Способ культивирования клеток человека и животных

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (gp 4 С 12 N 5/00, 5/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АBTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3876932/28-14 (22) 13.02.85 (46) 15. 09. 86. Бюл. ¹ 34 (71) Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича и

Государственный ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.почетного академика

Н.Ф.Гамалеи (72) Л.И.Игудин, Г.M.Ãíóíè, Ф.Г.Нагиева, И.Г.Баландин, Н.Ибадов, 3.С.Кондрашова, С.Д.Светльппев, Н.И.Краснова, А.В.Извекова, Н.В.Кацнельсон и Г.А.Маркман (53) 578.085 ° 23(088.8) (56) Патент США № 3616202, кл. С 12 N 5/00, 1971.

Патент США ¹ 4473647, кл. С 12 N 5/00, 1984.

Патент США - 4038139, кл. С 12 N 5/00, 1977.

Авторское свидетельство СССР № 1109437, кл. С 12 N 15/00, 1983.

Общая и частная вирусология. /Под ред.В.М.Жданова. M 1982, т.1, с.479-484.

„„SU„,, 1257086 А 1 (54) (57) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЬИ путем засева клеточной суспензии на синтетическую питательную среду, дополнительно содержащую сыворотку крови млекопитающих с последующим инкубированием культур при 37 С в течение 3-5 сут до формирования монослоя, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения пролиферативной активности клеток, культивирование осуществляют в присутствии сыворотки крови овцематок 130-135 дней суягности при следующем соотношении компонентов, об.7:

Синтетическая питательная среда 90-99,75

Сыворотка крови овцематок 0,25-10

Составитель M.Ñåðîâà

Редактор Н.Швыдкая Техред М.Ходанич Корректор О.Луговая

Заказ 4882/20 Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4

1 12

Изобретение относится к биотехнологии и касается культивирования клеток человека и животных, необходимых для производства вирусных вакцин, моноклональных антител, биологически активных веществ, проведения диагностических исследований.

Целью изобретения является повышение пролиферативной активности клеток за счет улучшения ростовых и адгезивных свойств среды.

Пример 1. Культивирование клеток Чего.

Во флакон со средой RPNI-1640 стерильно после добавления антибиотиков из расчета пенициллин

100 ед./мл, стрептомицин 100 мкг/мл пипеткой вносят сыворотку крови овцематок 130 дней суягности в следующем объемном соотношении компонентов, 7: среда 90; сыворотка 10 Клетки Чего суспендируют в приготовленной таким образом среде, доведя их концентрацию до 90000 кл,/мл. По 10 мл суспензии клеток пипеткой при соблюдении условий асептики вносят во флаконы с рабочей поверхностью 20 см

Флаконы помещают в термостат при о

37 С. Через 4-5 сут культивирования формируется монослой клеток с типичной морфологией.

Процент адгезии через 4 ч при использовании питательной среды с экспериментальными сыворотками суягных овцематок серий 1 и 2 составляет 138 и 134 соответственно, в то время как

57086 2 в контроле он равняется 106 (при посевной дозе клеток 120000 кл./мл).

Пример 2. Культивирование клеток ФЭК.

Во флаконы с питательной средой

199 после добавления антибиотиков из расчета пенициллин 100 ед./мл, стрептомицин 100 мкг/мл пипеткой стерильно вносят сыворотку овцематок

10 135 дней суягности при следующем объемном соотношении компонентов, 7 . среда 99,75; сыворотка 0,25. Клетки. фибробластов 9-10-дневных эмбрионов кур (ФЭК) суспендируют в приготовлен15 ной таким образом среде, доводя их концентрацию до 500000 кл./мл 2 мл суспензии клеток пипеткой при соблюдении условий асептики вносят в бактериологические пробирки. Пробирки

20 укладывают в штатив под углом 30-40 о и помещают в термостат при 37 С. Через 2-3 сут культивирования формируется монослой клеток типичной морфологии.

Индекс пролиферации при использовании сыворотки суягных овцематок серии 1 составляет 0,660 по сравнению с 0,240 при использовании сыворотки крупного рогатого скота

ЗО (при посевной дозе клеток 300000400000 кл./мл).

Предлагаемый способ позволяет значительно удешевить процесс культивирования клеток и обеспечить получение на клеточных субстратах различ5 ных биологически активных веществ.