Способ определения индивидуальной чувствительности к левамизолу при ревматоидном артрите

 

Изобретение относится к медицине , точнее к ревматологии, предназначено для лечения больных ревматоидным а тритом (РА) путем выявления иммунологически лиц с хорошим прогнозом для лечения иммуностимуляторами (например, левамизолом). Цель изобретения - повышение точности прогноза. Для этого выделяют мононукпеарные (МНК) клетки периферической крови, делят их на несколько проб. В одной из них определяют кол-во восстановленных Е-розеткообразующих клеток (вЕ-РОК). В других пробах определяют активность спонтанных и индуцированных ФГА Тс (фитогемагелютининов Т-супрессоров) в присутствии левамизола. При повышении кол-ва супрессоров и увеличенном содержании Ве-РОК по сравнению с показателями у здоровых лиц и при снижении их кол-ва под действием левамизола на 4% и более делают вывод об индивидуальной чувствительности к левамизолу. i (Л

СОЕЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5ц 4 Г 01 N 33/53, 33/49

1 .r i !i

: I

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМЮ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

15

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИНМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4080572/28-14 (22) 20. 06.86 (46) 30.01.89. Бюл. № 4 (71) Институт клинической иммунологии .

СО АМН СССР (72) В.С. Ширинский, Н.М. Старостина, В.С. Кожевников и В.Ф. Прокофьев (53) 615.375(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР по заявке № 4079444/14, кл. G 01 N 33/53, 1986. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ЛЕВАМИЗОЛУ ПРИ

РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ (57) Изобретение относится к медицине, точнее к ревматологии, предназначено для лечения больных ревматоидным артритом (РА) путем выявления имчунологически лиц с

Изобретение относится к медицине, в частности к ревматологии, и может быть использовано для лечения больных ревматоидным артритом (PA) путем выявления иммунологическим методом среди них лиц с хорошим прогнозом для лечения иммуностимуляторами.

Цель изобретения — повышение точности прогноза.

Способ осуществляется следующим образом.

Для прогнозирования лечения левамиэолом подбирают больных PA I-II степени активности процесса с предшествующей неэффективностью лечения

„.SUÄÄ 1455318 А1 хорошим прогнозом для лечения иммуностимуляторами (например, левамизолом). Цель изобретения — повьппение точности прогноза. Для этого выделяют мононуклеарные (MHK) клетки периферической крови, делят их на несколько проб. В одной из них.. определяют

Р кол-во восстановленных Е-розеткообразующих клеток (вЕ-РОК). В других пробах определяют активность спонтанных и индуцированных ФГА Тс (фитогемагелютининов Т-супрессоров) в присутствии левамизола. При повышении кол-ва супрессоров и увеличенном содержании Be-POK по сравнению с показателями у здоровых лиц и при сниже- д нии их кол-ва под действием левамизола на 47 и более делают вывод об индивидуальной чувствительности к левамизолу.

С: другими баэисными препаратами или их непереносимостью.

Мононуклеарные клетки (MHK) периферической крови человека выделяют центрифугированием гепаринизированной веноэной крови в градиенте плотности (1,077 г/мл) фиколла-верографина. Собранные с интерфаэы МНК трижды отмывают фосфат-эабуференным физиологическим раствором (рН 7,2-7,3) и готовят клеточную суспенэию в культуральной среде. Выход МНК в среднем составляет 1,2 х 10 клеток из 1 мл

6 крови. Их разделяют на несколько проб. В одной иэ них определяют изз

145 начальное количество вЕ-POK. Для этого свежие эритроциты барана (ЭБ) трехкратно отмывают в физиологическом растворе, далее готовят 1Х-ную суспензию. Смесь ЭБ (0,2 мл) и МНК (0,2 мл 2,5 х 10 в 1 мл) центрифугируют при 1000 об/мин 5 мин, инкубируют 90 мин при 37 С, а затем 16-.

18 ч при 4 С. Затем надосадок слива:ют, клетки ресуспендируют и подсчитывают процентное содержание вЕ-РОК.

В других пробах определяют активность спонтанных и индуцированных ,ФГА Тс. Культивирование клеток осу-! ,ществляют в герметически закрьггых

;стеклянных флаконах из-под пеницил6 ,лина. Взвеси МНК (1 х 10 клеток/мл

;в среде 199+20 сыворотки IV группы) соответственно преинкубируют 24 ч, 1

; инкубируют ФГА 10 мкг/мл 72 ч. За: тем первичную культуру лимфоцитов .:обрабатывают 30 мин митомицином С.

Затем лимфоциты отмывают средой, 199 и вносят в культуры аллогенных

,,доноров при соотношении клеток 1:1.

: Вторичные культуры стимулируют ФГА 10 мкг/мл. Интенсивность пролиферации учитывают через 72 ч по включении Н -тимидина (удельная активность 15-25 Ки/моль) в нуклеопроте(! идные фракций клеток. Н -тимидин ,; добавляют за 4 ч до окончания куль: тивирования в конечной концентрации

; 4 мКи/мл на флакон, После окончания культивирования клетки отмывают однократно холодным фосфат-забуференнЫм физиологическим раствором, инкубируют в течение ночи в 51-ном (вес/ ,/объем) растворе трихлоруксусной кислоты. Нерастворимые фракции переносят на миллипоровые фильтры с диаметром пор 0,23 или 0,4 мкм, которые затем помещают в сцинтилляционные виалы. Радиоактивность экспериментального материала подсчитывают в сцинтилляционном счетчике Mark-30.

Параллельно в пробах МНК определяют чувствительность к левамизолу. Для этого предварительно МНК больных PA инкубируют с 1 мкг/мл левамизола (2,5Х х 10 клеток в 1 мл среды 199

6 в течение 1,5 ч при 37 С). Затем определяют значения тех же показателей под действием левамизола.

При изначальном содержании вЕР0К более 37,5Х и снижении их под действием левамизола не менее чем на

4Х, повышении активности спонтанных

5318 4

35 ао

Тс не менее чем на б и индуцированных ФГА Тс не менее чем на 5,5%> считают целесообразным назначение левами з ола.

Пример 1. Больная Н., 27 лет.

Клинический диагноз: классический ревматоидный артрит, серопозитивный, медленно прогрессирующее течение, активность II, рентгенологическая стадия III. НФ-I.

Содержание вЕ-POK 557 изменение содержания под влиянием левамизола

in vitro 327. Изначальная активность неспецифических Тс: спонтанные 147., индуцированные ФГА 157., изменение активности Тс под действием левамизола

in vitro: спонтанные 37Х, индуцированные ФГА,257.. Сравнение полученных значений с нормативными свидетельствовало о том, что содержание вЕ-POK у данной больной повышено, а активность неспецифических Тс снижена. Под влиянием левамизола iп itlo происходит достоверное изменение показателей, их суммарная информативность равна 13,3. Отсюда вероятность положительного клинического эффекта у больной составляет 957, при вероятности отрицательного эффекта 57, назначение левамизола оправдано. Больной назначен декарис по 150 мг 1 раз в неделю, что привело к уменьшению выраженности суставного синдрома в течение года, начиная с 4 мес лечения, снижению активности воспалительного процесса и замедлению прогрессирования эрозивного артрита.

Пример 2. Больная С,, 39 лет.

Клинический диагноз: определенный ревматоидный артрит, серопозитивный, медленно прогрессирующее течение, активность I, рентгенологическая стадия II, НФ-I. Содержание вЕ-РОК 57Х, изменение содержания под влиянием левамизола in vitro 301. Активность неспецифических Тс:спонтанные О, индуцированные ФГА ОХ. Изменение активности Тс под действием левамизола

in vitro: спонтанные б77, индуцированные ФГА 28Х. Сравнение полученных значений с нормативными свидетельствовало о том, что содержание вЕ-POK у этой больной повышено, а активность

Тс равна О. Под влиянием левамизола

in vitro изменились значения показателей, их суммарная информативность равна 13,3; назначение левамизола оправдано. Клинически наблюдался полоФормула изобретения

Составитель В. Литовченко

Техред М.дидык Корректор М Самборская

Редактор Л. Пчолинская

Заказ 7452/53

Тираж ?88 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 145 жительный эффект в течение 1,5 лет получения больной декариса по 150 мг в неделю.

Пример 3. Больная Д., 24 года. Клинический диагноз: ревматоидный ар три т, сер оп о з и тивный, медле н но прогрессирующее течение, активность

II, рентгенологическая стадия II, НФ-I I.

Содержание вЕ-POK 17, которое под влиянием левамиз ола п vitro повысилось до 19 . Активность неспецифических Тс: спонтанные 11, индуцированные ФГА 15 . Под влиянием левамизола

in vitro изменения их активности не произошло. Сравнение полученных значений показателей с нормативными свидетельствовало о том, что содержание вЕ-POK и .активность Тс в данном случае понижены и под действием левамизола in vitro не произошло достовер.ного изменения этих показателей. Следовательно, вероятность того,.что лечение левамизолом у данной больной неэффективно, составляет 95 .. Назначение препарата не оправдано.

Действительно, прием больной декариса по 150 мг привел не к уменьшению признаков суставного синдрома, а к активизации процесса. Больная после 4 мес приема левамизола была вынуждена увеличить дозу метиндола до

5318 6

6 таблеток в сутки, через 2 мес декарис был отменен как неэффективный.

Таким образом, предлагаемый комплекс иммунологических показателей обладает высокой прогностической мошностью распознавания эффективности лечения левамизолом (95%-ная вероятность прогноза по сравнению с 78% по прото1 0 типу) Способ определения индивидуальной чувствительности к левамизолу при ревматоидном артрите, включающий забор крови, выделение мононуклеаров, определение числа спонтанных и фитогемагглютийин индуцированных Т-суп2р рессоров в присутствии левамизола, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в крови дополнительно определяют количество восстановленных Е-розеткооб25 разующих клеток и при повышении количества супрессоров и увеличенном содержании восстановленных Е-розеткообразующих клеток по сравнению со здоровыми лицами и при снижении их

Зп количества под действием левамизола на 4% и более определяют наличие индивидуальной чувствительности к левамизолу.