Способ получения водных растворов акриламида или метакриламида

 

Изобретение касается производных ненасьщенных кислот, в частности получения водных растворов акриламида (AM) или метакриламида (МА), используемых в органическом синтезе. Упрощение процесса достигается микробиологическим путем с использованием других штаммов микроорганизмов. Получение AM и МА ведут гидролизом соответствующих нитрилов при рН 7-9 и (-3)-(+15)°С с помощью штаммов N-771 или N-774 вида Corynebacterium или N-775 вида Nocardia. Преимущественно используют штаммы, иммобилизированные полиакриламидным гелем, и процесс ведут непрерывно в 3-7 последовательно соединенных колоннах. Реакция протекает количественно с использованием аэробной культивации с использованием культуральной среды, содержащей 1% глюкозы, 0,5% пептона, 0,3% дрожжевого экстракта и 0,3% солодового экстракта при 30 С. По окончании процесса клетки удаляют центрифугированием и получают прозрачный раствор, содержащий AM и МА 9,3-31,8%. Упрощение процесса-достигается за счет микроорганизмов , сохраняющих стабильную фермента ивную активность, а ведение процесса при низкой температуре позволяет исключить стадию очистки раствора клеток. 2 з.п. ф-лы, 5 табл. с SS (Л и Ро со ел о ы

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

0И (11) А3

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ .Б (Н ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2745302/23-04 (22) 28.03.79 (31) 35318/78, 51236/78, 51237/78 (32) 29.03.78, 28.04.78 ,(33) JP (46) 23,03,87. Бюл. Ф 11 (71) Нитто Кемикал Индастри Ко., Лтд (л ) (72) Итиро Ватанабе, Есиаки Сатох и Такаюки Такано (JP) (53) 547.398,1.07 (088.8) (56) Патент США 9 4001081, кл. С 12 D 13/06,,опублик. 1977. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ АКРИЛ- ИЛИ МЕТАКРИЛАМИДА (57) Изобретение касается производных ненасыщенных кислот, в частности получения водных растворов акриламида (АМ) или метакриламида (МА), используемых в органическом синтезе. Упрощение процесса достигается микробиологическим путем с использованием других штаммов микроорганизмов. Полу(51)4 С 07 С 102/08, 103/187, С 12 P 13/02 чение AM и ИА ведут гидролизом соответствующих нитрилов при рН 7-9 и (-3)-(+15) С с помощью штаммов N-771 или N-774 вида Corynebacterium или

N-775 вида Nocardia. Преимущественно испбльзуют штаммы, иммобилизированные полиакриламидным гелем, и процесс ведут непрерывно в 3-7 последовательно соединенных колоннах. Реакция протекает количественно с использованием аэробной культивации с использованием культуральной среды, содержащей 17. глюкозы, 0,5Х пептона, О,ЗЖ дрожжевого экстракта и О,ЗЕ солодового экст0 Ф ракта при 30 С. По окончании процесса клетки удаляют центрифугированием и получают прозрачный раствор, содержащий AM и ИА 9,3-31,87. Упрощение процесса достигается sa счет микроорганизмов, сохраняющих стабильную ферментативную активность, а ведение процесса при низкой температуре позволяет исключить стадию очистки раствора клеток. 2 з.п. ф-лы, 5 табл.

01 2

1 12995

Изобретение относится к способам получения амидов, в частности к усовершенствованному способу получения акрил- или метакриламида с использованием штаммов микроорганизмов. 5

Целью изобретения является упрощение процесса путем использования в гидролизе предлагаемых штаммов микроорганизмов.

Пример 1,(сравнительный) . 12,5 ч. промытых клеток штамма N-771 (содержание воды 80%) получают аэробной культивацией с использованием культурной среды (pH 7,2), содержащей, Х: глюкоза 1; ,15 пептон 0,5; дрожжевой экстракт 0,3; солодовый экстракт 0,3, 6 ч. акрилонитрила и 81,5 ч. 0,05 M фосфатного буффера (рН 8,8) смешивают и проводят о в течение 1 ч реакцию при 30 С с перемешиванием. После завершения реакции клетки удаляют центрифугированием с получением прозрачного раствора.

Такой раствор содержит 8% акриламида, но не содержит непрореагировавший ак- >5 рилонитрил и побочных продуктов, таких как акриловая кислота. Таким образом, реакция протекает почти количественно до полного завершения.

Пример 2 (сравнительный).

12,5 ч. промытых клеток штамма N-771 (содержание воды 80X), полученных аналогично примеру 1, смешивают с

87,5 ч. воды и акрилонитрил непрерывно прикапывают в смесь со скоростью

4 ч./1 ч, контролируя при этом рН на значении 8,0 с помощью гидроокиси калия с перемешиванием, поддерживая температуру реакции ЗО С. Через 2,5 ч прикапывание акрилонитрила прекраща40 ют, после чего смесь перемешивают в течение 30 мин. Полученный в результате реакционный раствор подвергают реакции в течение еще 30 мин, после чего центрифугируют с целью удаления

45 клеток и получения прозрачного раствора. Такой раствор содержит 12,0% акриламида и Совершенно не содержит непрореагировавшего акрилонитрила.

Таким образом реакция полностью за1

50 ,вершена.

Пример 3 (сравнительный).

15 ч. промытых клеток штамма N-771 (содержание воды 80X}, полученных аналогично примеру 1, 8 ч. метакрило- 5 нитрила и 77 ч. 0,05 И фосфатного буффера (рН 8,8) смешивают и проводят о

s течение 1 ч реакцию при ЗО С. После завершения реакции клетки удаляют цейтрифугированием с получением прозрачного раствора. Такой раствор содержит 10,2% метакриламида. Хотя детектируют следы метакриловой кислоты, непрореагировавшего метакрнлонитрила не обнаружено. Таким образом, реакция протекает почти, количественно до завершения.

Пример 4 (сравнительный).

i2 ч. промытых клеток штамма N-774 (содержание воды 75X), полученных аналогично примеру 1, смешивают с

88 ч. воды и к полученной смеси непрерывно прикапывают метакрилонитрила со скоростью 3 ч./ 1 ч, контролируя при этом рН раствора на уровне

8,5 с помощью гидроокиси калия с пео ремешиванием при 30 С. После протекания реакции в течение 4 ч прикапывание метакрилонитрила прекращают, после чего перемешивание продолжают еще в течение 30 мин до почти полного реагирования метакрилата в системе. После завершения реакции клетки удаляют центрифугированием с получением прозрачного раствора. Количество метакриламида в таком растворе согласно определению составляет 13Х.

Пример 5 (сравнительный).

25 ч. промытых клеток (содержание воды 78X) штамма N-775, полученных аэробной культивацией с использованием культурной среды (рН 7,2), содержащей, Х: глюкоза 1; пептон 0,5; дрожжевой экстракт 0,3; солодовый экстракт 0,3; ацетонитрил О, 1; КН Р04 О, 1;

HgS0 х 7 Н О 0,05, 5 ч. акрилонитрила и 70 ч. 0,05 М фосфатного буфера (рН 8,8), смешивают и проводят в течение 1 ч реакцию при 30 С с перемешиванием. После завершения реакции клетки удаляют центрифугированием с образованием прозрачного раствора.

Такой раствор содержит 6,7Х ариламида, но не содержит непрореагировавшего акрилонитрила и побочных продуктов, таких как акриловая кислота. Таким образом, реакция проходит почти количественно до завершения.

Пример б. 8 ч. промытых клеток штамма N-771 (содержание воды

75%), полученных аэробной культива-цией при использовании культурной среды (рН 7,2), содержащей, Х: глюкоза 1; пептон 0,5; дрожжевой экстракт

0,3; солодовый экстракт 0,3, смешивают с 92 ч. воды и к смеси прикапывают акрилонитрил со скоростью 2 ч./1 ч, 9501 4 рифугированием с получением прозрачного раствора. Содержание акриламида определяют в каждом из растворов с целью сравнения концентраций накоп5 ленного акриламида при соответствующих температурах реакции.

Результаты опытов представлены в табл.1.

Таблица1

Показатели по примеру 6

Характерицесса 1 2 3 4, 5 6

Температура реако ции, С (-) 3-0 5 10 15 20 30

Время реакции перед детектированием акрилонитрила, ч

5 4

16 14 12

Концентрация акриламида в реакционном растворе, 7

31,8 31,0 28,1 25,0 10,7 9,3

Из результатов табл.1 следует, что энзимная активность клеток является стабильной, а концентрация полученного и накопленного акриламида значительно повышается при проведении40 реакции при температуре не выше 15 С. о

Пример 7. 13,5 ч. промытых . клеток штамма N-775 (содержание воды

78X), полученных культивацией соглас-45 но примеру 6, смешивают в 86,5 ч. воды и по каплям добавляют акрилонитрил

Т а б л и ц а 2

Показатели по примеру 7

2 3 4 5

Характеристики процесса

1 6

Температура реакции, С (-)3-0 5 10 15 20 30

3 129 контролируя при этом рН раствора на уровне 8,0 с помощью добавления 0,5 И водного раствора КОН при перемешивании, при различных температурах реакции (0-30 С) . Реакцию продолжают до детектирования непрореагировавшего акрилонитрила и на этой стадии реакцию прерывают, и клетки удаляют цент-. со скоростью 2 ч./ 1 ч, контролируя при этом рН раствора на уровне 8,0 путем добавления:0,5 И водного раствора гидроскиси калия с перемешиванием, при различных температурах рео акции (0-30 С) . После этого реакцию продолжают аналогично примеру 6 до определения непрбреагировавшего аКрилонитрила. Концентрацию акриламида определяют в каждом из растворов.

Результаты опытов представлены в табл.2.

1299501 6

1 — Продолжение табл.2

Показатели по примеру 7

Характеристики процесса

1 2 3 4 5 6

Время реакции перед детектированием акрилонитрила, ч

13 11 10 5 4

Концентрация акриламида в растворе, Х

28,2 27,5 23,1 21,0 11„5 9,5

Таблица3

Концентрация акриламида, Х

Из табл.2 видно, что концентрация полученного и накопленного акриламида значительно увеличивается в тех опытах, в которых реакцию проводят при температуре выше 15 С. о

Пример 8. 4 ч. промытых клеток штамма N-771, полученных по примеру. 6, 0,45 ч. акриламида, 0,05 ч.

N N -метилен-бис-акриламида и 4 ч.

I физиологического раствора смешивают с получением однородной суспензии. К полученной суспензии добавляют 0,5 ч.

5%-ного раствора диметиламинопропионитрила и 1 ч 2.5Х-НОГО водного ра-. 35 створа персульфата калия, и в полученной системе проводят полимериэацию о при 10-30 С. Полученный таким образом массивный, содержащий клетки, гель пробивают на мелкие частицы и промы- 40 вают физиологическим раствором для получения 10 ч. иммобилизованных клеток. К 20 ч. иммобилиэованных клеток добавляют 72 ч. 0,05 М фосфатного буфера (рН 8,0) и добавляют по каплям 45 акрилонитрил со скоростью 2 ч./1 ч, о проводя. реакцию при -15 С в течениИ

4 ч при перемешивании. Прозрачный раствор, полученный отделением и удалением бактериальных клеток от продукта 50 реакции, содержит 10,6% акриламида и почти не содержит побочных продуктов, таких как акриловая кислота, а количество непрореагировавшего акрилонитрила определяют. В резУльтате реакция 55 протекает почти количественно до полного завершения.

Hp и м е р 9. 5 ч. промытых клеток N-. 774 (содержанне воды 80%), полученных аэробным выращиванием в культуральной среде (рН 7,2), содержащей, Х: глюкоза 1;. пептон 0,5; солодовый экстракт 0,3; дрожжевой экстракт 0,3, в течение 48 ч, добавляют к 95 ч., О, 1 М фосфатного буффера, содержащего 2Х акрилонитрила, регули-. руя рН до 6,0, 7,0; 8,0 и 9,0 соответственно. Реакцию проводят при 0-5 С в течение 5 ч, постепенно добавляя, акрилонитрил так, чтобы концентрация акрилонитрила не превышала 2Х. Концентрацию акрилонитрила измеряют соответствующими: реакционными раство" рами»

Результаты опытов приведены в табл.3.

Характе- Показатели по примеру 9 ристики l J рн 6,0 7,0 8,0 9,0

1?, 1 22,6 28,2 20,0

Пример 10. 40 r иммобилизованных клеток штамма N-771, полученных согласно способу примера,9, загружают в колонку с рубашкой внут- . ренний диаметр 3 см, длина 25 см) и

4%-ный водный раствор акрилонитрила

7 1299501 .или 2,6Х-ный водный раствор метакриланитрила непрерывно подают сверху ко- с о лонки со скоростью 100 мл/ч при 1(С в о

1 и при 25 С (для сравнения), при времени реакции, указанной в табл.4. 5 с

Соотношения полученного. акриламида или метакриламида на соответствующих б стадиях реакции представлены в табл.4. ф

Таблица4

Время реак ции, ч

Концентрация, Х

5 3 3,3 3,3

1,7 3,3 3,3

0 3,3 333

0 3 3 013

5,3

5,3

5,3

Акриламид-производяф щая способность

Микроорганизм

5,3

Целые Иммобилизоклетки ванные клет" ки

3,3 О

100 5 5 0

Штамм N-771 вида

30 Соrynebacterium (РЕРМ-P P 4445) 200 5 3

250 5,3

300 5 3

10,7 10,8 ч

О 3,3 0

0 3,3 О

0 3,3 0

Штамм N-774 вида

Corynebacterium

35 (FEPM-P Р 4446) S,8

6,0

Штамм N 775 вида

Nocardia (FEPN-P У- 4447)

2,5

2,6 акриламида метакриламида

10С 25 С 10С 25С

50 5,3 0 3,3 0

150 5,3 О 3,3 О

Пример 11. В табл.5 приведено сравнение активности целых клеток и иммобилизованных клеток по отношению к различным микроорганизмам, обладающим акриламид-производящей способностью, Получают иммобилиэованные клетки следующим образом.

4 ч. целых клеток (содержание воды

75X), 0,45 ч. акриламида, 0,05 ч.

N;N -метилен-бис-акриламида и 4 ч.

Р физиологического раствора смешивают с целью получения однородной суспензии. К этой суспензия добавляют 0,5ч.

5Х-ного водного раствора диметиламинопропионитрила и 1 ч. 2,5Х-ного водного раствора персульфата калия .и о систему выдерживают при 10-15 С в течение 30 мин. с целью полимеризации.

После этого, полученные таким образом, содержащие клетки гели дробят и промывают физиологическим раствором целью получения 10 ч. иммобилизоанных клеток.

Измерение акриламид-производящей пособности ведут следующим образом.

0,8 ч. целых клеток или 2 ч. иммоилизованных клеток разбавляют 0,05 М осфатным буффером (рН 8,0) до объема .

100 ч. Затем 1 ч. каждого из разбавленных таким образом растворов смешивают с 1 ч. 0,05 M фосфатного буффера (рН 8,0), содержащего 2Х акрилонитрио ла и после реакции при 10 С в течение

30 мин при перемешивании, полученный в реакционном растворе акриламид определяют с целью расчета акриламидпроизводящей способности каждого образца целых клеток и иммобилизованных клеток.

Таблица5

v, Количество акриламида. (г), полученное за 1 ч реакции, на 1 r сухих бактериальных клеток.

Пример 12. 40 ч. промытых клеток штамма N-771 (содержание воды

75X) полученных аэробной культивадией с использованием культурной среды (рН 7,2), содержащей, Х: глюкоза

1; пептон 0,5; дрожжевой экстракт

0,3; солодовый экстракт 0 3; 4,5 ч.

Ф I акриламида, 0,5 ч. N,N -метилен-бисакриламида и 40 ч. физиологического раствора смешивают с целью получения однородной суспензии. К полученной суспензии добавляют 5 ч. 5Х-ного диметиламинопропионитрильного водного раствора и 10 ч. 2,5Х-ного водного раствора персульфата калия и выдержи12995 вают при 10ОС в течение 30 мин с целью полимеризации. Полученный таким образом массивный, содержащий клетки, гель дробят на небольшие ча- стицы и промывают физиологическим ра- 5 створом с целью получения 100 ч. им мобилизованных клеток.

В пять колонок, снабженных рубашками, с внутренним диаметром 3 см и длиной в 25 см загружают 40 r иммобилизованных клеток и последовательно соединяют друг с другом и сверху колонки 1 пропускают 4,5 "ный водный .раствор акрилонитрила (при использовании фосфатного буффера, рН 8,0) при о

10 С со скоростью 50 мл/ч (об. скорость 0,5 ч ). После этого 100 ч, элюата смешивают с 4,5 ч. акрилонитрила и пропускают сверху через колон- 20 ку 2 со скоростью 52,3 мл/ч (об.скорость О, 53 ч ) . Полученный элюат аналогичным образом пропускают последовательно через колонку 3 со скоростью

54,5 мл/ч (об.скорость 0,54 ч ), ко- Z5 лонку 4 со скоростью 56,8 мл/ч (об. скорость 0,57 ч ) и через колонку 5 со скоростью 59 мл/ч (об.скорость

0,59 ч" ) в течение 48 ч. Таким образом, непрерывно получают элюат с ре- 30 акционным соотношением 100Х. Концентрация акриламида в таком элюате составляет 25,5Х.

П р и-м е р 13. В 7 колонок с рубашками диаметром в 3 см и длиной

25 см загружают 40 г иммобилизованных клеток, полученных согласно примеру

12, и их последовательно соединяют друг с другом и сверху колонки 1 пропускают 2,5 -ный водный раствор ме- 40 такрилонитрила, растворенный в 0,05 M фосфатном буффере (рН 8,0), со скоростью 100 мл/ч (об.скорость 1,0 ч ), -1

О при 15 С. Затем 100 ч. элюата смешивают с 2,5 ч. метакрилата и эту смесь 45 пропускают сверху вниз через колонку

2 со скоростью 103 мл/ч (об.скорость

1,03 ч )..

Затем полученный элюат аналогичным образом пропускают через колонку 3 со скоростью движения вниз, равной

105 мл/ч (об. скорость 1,05 ч ), колонку 4 со скоростью 108 мл/ч (об. скорость 1,08 ч ), колонку 5 со скоростью 110 мл/ч (об.скорость 1, 10 ч" ), 55 колонку 6 со скоростью 113 мл/ч (o6. скорость 1, 13 ч ), колонку 7 со скоростью 115 мл/ч (об.скорость 1, 15 ч ) в течение 48 ч. Реакционное соотно01 10 шение такого элюата tOO, концентрация метакриламида в элюате 19,3Х.

Пример 14 ° 45 ч ° промытых клеток штамма N-775 (содержание воды

78 ), полученных аэробной культива- . цией с использованием культурной среды, содержащей, .: глюкоза 1; пептон

0 5 дрожжевой экстракт 0 3; солодовый экстракт 0,3; ацетонитрил О, 1;

КН Ð΄ 0,1; MpS0 х 7 Н 0 0,05, 4,5 ч. акриламида, 0,5 ч. N,N -метилен-бис-акриламида и 40 ч. физиологического раствора смешивают с целью получения однородной суспензии. К полученной смеси добавляют 5 ч. 5 -ного водного раствора диметиламинопропионитрила и 10 ч. 2,5 .-ного водного раствора персульфата калия и выдерживают в течение 30 мин при комнатной температуре. Полученные таким образом массивные, содержащие клетки гели дробят на небольшие частицы и промывают физиологическим раствором с получением 100 ч. иммобилизованных клеток.

Такие иммобилизованные клетки загружают в секционную колонку, имеющую несколько секций, каждая из которых имеет объем в 100 мл и содержит 40 г иммобилизованных клеток. 2,5 "ный ме" такрилонитриловый раствор (при использовании 0,05 M фосфатного буфера; рН 8,0) непрерывно подают со скоростью 100 мл/ч сверху самой верхней секции, поддерживая при этом темперао туру внутри колонки, равной 15 С, и метакрилонитрил со скоростью 3 мл/ч добавляют сверху каждой секции 2-7 в течение 48 ч для проведения реакции.

В этом случае в элюате со дна 7-й секции колонки не обнаруживают. метакрилонитрила. Таким образом, реакция прошла на 100 . Содержание метакриламида в этом элюате 19,3 .

Пример 15. Две снабженных кожухами колонны, имеющие внутренний диаметр, равный 3 см, и длину 25 см, каждая из которых заполнена 40 r иммобилизованных клеток (штамм N-771), полученных аналогично примеру 12, соединены друг с другом последовательно, при этом обеспечивается стекание вниз через верхнюю часть колонны 1

4 .-ного водного раствора акрилонитрила (используя 0,05 M и фосфатный буфер рН 8,0), при температуре 10 С, при скорости потока, идущего вниз, 100 мл/ч (SV=-1Ä0 ч ). После этого

100 ч. выходящего потока смешивают с

12 верх колонки 2 со скоростью потока

52,8 мл/ч (SV=0,53 ч ). Затем 100 ч. истечения смешивают с 5,6 ч. акрилонитрила и точно также последовательно пропускают нисходящим потоком через колонку 3, регулируя скорость потока на уровне 55,6 мл/ч (SV=0,56 ч ).

Таким образом, непрерывно получают истечение в виде акриламидного водг ного раствора, не содержащего реагировавшего акрилонитрила, при реакционном отношении 100Х. Концентрация акриламида в этом истечении составляет 20,2Х.

Предлагаемый способ позволяет упростить процесс за счет использования микроорганизмов, сохраняющих стабильную ферментативную активность в течение длительного времени, ведения процесса при низкой температуре, исключить стадию очистки раствора клеток, так как получают прозрачный раствор. При этом концентрация целевого раствора либо выше (32X против 20X), либо находится на уровне известного способа.

1. Способ получения водных растворов акриламида или метакриламида гидролизом соответствующего нитрила при рН 7,0-9,0 с использованием штаммов микроорганизмов, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью упрощения процесса, используют штамм N-771 или

N-774 вида Corynebacterium, или N-775 вида Nocardia, депонированные в Институте ферментативных исследований

Агенства промышленной науки и технологии Министерства международной торговли, город Чиба, и процесс ведут при (-3)-15ОС.

2. Способ по п.1, о т л и ч а ю— шийся тем, что используют штам-. мы, иммобилизованные полиакриламидным гелем.

3. Способ по п.1, о т л и,ч а ю " шийся тем, что процесс осуществляют непрерывно в 3-7 последовательно соединенных колонках.

Приоритет по пунктам.

28. 04. 78 — по пп. 2 и 3;

29. 03. 78 — по п. 1 °

ВНИИПИ Заказ 905/63 Тираж 372 Подписное

1299501

4 ч. акрилонитрила и позволяют стекать вниз через верхнюю часть колонны

2 со скоростью 104 мл/ч (SV=1,04 ч ).

Таким образом, непрерывно получают

4 выходящий поток в форме водного раствора акриламида, содержащего непрореагировавший акрилонитрил при коэффициенте реактивности 100Х. В дополнение к этому концентрация акриламида в этом выходящем потоке составляет 10

1О,ЗХ.

Пример 16. Три колонны, снабженные кожухами, имеющие внутренний диаметр 3 см и длину 25 см, каждая из которых заполнена 40 г иммобилизо- 15 ванных клеток (штамм N-771), полученных аналогично примеру 12, присоединяют последовательно друг с другом, и при этом обеспечивается стекание вниз через верхнюю часть колонны 1 20

4,5Х-ного водного раствора акрилонитрила (используя 0,05 М АосАатный буфАер, рН=8,0), при температуре 5 С, при скорости идущего вниз потока, со ставляющей 50 мл/ч (SV=0,5 ч ). Пос- 25 ле этого 100 ч. выходящего потока сме- шивают с 4,5 ч. акрилонитрила, и позволяют стекать вниз через верхнюю часть колонны 2 со скоростью идущего Ф о р м у л а и з î б р е т е н и я вниз потока 52,3 мл/ч (SV=0,53 ч ). 30

104,5 ч. выходящего потока после этого смешивают с 4,5 ч. акрилонитрила и аналогичным образом позволяют ему стекать вниз через колонну 3, причем в этом случае скорость идущего вниз 35 потока регулируют на уровне 54,5мл/ч (SV=0,54 ч ). Таким образом, в данном случае непрерывно получают выходящий поток при коэффициенте геактивности 1ООХ. В дополнение к этому кон- 40 центрация акриламида в этом выходящем потоке составляет 16,6Х.

Пример 17. Три колонки с рубашкой, внутренним диаметром 3 см, длиной 25 см, заполненные каждая 40 г 45 иммобилизованных клеток (штамм N-7!1), полученных аналогично примеру 12, соединяют друг с другом последовательно, и пропускают 5,6Х-ный водный раствор акрилонитрила (с использованием 50 фосфатного буффера 0,05 М, рН 8) нисходящим потоком через верх колонки 1 при 0 С и при скорости потока 50 мл/ч (SV=0,5 ч ). Затем 100 ч. истечения смешивают с 5,6 ч. акрилонитрила и 55 пропускают нисходящим потоком через

Произв.-полигр. пр-тие, г.

Ужгород, ул. Проектная, 4