Способ определения гликогена в тканях животных

 

Изобретение относится к области мясной промьшшенности и может быть использовано при определении гликогена в тканях животных. Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа. Пробы измельчают, смешивают с этанолом и подогревают. К указанной смеси добавляют щелочь. Гидролиз проводят на кипящей бане. Затем ткани охлаждают, добавляют этиловый спирт и смесь центрифугируют. Осадок растворяют, нейтрализуют в серной кислоте и добавляют на холоду антроновый реактив. Смесь помещают в кипящую водяную баню. После охлаждения смесь колориметрируют. Расчеты проводят на основании калибровочной кривой. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

yg 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

КеЛп,i. 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3780292/28-14 (22) 15.08.84 (46) 15.11.86. Бюл. В 42 (71) Украинский научно-исследовательский ветеринарный институт (72) Ю.А. Колос, В.Я. 1Иаблий, В.П. Сапейко и В.Н. Глушенко (53) 612.352.17(088.8) (56) Соловьев В.И. Созревание мяса. ,М.: Пищевая промышленность, 1960, с. 253-254. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКОГЕНА

В ТКАНЯХ ЖИВОТНЫХ (57) Изобретение относится к области мясной промышленности и может быть

„„SU„„1270704 A 1 использовано при определении гликогена в тканях животных. Цель изобретения — повышение точности и ускорение способа. Пробы измельчают, смешивают с этанолом и подогревают. К указанной смеси добавляют щелочь. Гидролиз проводят на кипящей бане. Затем ткани охлаждают, добавляют этиловый спирт и смесь центрифугируют.

Осадок растворяют, нейтрализуют в серной кислоте и добавляют на холоду антроновый реактив. Смесь помещают в кипящую водяную баню. После охлаждения смесь колориметрируют.

Расчеты проводят на основании калибровочной кривой. 2 табл.

1 12707

Изобретение относится к мяснсй промышленности и может быть использовано при определении гликогена в тка нях животных на мясокомбинате, мясоконтрольных станциях, ветеринарных лабораториях.

Цель изобретения — повышение точности и ускорение процесса исследования путем предварительной фиксации ткани этанолом и проведения гидроли- 10. за раствором гидроксида калия и этанолом.

Способ осуществляется следующим образом.

Отобранные пробы фиксируют, для 15 чего их измельчают и смешивают с 96 . этанолом в соотношении 1:2-1:5.Смесь подогревают 2-3 раза до кипения.

В таком виде материал .может храниться несколько суток, при этом ко" 20 личество гликогена не снижается.

У указанной смеси добавляют

30%-ный КОН при соотношении ткани, спирта и щелочи 1:(2-5):(6-12). Гидролиз проводят на кипящей водяной ба- 2S не в течение 10-20 мин. После растворения ткани пробы охлаждают до комнатной температуры и добавляют этиловый спирт, затем центрифугируют в течение 30 мин при 2000 об/мин. 30

Надосадочную жидкость сливают.

Осадок гликогена при необходимости переосаждают спиртом. Затем осадок растворяют в горячей дистиллированной воде, нейтрализуют в серной кислоте и добавляют на холоду антроновый реактив. Смесь помещают на 10 мин в кипящую водяную баню, после чего ох.лаждают до комнатной температуры и колориметрируют на ФЗКе с красным 4р светофильтром (620 нм}.

Расчеты проводят на основании ка= либровочной кривой, построенной по стандартным растворам глюкозы, умножая полученное количество на коэффи- 4 циент 0,9.

Пример 1. Навески мышц и печени по 1 r вносят в центрифужные пробирки и приливают 3 мл 96 этанола..

Смесь подогревают до кипения. Зафиксированные таким образом пробы доставляют в лабораторию для дальнейших исследований.

После чего к указанной смеси добавляют 7 мл 30 .-ного водного раствора гидроксида калия и проводят- гидролиз на кипящей водяной бане в течение 15 мин (до полного растворения

Таблица 1

Убой свиней на мясокомбиСодержани гликогена

Убой свиней в хозяйстве без транснате с предварительной транспортировкой на

100 км портировки в мышцах 310,50+49, 12 103,04+24,01 в печени 797,22+1 97,46 243,18+27,71

Полученные результаты свидетельствуют, что транспортировка туш свиней на расстояние 100 км снижает количество гликогена.

Предлагаемый ускоренный метод определения количества гликогена позволяет производить систематический контроль за содержанием гликогена и о регулировать качество получаемой продукции.

Для исследований отбирали пробы на мясокомбинате. Сразу же часть проб фиксировали согласно предлагаемого способа, а другую часть сохраняли при 3-. 4 С.

Количество гликогена onðåäåëÿëè сразу же после отбора проб и через б и 24 ч предлагаемым способом и известным.

Результаты приведены в табл. 2.

04 2 тканей). Затем добавляют 3 мл дистиллированной воды, несколько капель концентрированной серной кислоты и

10 мл этанола 9б . Затем центрифугируют в течение 30 мин при 2500 об/мин.

Надосадочную жидкость сливают, Полученный осадок после высушивания раст воряют в 5 мл горячей дистиллированной воды, нейтрализуют серной кислотой и добавляют 20 мл антронового реактива (0,2 -ный раствор антрона в серной концентрированной кислоте).

После чего пробирки помещают в водяную баню и кипятят в течение 10 мин, затем охлаждают до комнатной температуры. Содержимое колориметрируют на

ФЭКе с красным светофильтром (620нм).

Расчет проводят на основании калибровочной кривой, построенной по стандартным растворам глюкозы, умножая полученное количество на коэффициент

0,9, Результаты приведены в табл. 1 °

1 270704

Таблица 2

Количество гликогена

Время исследования известный (контроль) предлагаемый (опыт) 212,6+20,6

210, 3+19, 5

208,0+ 14,6

188, 3+40, 1

126,5+22, 7

48, 7+18,4

После отбора проб

Через 6 ч

Через 24 ч

Составитель Л. Шилина

Техред И. Попович Корректор Е. Сирохман

Редактор Н. Киштулинец

Заказ 6238/48 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Полученные результаты исследования показали, что предлагаемый способ

15 повышает достоверность количественного определения гликогена в тканях, так как устраняет потери гликогена в период доставки материала для исследования и сокращает время исследования эа счет ускорения гидролиэа с 2-х и более часов до 10-20 мин.

Метод доступен для выполнения в производственной лаборатории и может быть рекомендован для широкого приме25 нения.

Формула изобретения

Способ определения гликогена в тканях животных путем щелочного гидролиза ткани, осаждения гликогена спиртом, растворения осадка, нейтрализации и обработки его раствором антрона с последующей колориметрией, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения процесса исследования, ткань предварительно фиксируют этанолом в соотношении ткани и этанола (1:2)-(1:5), подогревают до кипения, а гидролиэ проводят 25-357. — ным раствором гидроксида калия и этанолом в соотношении ткани, этанола и гидрооксида калия 1:(2-5):(6-12) в течение 6-20 мин.