл. 2.

Из табл. 2 видно, что предлагаемый консервирующий состав для миелокариоцитов (2,3,4) обладает лучшими криопротекторными свойствами по сравнению с известным, так как позволяют сохранить морфологическую сохранность клеток в процессе консервирования до 92О.

Состав 1, где концентрации ингредиентов меньше минимальных, не обеспечивает высокук> защиту миелокариоцитов в процессе замораживания-оттаивания (82О, ). Концентрации ингредиентов больше максимальных (состав 5) снижают жизнеспособность миелокариоцитов после замораживания-оттаивания (83О) .

Результаты исследований, характеризующие стабильность консервирующего состава на этапе хранения, представлены в табл. 3.

Из табл. 3 видно, что криоконсервирующий раствор для миелокариоцитов, содержащий ПВП, НССК, глюкозу, аминокровин и трехзамещенный фосфорнокислый натрий, хранившийся в стеклянных бутылках для крови при 20 — 25 С, остается стабильным в течение 24 мес по физико-химическим и биологическим показателям биологический контроль свидетельствует что раствор стерильный, а.пирогенный и не токсичный, в то время как известный консервирующий состав сохраняет свои физико-химические свойства при 2 — 4 С в течение 6 мсс. Реакция на подлинность ПВП, НССК, глюкозы, аминокровина и фосфатов в растворе положительная.

Предлагаемый состав для низкотемпературного консервирования миелокариоцитов повышает жизнеспособность клеток в процессе их консервирования.

1246967

Таблица 1

Содержание ингредиентов (г) в составах

Компоненты

1 I Г

Пиливинилпирролидон (ПВП) 20,0

19,0

16,0

17,0

10,5

9,0

Глюкоза

Натриева соль сахарной кислоты

2i3

2,2

2,1

2,0

1,0

7,0

6,0

5,5

4,0

5,0

Аминокровин

1,2

10,5

0,9

1,0

Na>PO 12Н О

Бидистиллированная вода

До 100,0 До 100, " До 100,0 До 100,0 До 100,0

Таблица 2

Сохранность клеток в процессе консервирования, Х составов!!етод исследования

|. I

Суправитальная окраска

1Ж-ным раствором эозина

98 97

97 98 до замораживания 95 после размораживания 85

92 83

9С 92

Таблица 3

Концентрация пвп (Цветность рН

Срок хранения, мес.

Вязкость (относительная) глюкозы

Свежеизготовленный (=5) 6 мес (9 мес (12 мес (=5) =5) 17,76+0,17

=5) 0,228+0,020

24 мес (5,53+0,06 9,56+0,12

17,70+0, 13

ВНИИПИ Заказ 4038, 3 Тираж 679 Подписное

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

0,252+0,0!7 5,75+0,03 9,87+0,07

3 мес (=.5) 0,241+0,012 5,75+0,02 9,86+0,08

0,219+0,005 5,7 +0,03 9,90+0,10

О, 196+1),006 5,59+0,02 9,88+0, 05

0,205+0,on8 5,51+0,02 9,77+0, 10

18 мес (=5) 0,232+0,006 5,56+0,02 9,44+0, 16

17,32+0,09

17 31+0 09

17,28+0,С8

17,14zO,С5

17,28+0,10

8,96+0,16

9,0620, 14

8,86 0,06

8,63+0,17

8,60zO;04

8,61+0,06

8,63+0 05