Способ определения антистрептолизин- @ -овых антител в крови (его варианты)
Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - упрощение и повышение точности определения. В сьгаоротку крови вносят окисленный стрептолизин- 0, суспензию эритроцитов и перемешивают. В смесь добавляют восстанавливающий раствор, имеющий тиольную группу. Измеряют скорость гемолиза и по калибровочному графику определяют титр антител в исследуемом образце. Способ обеспечивает кинетическое определение антител в процессе гемолиза. 2 с. и 1 з .п. ф-лы. СО
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
Ш4 А 61 К 39 385
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3304334/28-14 (22) 01.07.81 (31) 23215 А/80 (32) 03.07.80 (33) IT (46) -15.01.88. Бюл. 1Ф 2 . (71) Диессе диагностика сенесе С.п.А (lT) (72) Антонио Риччи (IT) (53) 615.373 (088.8) (56) Journal of Clinical Microbiology 10, 1978, с.263-267.
„SU „„1367838 А 5 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИСТРЕПТОЛИЗИН-"0"-Ol3blX АНТИТЕЛ В КРОВИ (ЕГО
ВАРИАНТЫ) (57) Йзобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — упрощение и повышение точности определения. В сыворотку крови вносят окисленный стрептолизин-"0", суспензию зритроцитов и перемешивают. В смесь добавляют восстанавливающий раствор, имеющий тиольную группу. Измеряют скорость гемолиза и по калибровочному графику определяют титр антител в исследуемом образце. Способ обеспечивает кинетическое определение антител в процессе гемолиза. 2 с. и
1 з.п. ф-лы.
1367838
Изобретение относится к области медицины, преимущественно к диагно- . стике инфекционных заболеваний, и может быть использовано для выявления антител к гемолитическому стрептококку, Целью изобретения является упрощение и повышение точности определения.
Способ поясняется следующими примерами.
Пример 1. Определение антистрептолизин-"О"-овых антител в цельной крови.
К 0,01 мл цельной крови, взятой для исследования, добавляют 2 мл забуференного физиологического раство- . ра 0,15 M при рН 7,0 и 20 С, содержащего 5 с V/ìë окисленного стрептолизина -"О". После тщательного перемешивания смесь оставляют при комнатной температуре на 15 мин, после чего к реакционной смеси прибавляют
0,1 мл восстанавливающего раствора, содержащего дитиоэритритол (дитиотреитол, меркаптоэтанол или их смесь) в концентрации 0,001 моль/л, реакционную смесь перемешивают и измеряют ее оптическую плотность при 600 нм.
Анализ полученной при этом спектрофотометрической кривой показал, что изменение в спектральном поглощении реакционной смеси составляет
2 1,5 деления/мин. Это свидетельствует о том, что исследуемый образец крови имеет титр антистрептолизин
-"О"-овых антител 430 ME. В то же время определение по известному способу дало величину, равную 333 ME.
Пример 2 ° Определение антистрептолизин-"0"-овых антител в сыворотке крови.
Раствор окисленного стрептолизина-"О" использовали в концентрации
5 с V/ìë, причем к этому раствору предварительно добавляли промытые эритроциты (0,1 мл эритроцитарного отстоя на каждые 40 мл раствора окисленного стрептолизина-"О" в физиологическом растворе). Использовали эритроциты человека круппы О, Rh (можно использовать эритроциты кролика). Для определения титра антител
0,01 мл исследуемой сыворотки прибавляют к 4 мл раствора окисленного стрептолизина- 0, содержащего суспензию эритроцитов, и смесь тщательно перемешивают.. Затем смесь оставляют в течение 15 мин при комнатной температуре, после чего добавляют
0,2 мл восстанавливающего раствора, содержащего дитиоэритритол, как описано в примере 1. Было выявлено, что скорость изменения спектрального поглощения равна 28,5 делениям/мин. Это соответствует титру антител 260 ME
Предложенный способ по сравнению с известным обеспечивает кинетическое определение антистрептолизин-"О"-овых антител в процессе гемолиза при ис10 пользовании окисленного стрептолизина -"0", что обеспечивает большую точность измерения.
Формула и з обретения
1 Способ определения антистрептолизин-"0"-овых антител в крови путем внесения в исследуемый образец окисленного стрептолизина-"0", инкубации
20 и определения гемолиза, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности определе25 внесения в исследуемый образец окисленного стрептолизина-"О™, инкубации и определения степени гемолиза, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности опре45 деления, в качестве исследуемого образца используют сыворотку крови, в которую вносят лиофилизированный окисленный стрептолизин-"О" в изотоническом забуференном при рН 7,0
50 растворе в концентрации 4-8 с V/ìë и после инкубации смеси осуществляют дополнительную стадию прибавления эритроцитов в количестве, эквивалентном образцу цельной крови, после чения, лиофилизированный окисленный стрептолизин-"О" вносят в изотоническом буферном растворе при рН 7,0
30 в концентрации 4-8 с V/ìë и после инкубации смеси в нее вносят восстанавливающий. агент, имеющий в своем составе тиольную группу и находящийся в изотоническом забуференном при
35 рН 7, О растворе в концентрации
0,001 моль/л, после чего измеряют скорость гемолиза и при помощи калиб ровочного графика, построенного для-" образцов с известным содержанием антител, определяют титр антистрептолизин-"0"-овых антител в исследуемом образце. г
2. Способ определения антистрептолизин-"О"-овых антител в крови путем
1367838
Составитель П.Бонарцев
Техред A.Кравчук
Редактор Л.Веселовская
Корректор С.Шекмар
Заказ 6853/57
Тираж 655
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по.делам, изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Подписное
Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4
ro вносят восстанавливающий агент, имеющий в своем составе тиольную группу и находящийся в изотоническом забуференном при рН 7,0 растворе в кон- центрации 0,001 моль/л и измеряют скорость гемолиза, после чего при помощи калибровочного графика, построенного для образцов с известным содержанием антител, определяют титр антистрептолизин-"0"-овых антител в исследуемом образце.
3. Способ по пп.1 и 2, о т л и— ч а ю шийся тем, что в качестве восстанавливающего агента используют дитиоэритритол, или меркаптоэтанол, или дитиотреитол в концентрации
0,001 моль/л, или смесь этих агентов с конечной концентрацией смеси .0,001 моль/л.
