Способ обнаружения микробов в ткани

 

Изобретение относится к медицине, касается инфекционной патологии, гистологии , предназначено для выявления микроорганизмов в патолого-анатомическом материале . Цель изобретения - повышение точности способа за счет установления локализации микробов. Для этого исследуют посмертные гистологические срезы. -Кусочки материала фиксируют в 2,5%-ном р-ре глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,4 с последующей дофиксацией в 2%-ном р-ре осмиевой кислоты, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации , заливают в эпонараладит. На ультратоме «LKB готовят полутонкие срезы, обессмоливают, покрывают генциан-виолетовой фильтровальной бумагой, на нее капают 3-4 капли дистиллированной воды и окращивают 5 мин. Удаляют фильтровальную бумагу, промывают срез, погружают его в р-р Люголя на 5 мин. Промытые и высушенные срезы погружают в ацетон, затем промывают. Далее красят срезы р-ром карболового фуксина в конечной концентрации 0,1-0,15% 3,0-3,5 мин. Затем промывают срезы, просушивают, опускают в ацетон на 2 с, окрашивают 5,0-5,1%-ным р-ром пикриновой кислоты в ацетоне 10- 15 мин. Срезы обрабатывают 3 с ацетоном с ксилолом в соотношении 1:1. Препараты исследуют методом световой микроскопии. Микроорганизмы обнаруживают в виде окрашенных компонентов; грамположительные - синее окрашивание, граммотрицательное - красное окрашивание. i (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (gp 4 G 01 N 1 30 1/06

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

53%3Rг l": (::

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4175588/28-14 (22) 19.01.87 (46) 23.07.88. Бюл. № 27 (71) Научно-исследовательский институт морфологии человека АМН СССР (72) Ю. Г. Пархоменко, И. Н. Емельяненко и Т. Ю. Хазанович (53) 616-018 (088.8) (56) Меркулов Г. А. Курс патогистологической техники. — М.: Медгиз, 1961, с. 234—

235. (54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ МИКРОБОВ В ТКАНИ (57) Изобретение относится к медицине, касается инфекционной патологии, гистологии, предназначено для выявления микроорганизмов в патолого-анатомическом материале. Цель изобретения — повышение точности способа за счет установления локализации микробов. Для этого исследуют посмертные гистологические срезы. -Кусочки материала фиксируют в 2,5%-ном р-ре глютаральдегида на 0,1 M фосфатном буфере с рН 7,4 с последующей дофиксацией в

„„SU„„1411622 А1

2%-ном р-ре осмиевой кислоты, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, заливают в эпонараладит. На ультратоме «1КВ» готовят полутонкие срезы, обессмоливают, покрывают генциан-виолетовой фильтровальной бумагой, на нее капают

3 — 4 капли дистиллированной воды и окрашиваютют 5 м и н. Удаляют фильтровал ьную бумагу, промывают срез, погружают его в р-р Люголя на 5 мин. Промытые и высушенные срезы погружают в ацетон, затем промывают. Далее красят срезы р-ром карболового фуксина в конечной концентрации 0,1 — 0,15% 3,0 — 3,5 мин. Затем промывают срезы, просушивают, опускают в ацетон на 2 с, окрашивают 5,0 — 5,1%-ным р-ром пикриновой кислоты в ацетоне 10—

15 мин. Срезы обрабатывают 3 с ацетоном с ксилолом в соотношении 1:1. Препараты исследуют методом световой микроскопии.

Микроорганизмы обнаруживают в виде окрашенных компонентов: грамположительные — синее окрашивание, граммотрицательное — красное окрашивание. (411622

Формула изобретения

50 (.оста)ватель В. Фролова

Редактор 1(. Т) нина Техрсд И. Верес Корректор В. 1 ярняк

Закан ЗВ)46, ;18 Тираж 847 Подписное

8(i (((.!!11 Рос(гарстнс пно) и к()гинтс) и ((ГР по делич изобретений и открытии

I (8((85, Моски(), Ж 85, Раусиская наб., д. 4(I) ((р()иаво I(Гв IIII()-пос!иср l(l)ll I((к()(ill)(, (приятие, . Ужгород, (.I. !1ро(кти()я, -з

Изобретение относится к медицине, к инфекционной патологии, в частности к гистологии, и может быть использовано для выявления микроорганизмов в патологоанатомическом материале.

Цель изобретения — повышение точности способа за счет установления локализации микробов.

Способ осуществляют следующим образом.

От инфицированного трупа человека через 1 — 3 ч после смерти или зараженного ,животного берут кусочки ткани органов ве,личиной не более 1 мм . Этот материал фик сируют в 2.5Я-ном растворе глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,4(+-0,1 с последующей дофиксацией в 2Я-ном растворе осмиевой кислоты, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации и заливают в эпонараладит. На ультратоме «(КВ» готовят полутонкие срезы толщиной 2—

3 мкм. Затем известным методом обес смоливают испытуемые среды и переходят непосредственно к окрашиванию. Срезы покрывают генциан-виолетовой фильтровальной бумагой, на которую капают 3 — 4 капли, дистиллированной воды и окрашивают в те; .чение 5 мин. Фильтровальную бумагу удаля, ют и промывают срез проточной водой до прекращения отхождения краски. Срезы по гружают в раствор Люголя на 5 мин. Опо ласкивают водопроводной водой. Срезы под, сушивак)т фильтровальной бумагой, погружают в ацетон до прекращения отхожде ния синей краски, затем промывают водопроводной водой до полного удаления ацетона. Далее красят срезы растворов карболового фуксина с конечной концентрацией

0,1- — 0,15Я в течение 3 0 — 3,5 мин, затем промывают препараты в проточной водопроводной воде. Срезы держат в растворе в течение 5 мин, вновь промывают проточной во допроводной водой. Срезы подсушивают фильтровальной бумагой, опускают в ацетон на 2 с, окрашивают 5,0 — 5,1о-ным раствором пикриновой кислоты в ацетоне в течение 10 — 15 мин. Вновь опускают в ацетон на 2 с. Срезы обрабатывают ацетоном с ксилолом в соотношении 1:1 в течение 3 с.

Препараты опускают в первую порцию ксилола на 5 с, во вторую порцию ксилола на 1 мин. Срезы заключают.

Препараты исследуют методом световой микроскопии, при этом присутствующие микроорганизмы обнару>KHBB(oT в виде окрашенных компонентов: грам положительные

35 синее окрашивание, грамотрицательные красное окрашивание.

Пример 1. Часть толстой кишки умершего от сепсиса больного исследовали предлагаемым способом. При окрашивании полутонких срезов карболовым фуксином в концентрации 0,1Я в течение 3,0 мин и дифференцировке 5,0о-ной пикриновой кислотой в течение 10 мин в срезах были выявлены грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы, расположенные как вне-, так и внутрилейкоцитарно. Микробы выявились на серозной оболочке кишки, а также в собственной пластинке ворсинок кишки.

Пример 2. Кусочек головного мозга умершего от сепсиса больного исследовали предлагаемым способом. Для окрашивания срезов использовали раствор карболового фуксина в концентрации 0,15Я. Окраску проводили в течение 3,5 мин. Дифференцировку производили 5,1 Я-ным раствором пикриновой кислоты в течение 15 мин Грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы выявляли в гипофизе и в оболочках головного мозга.

Исследован патолого-анатомический материал от 30 человек, умерших от различных причин инфекционной природы, и материал от экспериментально зараженных мышей. Исследования по известному способу не показали локализации микробов, в то время как по предлагаемому способу выявлена локализация микробов во всех случаях в тканях мозга, кишечника, почках, печени, и других органов.

Применение предлагаемого способа в медицинской и ветеринарной практике поможет установлению верного диагноза, что является важным с точки зрения эпидемиологии, а также для разработки препаратов для лечения и профилактики некоторых заболеваний.

Способ обнаружения микробов в ткани при посмертном исследовании путем окрашивания по Граму гистологических срезов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет установления локализации микробов, дополнительно проводят окрашивание в 0,1 — 0,15о-ном растворе карболового фуксина в течение 3,0 — 3,5 мин и в 5,0 — 5,1 оо-ном растворе пикриновой кислоты в течение 10 — 15 мин.