Способ исследования клеток печени

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии. Целью является раздельное выявление стромальных и паренхиматозных клеток, а также их соотношения в печени. Цель достигается тем, что биоптат печени фиксируют в 2,5%-ном растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере рН 7,2-7,4. Далее проводят щелочную диссоциацию в 50%-ном растворе КОН. При этом инкубацию с щелочью проводят при температуре 37-38°С в течение 3-5 ч. до 7-7,5 ч. После первой диссоциации получают паренхиматозные клетки и их ядра, а через 7-7,5 ч диссоциации получают стромальные клетки и ядра паренхиматозных клеток. Способ позволяет точно определить соотношение стромальных и паренхиматозных компонентов ткани в печени.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ .Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPblTHRM

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4322695/28-14 (22) 28.10.87 (46) 07.10.89. Бюп. Р 37 (71) Тюменский государственный медицинский институт (72) А.Г.Гиновкер, Л.Е.Немировский и И.Г.Соловьева (53) 616-0.89.9 (088.8) (56) Бродский В.Я., Цирекидзе Н.Н., Коган М.Е. и др. Измерение абсолютного числа клеток в сердце и печени.

Цитология, 1983, 25, 3, 260-265. (54) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии. ЦеИзобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет раздельного определения паренхиматозных и стромальных клеток и их ядер.

Способ осуществляют следующим образом.

Из печени получают биоптат. Далее биоптат помещают в 2,5Х-ный раствор глютарового альдегида, приготовленный на фосфатном буфере рН 7,2-7,4, на 20-24 ч. Затем биоптат переносят в 507-ный раствор КОН и выдерживают о в термостате при 37-38 С в течение

3-5 ч. Часть биоптата извлекают из щелочи, а часть продолжают инкубировать до 7-7,5 ч.

„„SU 1513390 А 1 (ду 4 С 01 И 1/28, А 61 В 10/00

2 . лью является раздельное выявление стромальных и паренхиматозных клеток, а также их соотношения в печени. Цель достигается тем, что биоптат печени фиксируют в 2,53-ном растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере рН 7,2-7,4. Далее проводят щелочную диссоциацию в 50Х-ном растворе КОН, При этом инкубавию с щелочью проводят о при температуре 37-38 С в течение

3-5 ч до 7-7,5 ч. После первой диссоциации получают паренхиматозные клетки и их ядра, а через 7-7,5 ч диссоциации получают стромальные клетки и ядра паренхиматозных клеток. Способ позволяет точно определить соотношение стромальных и паренхиматозных компонентов ткани в печени.

Печень затем переносят в дистиллированную воду при комнатной температуре, помещают в центрифужные пробирки, встряхивают 20-30 раз, постукивая по пробиркам, пепетируют, получают рав- .. . номерную суспензию.

Наибольшую каплю .суспензии помеща1 ют на предметное стекло, накрывают покровным и анализируют в фазовом конт расте. После экспозиции 3-5 ч учитывают число одноядерных печеночных клеток,, двуядерных печеночнык клеток, сумму. паренхиматозных клеток. 3

После 7-7,5 ч экспозиции учитывают число ядер паренхиматозных клеток и ядер непар енхимато з ных (стромальных) клеток.

3 1513390 4

Пример, . Биоптат печени здо- клеток печени, а соответств= .ыо более ровой. При обработке биоптата предла- точно рассчитать их соотношение, что гаемым способом выявлено, что через важно при оценке состояния ткани пе3 ч экспозиции на препарате число 5 ченн. одноядерных и двухядерных печеночных клеток равно 73 и 327. от общего колиФормула изобретения чества клеток. Способ исследования клеток печени

Через 7 ч диссоциации число парен-. путем фиксации ткани, щелочной дис. химатозных клеток равно 139, а стро- 10 социации„приготовления клеточной мальньм 61. При получении результата .; суспеизии, мазка клеток и исследоварассчитали соотношение стромальных и ния под микроскопом, о т л и ч а юпеченочных клеток в печени, оно равно шийся тем, что, с целью повыше36Х, т.е. на 65 ядер стромальных при- ния точности способа за счет раздельходится 116 паренхиматозных. 15 ного определения паренхиматозных и

Общее число клеток. равно 181, ко- стромальных клеток и их ядер, фиксаторое принято за 100 . Следовательно, цию проводят в глютаровом альдегиде общее отношение паренхиматозных и в течение 20-24 ч а щелочную диссоб стромальных клеток равно 64:36. циацию " при 37-38 С, при этом паренСпособ позволяет точно выделить 20 химатозные клетки и их ядра получают ядра и клетки стромальной и паренхи- через 3-5 ч диссоциации, а стромальматоэной ткани печени, что дает воэ- ные клетки и ядра паренхиматозных можность учесть как тех, так и других клеток — через 7-7,5 ч диссоциации.

Составитель Л.Стебаева

Редактор Н.Бобкова Техред А.Кравчук Корректор С.Шекмар

Заказ 6075/45 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,301