Способ окрашивания полинуклеотидов и белков в геле
Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии и может быть использовано для высокочувствительного определения нуклеиновых кислот в присутствии белков, а также для определения активности ферментов, участвующих в метаболизме нуклеиновых кислот и при анализе структуры полинуклеотидов. Целью изобретения является избирательное окрашивание полинуклеотидов в присутствии белков и повышение чувствительности окрашивания полинуклеотидов. Изобретение заключается в том, что для селективного окрашивания полинуклеотидов в присутствии белков используют двустадийное окрашивание препаратов, где на первой стадии окрашиваются только полинуклеотиды, но не белки, а на второй благодаря предварительному окислению окрашиваются белки.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН
„„SU, 1401381
А1 (51) 4 G 01 N 33 483, 27 26
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4108699/28-13 (22) 18.08.86 (46) 07.06.88. Бюл. № 21 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт молекулярной биологии (72) И. А. Назаренко и Л. В. Мацкова (53) 575.224.2,577.2 (088.8) (56) Anal. Biochem, 1984, v. 140, р. 178 — 182. (54) СПОСОБ ОКРАШИВАНИЯ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ И БЕЛКОВ В ГЕЛЕ (57) Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии и может быть использовано для высокочувствительного определения нуклеиновых кислот в присутствии белков, а также для определения активности ферментов, участвующих в метаболизме нуклеиновых кислот и при анализе структуры полинуклеотидов.
Целью изобретения является избирательное окра ш иван ие пол и нуклеотидов в присутствии белков и повышение чувствительности окрашивания полинуклеотидов.
Изобретение заключается в том, что для селективного окрашивания полинуклеотидов в присутствии белков используют двустадийное окрашивание препаратов, где на первой стадии окрашиваются только полинуклеотиды, но не белки, а на второй благодаря предварительному окислению окрашиваются белки.
1401381
Формула изобретения
Составитель T. Забойкина
Редактор A. Ворович Техред И. Верес Корректор Л. Пилипенко
Заказ 2535)43 Тираж 847 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к молекулярной б1 ологии и биотехнологии и может быть и пользовано для высокочувствительного опр деления нуклеиновых кислот в присутствии б лков, а также для определения активности ферментов, участвующих в метаболнзме нуклеиновых кислот и при анализе сТруктуры полинуклеотидов.
Цель изобретения — избирательное окрашивание полинуклеотидов в присутствии б лков и повышение чувствительности окраивания полинуклеотидов.
Белки и полинуклеотиды в геле окраивают в две стадии. На первой стадии п оводят обработку геля солью серебра и ормальдегидом для выявления исключит льно полинуклеотидов, а на второй стаии гель обрабатывают известным спосоом вначале окислителем, затем солью с ребра и формальдегидом для дополнильного выявления белков.
Новым, по сравнению с известным спообом, признаком является введение стадии редварительной обработки геля солью сеебра и формальдегидом, что приводит к збирательному окрашиванию полинуклеоти ов при одновременном снижении фона и
r овышении чувствительности.
Пример. РНК фага q> 6 и белок химорипсиноген по 0,5 мкл наносят на 20о
ААГ капельным способом, высушивают в ечение 30 мин при комнатной темперауре. Окрашивание геля осуществляют в две тадии.
Гель фиксируют в 200 мл 10о -ного аствора уксусной кислоты, содержащего
ОЯ-ный этанол, течение 3 ч, затем ромывают дистиллированной водой 3 раза о 5 мин и погружают на 30 мин в 0,1оп-ный аствор азотнокислого серебра.
Затем гель промывают дистиллированной водой 2 раза по 10 — 20 с и помещают в раствор 0,02Я-ного формальдегида ЗЯ-ного Ма СОз на 5 — 10 мин (до появле1 ния окраски). Остановку реакции осуществляют, помещая гель в 1Я-ную уксусную кислоту на 5 мин.
Затем гель фиксируют в 200 мл 10Я-ной уксусной кислоты, содержащей 30 -ный этанол, в течение 3 ч, промывают водой 3 раза по 5 мин и погружают на 5 мин в раствор окислителя (0 0034 M бихромат калия в 0,0032 н. азотной кислоте) . После этого гель отмывают дистиллированной во10 дой 3 раза по 5 мин и погружают на 30 мин в 0,1Я-ный раствор азотно-кислого серебра.
После этого гель промывают дистиллированной водой 2 раза по 10 — 20 с и помещают в раствор 0,02о -ного формальдегида
15 о
ЗЯ-ного Ха СОз на 5 — 10 мин (до появления окраски) . Остановку реакции осуществляют, помещая гель в 1о",-ную уксусную кислоту на 5 мин. Способ на первой стадии обеспечивает окрашивание только РНК и ДНК, на вто20 рой стадии прокрашиваются и белки, при этом чувствительность окрашивания НК на полосу составляет более 0,001 мкг и не менее 0,0001 мкг по белку.
Окрашивание гелей серебром позволяет выявить фрагменты РНК длиной до 6 — 10 нуклеотидов. Причем, полинуклеотиды различного состава окрашиваются с разной интенсивностью и образовавшиеся комплексы различаются по цвету.
Способ окрашивания полинуклеотидов и белков в геле путем последовательной обработки геля бихроматом калия, солью серебра и формальдегидом, отличающийся тем, что, с целью избирательного окрашивания полинуклеотидов в присутствии белков и повышения чувствительности окрашивания полинуклеотидов, гель предварительно обрабатывают солью серебра и формальдегидом.
