Способ определения свободного витамина @ в растительных материалах

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается методов определения витаминов. Целью изобретения является сокращение времени определения и упрощение способа. Для достижения этой цели при осуществлении способа экстракцию свободного витамина В и осаждение белков ведут одновременно , причем из кислот используют 5-7%-ную метафосфорную кислоту, затем отмывают экстракт, окисляют в нем свободный вытамин Б до тиохрома, экстрагируют последний органическим растворителем, измеряют интенсивность флуоресценции экстракта и устанавливают количество свободного витамина по показаниям последней. 2 табл.,

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) А1 (51)4 С 01 #33 82

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

11 ю

Н А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3806397/28-13 (22) 29.10.84 (46) 23.11.86. Бюл. У 43 (71) украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) А.Н, Стефанович и И.А, Ионов (53) 577,16(088.8) (56) Методы определения витаминов в кормах, М.: Колос, 1967, с.149-153.

Островский Ю.М. Экспериментальная витаминология, Минск, с.173-223. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНОГО

ВИТАМИНА В„ (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается методов определения витаминов. Целью изобретения является сокращение времени определения и упрощение способа, Для достижения этой цели при осуществлении способа зкстракцию свободного витамина

В и осаЖНение белков ведут одноf временно, причем из кислот используют 5-7Х-ную метафосфорную кислоту, затем отмывают экстракт, окисляют в нем свободный вытамин В 1 до тиохрома, экстрагируют последний органическим растворителем, измеряют интенсивность флуоресценции экстракта и устанавливают количество свободного витамина по показаниям последней ° 2 табл., ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ. 127

?О

30

Формула

Изобретение относится к биотехнологии и касается методики определения витаминов, Цель изобретения — сокращение времени определения и упрощение способа, Способ осуществляется следующим образом, Пример 1, Навеску измельченного растительного материала 250 мг заливают 10 мл 5-7Х-ной метафосфорной кислоты и нагревают 15 мин па кипящей водяной бане. Осадок удаляют центрифугированием 5 мин при 1500

3000 оборотах в минуту. К центрифугату добавляют 10 мл изобутилового спирта, перемешивают в течение 24 мин, К тиамину (витамин В,), содержащемуся в нижнем водном слое, добавляют 0,3 мл 2 -ного раствора ферицианида калия, 4 мл 30%-ного хлористого натрия гидроокиси натрия и 9 мл иэобутанола. Экстрагируют в течение

2 мин, нижний слой сливают, а к верхнему изобутиловому экстракту добавляют 10 мл дистиллированной воды, перемешивают и после отстаивания сливают нижний водный слой в два приема, Изобутиловый экстракт иэ делительной воронки сливают в сухую мерную пробирку на 10 мл, в которую предварительно добавлен 1 мл этилового спирта. Если полученный объем меньше 10 мл, то его доводят изобутиловым спиртом до метки, Параллельно обрабатывают контрольную пробу аналогично опытной, которая вместо экстракта ткани содержит 10 мл метафосфорной кислоты. Интенсивность флуоресценции измеряют против стандартного раствора тиамина (l мгк/мг), окисленного до тиохрома, аналогично опытной пробе.

Пример 2. Осуществляют определение свободного витамина В аналогично примеру 1, но с различной концентрацией метафосфорной кислоты.

Результаты представлены в табл.!.

Данные табл.l свидетельствуют о том, что максимальное извлечение свободного витамина В из анализируе1 мой пробы достигается при использовании для экстракции метафосфорной кислоты в концентрации 5-7 .

2252 2

Пример 3„ Осуществляют определение свободного витамина В, аналогично примеру 1, анализируя усредненный образец травяной люцерновой муки. Параллельно проводят анализ этого же образца по известному способу. Результаты представлены в табл.2.

Таким образом, при сравнении обоих способов выявлено, что предлагаемый способ позволяет значительно упростить определение свободного витамина В благодаря исключению ряда

1 операций (доведение раствора до определенного рН, осаждение оставшихся белков 20 .-ной трихлоруксусной кислотой на кипящей водяной бане) и, как следствие этого, сократить время анализа в два раза.

Кроме того, использование 5-7Х-ной метафосфорной кислоты позволяет одновременно провести экстракцию свободного витамина В иэ анализируемо1 го образца и осаждение белков ° При этом отпадает необходимость их дальнейшего удаления °

Наряду с сокращением времени анализа, предлагаемый способ повышает точность определений, уменьшает разброс между отдельными определениями ° изобретения

Способ определения свободного витамина В„ в растительных материалах путем экстракции пробы сырья кислотой, осаждения белков из экстракта, отмывки экстракта, окисления в нем свободного витамина В1 до тиохрома, экстракции последнего органическим растворителем, измерение интенсивности флуоресценции экстракта и установление количества свободного витамина

Б по показаниям последней, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью сокращения времени определения и упрощения способа, экстракцию свободного витамина В1 и осаждение белков ведут одновременно, причем из кислот используют 5-7Х-иую метафосфорную кислоту.

1272252

Таблица

Концентрация метафосфорной кислоты, Х

1О

Таблица 2

Способ

ПродолжительКоличест во определений ность анализа, мин

180

Редактор А. Козориз

Подписное

Заказ 6334/44 Тираж 778

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам. изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Определение свободного витамина В мкг/г

2,0 3,1 4,2 4,4 5,6 5 6 5,5 5,2 5,2 5,2

Количество свободного митамина В„ в 1 r травяной муки, мкг

Предлагаеммый 5,6+0,28 6

& 0,051

Известный 5,6+0,52 6 о 0,096

Составитель Е. Буданцева

Техред И.Ходаиич Корректор Л, Пилипенко