Способ определения белка в листьях растений

 

Изобретение относится к биологическим исследованиям, а именно к определению белка в свежих листьях селектируемых растений, и может быть использовано в растениеводстве. Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени определения. Навеску листьев измельчают, взвешивают и обрабатывают биуретовым реактивом, содержащим K, NA - винокислый при следующем соотношении компонентов, г/л: CUSO<SB POS="POST">4</SB> 2-4, NAOH - 7-9, K, NA - винокислый 8-10, вода дистиллированная до 1 л. Полученный окрашенный центрифугат фотометрируют на синем светофильтре и определяют содержание белка по формуле: X=D<SP POS="POST">.</SP>20, где X - содержание белка, % D - оптическая плотность раствора

20 - коэффициент перевода, в %. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СО<ИАЛИСТИ ЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ и A BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР

1 (2 1) 4229496/30-15 (22) 09.03.87 (46). 23.09.89. Бюл. N 35 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт каракулеводства (72) В.Г.Шиманов, Л.Е.Салиева и С.Ю.Кучинский . (53) 664.38(088.8) (56) Асатиани В.С. Руководство по биохимической методике/Под ред. проф. И.Т.Кутателадзе. Иэд-во Груз. медгиэ, 1939, с. 109. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА В ЛИСТЬЯХ РАСТЕНИЙ (57) Изобретение относится к биоло-. гическим исследованиям, а именно к определению белка в свежих листьях

Изобретение относится к биологическим исследованиям, а именно к определению белка в свежих листьях селектируемых растений, и может быть использовано в растениеводстве.

Цель изобретения — повышение точности и сокращение времени определения.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Приготавливают биуретовый реактив, для чего в 0,2 н. (0,8X) растворе щелочи растворяют 9 г К, Na винокислого и 3 г сернокислой меди (CuSO<)

В 10 мл этого раствора растирают в ступке навеску пробы О,1 г листьев до мазеобразного состояния. Затем

„„SU,„, 1508996 А 1 (gg 4 А 01 G 7/00, G 01 N 33/48

2 селектируемых растений, и может быть использовано в растениеводстве, Цель изобретения — повышение точности и сокращение времени определения. Навеску листьев измельчают, взвешивают и обрабатывают биуретовым реактивом, содержащим, К, Na винокислый при следующем соотношении коМпонентов, г/л:

CuS0 2-4, ИаОН 7-9, К, Na винокислый 8-10, вода дистиллированная до л. Полученный окрашенный центрифугат фотометрируют на синем светофильтре и определяют содержание белка по формуле: Х = D 20, где Х - содержание белка, Ж, D — оптическая плотность . раствора; 20 — коэффициент. перевода, X. 2 табл. эту смесь центрифугируют при

8000 об/мин в течение 1-2 мин. Полученный раствор зеленого цвета фотометрируют при синем светофильтре (длина волны 430 + 10 нм). Процентное содержание белка в листьях рассчитывают по формуле

Х = D 20, где D — показатель оптической плотности;

20 — коэффициент перевода в проценты.

Пример 1. Берут навеску

0,1 г листьев терескена, помещают в фарфоровую ступку, растирают с

10 мл биуретового реактива состава:

8 r К, Na винокислого и 2 г - uSO+

3 150899 и растворяют в 0,175 н, (0,7%) растворе щелочи. Затем в течение 2 мин центрифугируют при 8000 об/мин и центрифугат фотометрируют на ФЭК-. 56М

5 в кювете 10 мл при синем светофильтре и получают показатель оптической плотности реакционной смеси, равный

0,97. Подставляя в формулу, получают содержание белка в листьях 19,4%.

Пример 2. Берут навеску

О, 1 r пробы листьев терескена, помещают в фарфоровую ступку, растирают с 10 мл биуретового реактива состава

9 r К,Na винокислого и 3 г CuS0< и растворяют в 0,2 н. (0,8%) растворе щелочи. Затем в течение 2 мин центрифугируют при 8000 об/мин и центрифугат фотометрируют на ФЭК-56М в кювете 10 мл при синем светофильт- 20 ре и получают показатель оптической плотности реакционной смеси, равный

1,00, подставляя в формулу, получают процентное содержание белка в листьях терескена 20Х, При максимальном количественном соотношении компонентов реактива про центное содержание белка больше 20%, что не соответствует действительности

Способ определения белка в листьях растений, включающий измельчение пробы, ее взвешивание и обработку биуретовым реактивом, центрифугирование и фотометрирование центрифугата, о т30 л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, пробу обрабатывают водным раствором.биуретового реактива с добавкой К, Na винокислого, 35 а полученный окрашенный центрифугат фотоколориметрируют на синем светофильтре и определяют содержание белка по формуле

Х = D 20, .40 где Х вЂ” содержание белка, %;

D — - оптическая плотность раствора, 20 — коэффициент перевода, %.

Таблица 1

Вид растений

Содержание белка, %, по методу

Кьельдаля предлагаемому

10,33

9,94

7,0

19,76

8,7

15 0

17,0

14,5

10,00

9,80

7,40

19,69

8,80

15,40

17,40

14,80

Изень песчаный

Изень Мальгузарский

Изень песчаный

Полынь вытянутая

Изень каменистый

Полынь ферганская

Изень пустынный

Кейреук

В табл. 1 приведены сравнительные д Иные по содержанию белка в растенИях аридной зоны, определенные по методу Кьельдаля и предлагаемому способу.

Как видно из табл. 1, величина ошибки определения лежит в интервале 1-3Х.

Процентное содержание белка стандартных растворов, определяемое по

6 4 предлагаемому способу, представлено в табл. 2.

По табл. 2, не проводя математических расчетов, можно определять процентное содержание белка, зная оптическую плотность раствора. Например, для терескена получают оптическую плотность, равную 1,00, после расчета получают 20% белка. Если найти в табл. 2 данную оптическую плотность, то ей соответствует 20Х белка.

Предлагаемый способ является объективным способом определения содержания белка в листьях растений и на проведение анализа затрачивается 45-50 мин.

Сокращение времени определения достигается за счет отсутствия операций осветления и фильтрования через фильтр с пористой пластинкой.

Формула изобретения

1508996

Содержание белка, 7, по методу

Кьельдаля

Вид растений предлагаемому

7,9

4,00

20,00

10,40

11,80

9,40

8,8

8,9

4 10

20,00

10,00

12,00

9,03

8,5

Камфоросма фаришская

Камфоросма джамбульская

Количество Содержание белхлорофилла, ка, 7.

Оптическая плотность

Камфоросма стандартная

Саксаул черный

Терескен

Изень каменистый

Чогон

0,01

0,02

0,03

0,04

0,05

0,06

0,07

0,08

0,09

0,1

0,11

0,12

0,13

0,14

0,15

0,16

О, 17

О, 18

0,19

0,2

0,21

0,22

0,23

0,24

0,25

0,26

0,27

0,28

0,29

0,3

0,31

0,32

0,33

0,34

0,35

0,36

09 0001

0,0002

0,0003

0,0004

0,0005

0,0006

0,0007

0,0008

0,0009

0,001

0,0011

0,0012

0,0013

0 0014

0,0015

0,0016

0,0017

0,0018

0,0019

0,002

0,0021

0,0022

0,0023

0,0024

0,0025

0,0026

0,0027

0,0028

0,0029

0,003

0,0031

0,0032

0,0033

0,0034

0,0035

0,0036

Продолжение табл.1

Таблица 2

0,2

0,4

0,6

0,8

1,2

1,4

1,6

1,8

2,0

2,2

2,4

2,6

2,8

3,0

3,2

3,4

3,6

3,8

4,2

4,4

4,6

4,8

5,2

5,4

5,6

5,8

6,2

6,4

6,6

6,8

7,0

7 2

1508996

11родолжение табл.2

Количество Содержание белхлорофилла,г ка, 7 з

Оптическая плотность

0,37

0,38

0,39

0,4

0,41

0,42

0,43

0,44

0,45

0,46

0,47

0,48

0,49

0,5

0,51

0,52

0,53

0,54

0,55

0,56

0,57

0,58

0,59

0,6

0,61

0,62

0,63

0,64

0,65

0,66

0,67

0,68

0,69

0,7

0,71

0,72

0,73

0,74

0,75

0,76

0,77

0,78

0,79

0,8

0,81

0,82

0,83

0,84

0,85

0,86

0,87

0,88

0,0037

0,0038

0,0039

0,004

0,0041

0,0042

0,0043

0,0044

0,0045

0,0046

0,0047

0,0048 .

0,0049

0,005

0,0051

0,0052

0,0053

0,0054

0 0055

0,0056

0,0057

0,0058

0,0059

0,006

0,0061

0,0062

0,0063

0,0064

0,0065

0,0066

0,0067

0,0068

0,0069

0,007

0,0071

0,0072

0,0073

0,0074

0,0075

0,0076

0,0077

0,0078

0,0079

0,008

0 0081

О, 0082

0,0083

0,0084

0,0085

0,0086

0,0087

0,0088

7,4

7,6

7,8

8,2

8,4

8,6

8,8

9,2

9,4

9,6

9,8 l0

10,2

10,4

10,6

10,8

11

11,2

l1 4

11,6

11,8

12

12,2

12,4

12,6

12,8

13

13,2

13,4

13,6

13,8 !

14,2 !

4,4

14,6

14,8

15,2

15,4

15,6

15,8

16

16,2

16,4 !

6,6

16,8

17

17,2

17,4

17,6

)508996

10 Продолжение табл. 2

Количество Содержание белхлорофилла, ка, X г

Оптическая плотность!

Составитель Л..Квардакова

Редактор M. Бланар Техред И.Верес Корректор В. Гирняк

Заказ 5744/2 Тираж 621 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. /5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,!01

0,89

0,9

0,91

0,92

0,93

0,94

0,95

0,96

0,97

0,98

0,99

1э!

1,2

1,3

1,4

1,5 l,6

1,7

1,8

1,9

0,0089

0,009

0,0091

0,0092

0,0093

0,0094

0,0095

0,0096

0,0097

0,0098

0,0099

0,01

0,011

0,012

0,013

0,014

0,015

0,016

0,017

0,018

0,019

0,02

17,8

18

18,2

18,4

18,6

18,8

19

19,2

19,4

19,6

19,8

22

24

26

28

32

34

36

38