Способ получения антисыворотки к клеткам селезенки

 

Изобретение относится к экспериментальной иммунологии, гематологии и онкогематологии, а именно к способам получения препаратов для экспериментальных, диагностических и лечебных целей. С целью повышения специфичности целевого продукта к эритробластам селезенки сначала получают антигенный материал из клеток селезенки донора, которую предварительно обогащают введением фенилгидразина. Затем антигенный материал вводят реципиенту другого вида и из его крови выделяют сыворотку, которую далее инактивируют, абсорбируют и тестируют.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

И:.СПУБЛИН (51) 5 G 01 И 33/531

I I Лай;.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

llO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦТИЯц

ПРИ ГКНТ СССР (46) 23.09,90.Бюл. К- 35 (21) 3895725/28-14

{22) )5.05.85 (71) Научно-исследовательский институт клинической иммунологии СО ANH

СССР (72) В.А. Козлов, И.Г. Цырлова и В«В. Чеглякова (53) 615.373(088.8)

)(56) Краскина й.А. Антииимроинтарниа сывороточные препараты, их биологи, ческие свойства и применение в эксперименте и клинике. Лис. на соиск. учен. степении д-ра мед, наук. И., 977. (54) СПОСОВ ПОЛУЧКНИЯ АНтИСЫВ0РотКИ

К КЛЕ ХКАИ СЕЛЕЗЕНКИ

Изобретение относится к иммунологии и гематологии, а именно - к способам получения препаратов для экспериментальных и диагностических целей.

Целью изобретения является повышение специфичности целевого продукта к зритробластам селезенки.

Способ осуществляется путем введения животному-донору фенилгидрозина, выделения клеток его селезенки, введения этих клеток животному-рециниенту с последукщим забором кро ки и выделением импульсной сыворотки, Пример. Для приготовления антигенного материала используют в качестве доноров ьвппей (СВА w C57BL)F, °

Иышам вводят феннлгидразнн-гидрохлорид (OP), например,. по схеме 0,4Х р-р по 0,25 мл внутрибрюшинно в 17, 9 и 17 и следующего дня. Через 16„.ЯО„„И54686 А1 (57) Изобретение относится к экспериментальной иммунологии, гематологии и онкогематологии, а именно к способам получения препаратов для экспериментальных, диагностических и лечебных целей. С целью повышения специфичности целевого продукта к зри-.робластам селезенки сначала получают антигенный материал из клеток селезенки донора, ко-орую предварительно обогащают введением фенилгидразина. Затем антигенный материал вводят реципиенту другого вида и из

его крови вьщеляют сыворотку, которую далее ннактивируют„. азсорбируют и тестируют. 3

«й

- 20 ч после последнего введения селезенки с индуцированным ФГ эрнтропоззом забираюта готовят клеточную суспензню, которую затем освобощпают от популяции прилипающих к пластику,. клеток инкубацией на пластиковых чашках прп 37 c s течение 45 мин в 4вю среде 199 с добавлением 30Х сыворот- Я) ки крупного рогатого скота, с кон- фф центрацией клеток на чашках (i015) 10 в мм. Далее суспензню освобождают от зрелых эритроцитов, напри мер, гемолитическим штоком с помощью дистиллированной воды с последующим ,восстановлением изотонии 3,5Х-ным раствором Nacl

В качестве реципиента выбирают животного другого вида, например кролика. Для получения иьмуногенной дозы (500 ЧО кл) необходимо 35 мы6

1454086

Способ получения антисыворотки к клеткам селезенки, включающий выделение клеток селезенки у животного-донора, введение их животному» реципиенту с последующим забором крови и выделении. иммунной сыворотки, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности це левого продукта к зритробластам селезенки, перед выделением клеток животному-донору вводят фенилгидразине

Составитель Л.Падюков

Техред Л.Сердюкова . Корректор С.Черни

Редактор Т.Куркова

Ц Ю В И Ю

Заказ 3330 с4 Тираж 510 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР !

13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4 шей-доноров (на одного кролика). Далее клеточную суспензию вводят внутривенно кролику двукратно с интервалом 2 недели. Через 7-10 дн забирают кровь, из которой получают сыворотку, осаждая форменные элементы центрифугированием. Далее сыворотку инактивируют в водяной бане при 56 С в течение 1 ч и абсорбируют трехкратно 10 эритроцитами перекрестного вида, например крысы„ и вида, сингенного до" нору, например мьппи. П этом случае плотный осадок зритроцитов после центрифугирования составляет 303 от объема сыворотки, Далее абсорбцию ведут гдмогенатом печени вида, сингениого донору (в данном случае взрос" лой мьппи), встряхиванием в течение

1-1,5 ч, берется 0,1 мл осадка на

i мл сыворотки. Далее абсорбцию ведут клетками тимуса и лимфоузлов мыши (10 кл на 1 мл сыворотки) в те.чение ч.. Тестирование сыворотки проводят по цитотоксическому эффекту на различные лимфо- и гемопозтические попу" .ляции, клетки эмбриональной печени, . клетки селезенки новорожденных мышей, спленоциты животных после гипоксии, клетки эритропоэтической селезенки, индуцированной введением фенилгидрязина, клетки костного мозга,лимфоцитов, тимуса, интактной, селезенки.

И результате проведения цитотоксического анализа с полученной антисывороткой наблюдается 60+11X цитотоксичности с клетками селезенки мышей, обработанных фенидгидраэином„ 68+9X — с клетками эмбриональной печени и 45+ 102 - с клетками селезенки мышей после гипоксии. Цитотоксичность по отношению к клеткам костного мозга, лимфоуэлов и тимуса составляет 0-3Х.

Таким образом, в сравнении с известной антисывороткой и клеткам селезенки. наблюдается лишь незначи- . тельная активность в отношении лим- фоидных клеток и повышение специфичности к эритробластам селезенки. Эта сыворотка может быть использована при количественном анализе эритро- ; бластов и в целях их специфического удаления.

Формула изобретения