Способ определения нефропатии при нарушении кровообращения

 

Для раннего выявления гипоксической формы нефропатии в моче исследуют изоферментный спектр эстераз с использованием в качестве субстрата в6 нафтилацетата. Определяют их элект 5офоретическую подвижность относитель но бромфенолового синего. При появлении изоферментов с электрофоретической подвижностью 0,25 и менее диагностируют заболевание.

C0lO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

091 (111

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3517923/28-14 (22) 29.11.82 (46) 29.02.88. Бюл. Р 8

-(71) Волгоградский государственный медицинский институт (72) В.П.Тихонов, Г.И.Мальцева, P.Х.Большакова и 3.Г.Иванова (53) 616.07(088.8) (56) Тихонов В.П,, Колупаева Г.И., Мальцева Г.И. Исследование изоферментов щелочной фосфатазы s моче, Лабораторное дело, 1982, У 2, с.9296.

1511 4 G 01 N 33/48 А 61 В 10/00 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕФРОПАТИИ

ПРИ НАРУШЕНИИ КРОВООБРАЩЕНИЯ (57) Для раннего. выявления гипоксической формы нефропатии в моче исследуют изоферментный спектр эстераз с использованием s качестве субстрата еС-нафтилацетата. Определяют их электрофоретическую подвижность относительно бромфенолового синего. При появлении иэоферментов с электрофоретической подвижностью 0,25 и менее диагностируют заболевание.

1377729

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии, и может быть использовано для ранней диагностики дегенеративных и дистрофических изменений канальцевого аппарата почек вследствие их ишемического повреждения у больных гипертонической бо-. лезнью, хронической недостаточностью кровообращения, диабетическим нефроангиосклерозом, вследствие приема нефротоксических препаратов, при хронических гломерулонефритах, пие-. лонефритах, других возможных приобретенных или врожденных канальцевых нарушениях.

Целью изобретения является раннее выявление гипоксической формы нефропатии за счет того, что в моче исследуют изоферментный спектр эстераз с использованием в качестве субстрата aL-aagxanaqeyara, определяют их электрофоретическую подвижность относительно бромфенолового синего и при появлении изоферментов с электрофоретической подвижностью 0,25 и менее диагностируют гипоксическую форму нефропатии.

Способ осуществляют следующим образом.

Проводится сбор утренней мочи, ее предварительная микроскопия (наличие форменных элементов или сперматозоидов), центрифугирование 20 мин при

3000 об/мин с целью осаждения клеточных элементов, могущих служить источником ферментативной активности. 3a" тем проводят диск-электрофорез мочи в полиакриламидном геле по методу

Орнстейн-Девиса.с использованием 5Х разделяющего геля в аппарате ПЭФА-1, с трисглициновым буфером рН=8,3 для электродных сосудов, в который добавляется краситель бромфениловый синий (5,0 мл 0,001Х-ного р-ра на 500,0 мл буфера),.по отношению к ЭФ-подвижности которого идентифицируются фракции эстераз. Моча (О 1 мл) наносится в стеклянные трубки вместе с сефадексом Г-50. Электрофорез проводится при силе тока 4 мА на каждую трубку.

После электрофореза столбики геля опускают на 15 мин в инкубационную смесь, предварительно профильтрованную, следующего состава: 5 мг

et. — íàôòèëàöåòàòà в 0,3 мл 50Х-ного ацетона, 10 мг Фаст Блю Б соли, ! О мл 0,2 Mфосфатного буфера pH=S,О при 37 "С.

Таким образом, в первом случае, . где можно было ожидать повреждение почек вследствие циркуляторной ише45 мии, и во втором случае вследствие побочного действия фурасемида в моче отмечено появление медленных изоферментов эстераз с ЭФ-подвижностью

О,22 и Оэ25; Оэ22; Оь14; Оэll; 0 ° 09 °

Исследование предлагаемым способом 255 больных с различными заболеваниями {гипертонической болезнью, хронической недостаточностью кровообращения, инфарктом почек, острым инфарктом миокарда, гломерулонефрита" ми, пиелонефритами, диабетическим нефроангиосклерозом, гипоксии у новорожденных детей) показало, что с его помощью можно выявлять ранние из"

Сгущение мочи в 25 раз с помощью диализа против полиэтиленгликоляМ.В.

20000 существенно не влияло на результаты исследования.

Сыворотка крови исследуется аналогичным способом. Для получения экстрактов из органов, кусочек почечной ткани предварительно многократно отмывали от крови дистиллированной водой добела, гомогенизировали с помощью стеклянного пестика, заливали на 24 ч физиологическим раствором и ставили в холодильник, затем центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин и экстракт подвергали электрофорезу.

Пример 1. Больной T. 63 лет с диагнозом острого трансмурального переднего инфаркта миокарда. В первый день болезни эстеразы в моче не выявились. Затем у больного развился кардиогенный шок, анурия, фибрилляция желудочков . После успешных реанимационных мероприятий на второй день в моче стали определяться медленные фракции эстераз (V-V1), исчезнувшие через пять дней.

Пример 2. Больная Ж., 57 лет, с диагнозом ревматизм, активность 1, сочетанный митральный порок с преобладанием стеноза. После приема фурасе" мида на фоне лечения сердечными глико" эндами появилась тошнота, частая экстрасистолия, суточный диурез составил всего 700 мл, В моче до приема диуретиков эстеразы не определялись, после них в порциях мочи, собранных через 4 и 8 ч, отмечено появление медленной фракции эстеразы (V), I

-1377729

Составитель Н . Литвиненко

Техред М.Дидык Корректор М,Шароши

Редактор:Э.Слнган

Тираж-847 - . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д,4/5

Заказ 864/39

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул,Проектная,4 менения в почках, обусловленные ишемическими и токсическими повреждениями канальцевого аппарата..

Предлагаемый способ прост, не требует количественных изменений и соответствуяцей аппаратуры, поскольку является качественной реакцией (наличие или отсутствие медленных изоферментов эстераз в моче), для его выполнения требуются стандартные наборы реактивов и выпускаемый промыш " ленностью аппарат для электрофореза (ПЭФА-1), он основан на известных теоретических предпосылках и обоснован экспериментальными исследованиями.

Формула и зобр е т ения

Способ определения нефропатни при нарушении кровообращения путем исследования мочи, о т л и ч а ю щ и и ° с я тем, что, с целью раннего выявления гипоксической формы нефропатии, в моче исследуют изоферментный спектр эстераз с использованием в качестве субстрата Ы-нафтилацетата, определяют их электрофоретическую подвижность относительно бромфенилового синего и при появлении изофермента с электрофоретической подвижностью 0,25 и менее диагностируют гипоксическую форму нефропатии.