Штамм вибриона viвriо сноlеrае сноlеrае - продуцент гемолизина

 

СО)ОЭ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

09) ГП) А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (46) 30. 04.90. Бюл. )) 16 (21) 4109359/28-)3 (22) 11.08.86 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противо.чумный институт (72) В.С. Уралова и O.П. Фецайлова (53) 576.8.093;3 576.851.31(088.8) (5á) Арутюнов Ю. И., Дрожевкина М.С.,. Черкасов Л.P. и Гольдберг А.M. Характеристика холерных вибрионов, циркулирующих в VII пандемии на различных территориях ЖМЭИ, )982, В 3; ,с. 52-54.

Урбанович Л.Я., Марамович А..С. и Ганны В.С./В кн. Эпидемиология и профилактика особо опасных инфекций в МНР и СССР. — Улан-Батор, )982, ч. 2, с. 114-117. (54) ШТАММ ВИБРИОНА Vibrio cholerae сholerae-ПРОДУЦЕНТ ГЕМОЛИЗИНА (57) Изобретение относится к медицинской.,микробиологии и биотехнологии и может найти применение при решении (5) ) 5 С 12 N 1/20, А 6) К 39/106 вопросов научно-исследовательского характера, а также для получения высокоактивного препарата гемолизина.

Целью изобретения является получение штамма Vibrio. cholerae cholerae

У 461/67-34, способного стабильно и в больших количествах продуцировать гемолнзин. Штамм депонирован в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского противочумного инетитута

"Микроб" под Ф 61. Для получения

В гемолиэина штамм в количестве 10 микробных клеток на I мл засевают в

50 мл дрожжевого бульона, рН 7,1;

После инкубирования при 37 С в течение 24 ч ставят пробу Грейга с неразе веденной культурой и с разведениями в том же бульоне 1:2, 1:10, 1:20, I:50, I:100, I:150, 1:200, I:250, 1:300. Штамм стабильно вырабатывает гемолизин в больших количествах (в пробе по Грейгу в разведении до

I:300). 1 табл.

) 1ч 091

Изобретение относится к медицин-ской микробиологии и биотехнологии и может найти применение при решении вопросов научно-исследовательского

5 характера, а также для получения высокоактивного препарата гемолиэина.

Целью изобретения является получение штамма Vibrio cholerae cholerae Ф 461/67-34, способного стабиль- 10 ,,но и в больших количествах продуцировать гемолизин.. (В природе не известны штаммы классического холерного вибриона, обла дающие постоянной гемолитической ак- 15 ! ! тивностью.

Штамм ЧiЬгхосholerae cholerae Ф 461/67-34 получен при длительных (в течение l года) п)ассажах сначала в щелочном бульоне Мартена, затем — 20 на полужидком агаре с О-холерной сывороткой.

Штамм V.cholerae cholerae 461/67 34 депонирован в Коллекции Всесоюэного научно-исследовательского противо-25 чумного института "Микроб" под 11 61.

Штамм Ч.cholerae cholerae КМ Ф 61 характеризуется следующими признаками..

Культурально-морфологические признаки.

В мазках из агаровых и бульонных культур, окрашенных по Граму, клетки имеют вид грамотрицательных полйморфных слегка изогнутых или прямых палочек. Подвижные. При выращивании в О,ЗХ-ном щелочном агаре наблюдается помутнение всего столбика агара.

На щелочном агаре вибрионы образуют через 18 ч роста при 37 С 0 колонии правильной круглой формы, диаметром 2-2,5 мм с влажной блестящей поверхностью„ прозрачные в проходящем свете, голубоватые — в отражен- . ном. На щелочном бульоне помутнение с нежной пленкой.

Биохимические свойства.

Штамм разлагает глюкозу в аэробИых и анаэробных условиях, минноэу, сахарозу, маннит, крахмал — с образованием кислоты беэ rasa, слабо продуцирует ацетилметилкарбинол, индол, декарбоксилирует лизин, не расщепля ет аргинин, арабиноэу, не ооразует

1 сероводород. Штамм устойчив к

50 ед/мл полимиксина.

Фл гоустойчиезость °

Штамм лиэируется диагностическим фагом эльтор до разведения 10

Фагамы холерным классическим диагнос-, тическим и фагами ХДФ"3,"4,-5 не лиэируется, Серологические свойства.

Штамм не агглютинируется О-холер-. ной сывороткой и типоспецифической сывороткой Инаба, PO-холерной сывороткой агглютинируется до 1/16 титра °

Агглютинируется сывороткой к вибрионам 41 серовара до 1/2 титра.

Штамм является О мутантом классического холерного вибриона по питательным потребностям прототроф.

Знтеропатогенен для кроликов-сосунков в дозе 10 м.к. и вьппе. Облаи дает средней чувствительностью к левомицитину (МИК-5 мкг/мл); налидиксовой кислоте (10 мкг/мл) и стрептоми-. цину (NHK-40 мкг/мл). Стабильно вырабатывает гемолизин в больших коли чествах, активный в отношении эритроцитов барана, кролика, морской свинки, человека, не.активный в отношении куриных эритроцитов.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример I. Суточную агаровую культуру штамма V.cholerae cholerae

KM Ф 61 в количестве 10 микробных

t клеток на 1 мл засевают в 50 мл дрожжевого бульона, рН 7,1 После инкубирования при 37 С в течение 24 ч ставят пробу Грейга с неразведенной культурой и с разведениями в том же бульоне 1:2, 1:10, 1 .,20, 1:50, 1:100, I I50, 1 .200, .1:250, 1:300.

Положительным считается результат при наличии полного лизиса эритроци-тов барана в пробирках с соответствующими разведениями культуральной жидкости

В качестве контроля используют (см. таблицу) исходный негемолитичный штамм Ч. cholerae cholerae

461/67 и .гемолитичийй штамм Ч.cholerae eltor 9949. !

Формула изобретения

Штамм вибриона Vibrio cholerae

cholerae КМ 11 61 — продуцент гемоли зина.

I39I09I

Штамм неразведенный

У.cholerae cholerae КМ У,ál

Ч.cholerae eltor

9949

О мутант классического холерного вибриона Ч.cholerae cholerae

КМ В 61 выбран в качестве продуцента, так как он стабильно вырабатывает гемолиэин в больших количествах (в пробе по Грейгу в yas ведении до ):300).

Составитель О. Тугаринов

Редактор Л. Лашкова Техред N.Ходанич Корректор С. Шекмар

Тираж 502 4 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, .Иосква, Ж-35, Раушская наб,, д, 4/5

Заказ 1694

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

Ч.cholerae cho

1егае У 461/67 .(исхадный штамм) Результат пробы на гемолнэ по Грейгу скультуральной жидкостью