Способ получения биологически активных мукополисахаридов

 

Изобретение относится к получению биологически активных мукополисахаридов деполимеризацией гепарина, применяемых в биологии и медицине. Изобретение позволяет повысить выход целевого продукта до 80% и упростить способ его получения. Деполимеризацию гепарина осуществляют в водной среде при концентрации гепарина 8-12 мас.% и температуре 15-20°С в присутствии в реакционной среде 0,03-0,07 моль нитрита натрия. Предварительно вводят в реакционную смесь соляную кислоту до PH 2,5-2,95, а по окончании деполимеризации доводят рН реакционной смеси до 7 и осаждают целевой продукт. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 4 С 08 В 37/10

OllHCAHHE ИЗОБРЕТЕНИЯ

К IlATEHTY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 3527184/23-05 (86) РСТ/FR 82/00069 (09.04.82) (22) 09. 12. 82 (31) 8107283 (32) 10.04.81 (33) FR (46) 23.12.89, Бюл. У 47 (71) Шоай С.А. (FR) (72) Жан-Клод Лормо, Морис Петиту и Жан Шоай (FR) (53) 54/.458 (088.8) (56) Патент СССР N - 1209033, кл. С 08 В 37/10, 1979. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ МУКОПОЛИСАХАРИДОВ (57) Изобретение относится к получеИзобретение относится к получению биологически активных мукополисахаридов, способных специфически управлять некоторыми этапами свертывания крови и проявляющих более ñелективную, чем гепарин, активность по отношению к более ограниченному количеству факторов свертывания крови, например к активиронанному фактору Х или фактору Ха крови, может быть использовано в биологии и медицине.

Целью изобретения является повышение выхода биологически активных мукополисахаридов при упрощении способа.

Пример 1. В 15 л дистиллироо ванной воды при + 20 Г растворяют

1500 г гепарина (10%-ный раствор) с соотнош .вием YN/ USP около 1 и с титром 15Р, равным 160 ui, Добавляют

„„Я0„„1531859 A 3

2 нию биологически активных мукополисахаридон деполимеризацией гепарина, применяемых н биологии и медицине.

Изобретение позволяет повысить выход целевого продукта до 807. и упростить способ его получения. Деполимеризацию гепарина осуществляют в водной среде при концентрации гепарина 8-12 мас.7. и температуре 15-20 С в присутствии н реакционной среде

0,03-0,07 моль нитрита натрия. Предварительно вводят н реакционную смесь соляную кислоту до рН 2,5-2,95, а йо окончании деполимеризации доводят рН реакционной смеси до 7 и осаждают целеной продукт. 1 табл.

51,8 г нитрита натрия, растноренного в 30 мл дистиллированной воды (0,05 M), и снижают рН до 2,5 с помощью чистой с.оляной кислоты.

Тогда происходит реакция, за ходом которой следят до установления отсутствия азотистокислых ионов. Через 40 мин определяют через равные промежутки времени наличие или отсутствие азотистокислых ионов в реакционной среде, для чего используют иодкрахмальную бумагу, проводя проверку каждые 5 мин. Через 60 мин реакции азотистая кислота полностью расходуется, и н реакционной смеси не остается больше ионов N0 . Тогда значение рН доводят до 7 с помощью чистой щелочи натрия, а продукты реакции выделяются посредством добавления 31 л чистого этанола (2 объема).

1531859

Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием, промывают этанолом и высушивают в вакууме при 60 С, Получают 1200 r мукополисахаридов

5 (М11С) со следующими характеристиками:

Титр USP 19 Ui/мг

Титр APTT 3 ui/мг

Титр Yin u Wessler 202 u/ìã

Содержание нитритов/

10 нитратов с4 м.д.

Молекулярная масса полученного продукта 2000-8000. Содержание цепей, имеющих сродство к ATIII, составляет

207. Выход продукта 807.. Продукт содержит 37 цепей гексасахаридов, 27 тетрасахаридов, 07 дисахаридов.

Пример 2. Проводя процесс по методике примера 1, исходя из 107.ного раствора гепарина (100 г/л), по- 2, лучают М11С с соотношениями YW/ USP, в зависимости от концентрации введенного в реакцию NANO . Результаты приведены в таблице.

Предпочтительные МПС соответствуют МПС, полученным ñ использованием

0,03-0,07 М На(1о

Молекулярная масса и выход получаемого продукта аналогичны примеру 1.

Пример 3. В 10 л дистиллиро30 ванной воды при температуре окружающей среды (15 (;) растворяют 1000 г годного для инъекций гепарина с титром USP 170 ui/ìã и с. титром YW

160 u/мг. Добавляют 38 г нитрита нат- 35 рия (конечная молярная концентрация

0,055 М), растворенного в 200 мл воды. Значение рН сразу снижают до 2,5, используя чистую соляную кислоту.

Реакцию контролируют, как в примере 1, через регулярные промежутки времени (5-10 мин). Примерно через 30 мин ионы 110 больше в реакционной среде не обнаруживаются. Тогда значение рН доводят до 7 с помощью раствора 5 N 45 едкого патра: продукть1 реакции выделяют путем добавления 21 л чистого этанола (2 oбъема), Образовавшийся остаток отделяют центрифугирсванием, промывают этанолом и высушивают в 50 о вакууме при 60 С. Выход продукта 807,:

Пслучан>т 780 г порошка белого цвета со следунн(ими характеристиками:

Титр 08Г 22 ui/ìã

Титр Yiu 11 Иessler 260 u/Mr 55

Титр Л1 Т 1 10 ui /мг

Содер,к,IHlle н((тритсвлитра 1< . : 5 м.д.

Средний молекулярный нес менее

6000.

Процентное содержание вещества с молекулярным весом, превосходящим

10000, менее 17..

Пример 4. Используют реакционную смесь, содержащую в 125 мл дистиллированную воду, 10 г гепарина (8мас.7.) и 380 мг (0,055 М)1 нитрита натрия. рН снижают до 2,95 за счет добавления чистой соляной кислоты и смесь перемешивают в течение примерно 45 мин.

Получают продукт деполимеризации с выходом 807 титра (БР 34 (и на мг и YW 219 ед. на мг.

Пример 5. Осуществляют аналогично ((римеру 4, но используют 15 r тепарина (12,0 мас.7,). Получают деПОЛИМЕРИЗОВа((НУЮ СМЕСЬ с аНаЛОГИЧНЫми характеристиками полученных продуктон:

USP 32 м.е./мг.

YW 226 ед./мг.

Вь1ход продукта 807.

Изобретение позволяет получить

1биологически активные мукополисахариды с выходом 807. при содержании реактинных цепей с 6,4 и 2 звеньями caxIlpa I(o 57. (707 по известному способу) и цепей, имеюг(их сродство к ATIII до 20% (27 по известному Uïîñîáó). упрощение способа по равнению с известным обуслов.ц нс снижением числа стаД(пй И От< УтстВИЕМ КОНТРОЛЯ За продолжительно т(,н реакции деполимеризации, уменьшением объемов реакционной среды, благодаря повышенной концентрации гепарпна (8-12 мас.7. по сравнению с 3,3 мас.7.). формул а и з о б р е т е н и я

Способ получения биологически акгивных мукополисахаридов деполимеризацией гепарина в водной среде в присутствии продукта, образующего азоти< тую кислоту, с последующим осаждением мукополисахаридов этиловым сПИРтОМ, О т Л И Ч а Н1 Щ И и с Я тЕМ, что, с целью повышения выхода биологи1(е ки активных мукополисахаридов прн упрощении способа, в качестве продукта, образу(I)(((el азотистую кисЛОту, ИсПОЛЬЭук1т НИтрИт НатрИя Прн

I1oHLIeHTplll(HI(eI o 11 р акцпоннсй среде 0,03-0,07 мо (1 It;Ie полимеризац(гю ! (уllle(гвллнп пес:1е в11 -;(ения в реакциО11Н, Н1 сыпt Ь СОЛ(lлсll ГИ J 11! Л ) СОЭ

5 1531859 6 дания рН 2,5-2,95 при концентрации туре 15-20ОС, при этом перед осажгепарина 8,0-12,0 мас.X и темпера- дением доводят рн среды до 7.

Концентрация . ИаИО, 11

Отношение титров YW Величина соотношения к титрам 1БР ИПС титров

Составитель О. Рокачевская

Редактор В.Бугренкова Техред И.Ходанич

Корректор О.Иипле

Заказ 7969/58 Тираж 411 Подписное

ВН1911П1 Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГЕНТ С(:

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Пронзнодственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,1О1

0,03

0,04

0 05

0 05

0,07

0,08

0,1 (140/51) (214/26) (250/19) (194/12) (201/9) (132/6,4) (110/2) 2,7

13

16

22

19