Способ окраски полутонких аралдитных срезов

 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в гистологии. Целью изобретения является выявление тонких клеточных и тканевых структур для исследования на светооптическом и электронномикроскопических уровнях. Способ окраски полутонных аралдитных средств заключается в использовании комплексного красителя, содержащего метиленовый синий, азур 11, спирт, глицерин, этиловый спирт, дистиллированную воду, с последующей для ференцировкой в растворе малеиновой кислоты в 50%-ном этаноле.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) А1 (,„4 а 01 я 1/30

ГОСУДАРСТВЕННЫЧ1 НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР р (21) 4245012/28-14 (22) 26.05.87 (46) 30.12, 89, Бюл. 9 48 (7 1) Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины AMH

СССР (72) Г.Л,Зельцер (53) 615.475 (088.8) (56) Карупу В.Я. Электронная микроскопия, Киев,: Высшая школа, 1984, с. 208. (54) СПОСОБ ОКРАСКИ ПОЛУТОНКИХ АРАЛДИТНЬП(СРЕДСТВ (57) Изобретение относится к медиИзобретение относится к медицине и может быть использовано в гистологии.

Целью изобретения является выявление тонких клеточных и тканевых структур для исследования на светооптическом и электронно-микроскопическом уровнях, Пример. Проводится морфологическое исследование кусочка коронарной артерии больного Н., полученного во время операции аорто-коронарного шунтирования. Немедленно после взятия кусочек фиксируют в модифици" рованном фиксаторе Карновского,содержащем половинную концентрацию формальдегида и глютаральдегида (2 и

2,57. соответственно) на 0,1 М какодипатном буфере рН 7,4 с добавлением сахарозы до 0,15 М концентрации, в течение 2 ч при 4 С, После трехкрат2 цине и может быть использовано в гистологии. Целью изобретения является выявление тонких клеточных и тканевых структур для исследования на светооптическом и электронно-микроскопическом уровнях, Способ окраски полутонких аралдитных средств заключается в использовании комплексного красителя, содержащего метиленовый синий, азур IX, спирт, глицерин,этиловый спирт, дистиллированную воду„ с последующей для ференцировкой в растворе маленковой кислоты в 50Х-ном этаноле, ной промывки образца в 0,1 М какоди-, латном буфере рН 7,4 с 0,15 М саха розой при 4 С в течение 0,5 ч выполняют постфиксацию 17.-ным раствором, четырехокиси осмия на том же буфере с сахарозой 2 ч при 4 С.

Дегидратацию в спиртах и окиси пропилена, заключение в аралднт выполняют общепринятым способом, Полутонкие и ультратонкие срезы образцов получают при резке блоков на ультратоме, Полутонкие срезы окрашивают по предлагаемому способу, ультратон кие срезы после нанесения на сетки контрастируют цитратом свинца по

Рейнольдсу и насыщенным раствором уранилацетата в 70Х-ном спирте, Просмотр и фотографирование полутонких срезов проводят на установке

Axiomat (фирма Opton, ФРГ), ультратонких — на трансмиссионном электрон1532839

Формула из обретения

Составитель А.Чирков

Техред М.,Цидык

Редактор Т.Парфенова

Корректор N.Øàðîøè

4a ь»

Заказ 8092/49 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 ном микросКопе ЕМ-10ОВ при ускоряю 1ем напряжении 75 кВ, Полутонкие срезы окрашивают 30 с

s растворе красителя следующего сос5 тава, мас.%.:

Метиленовый синий 0,2

Толуидиновый синий 0,ã

Азур lI 0,2

Бикарбонат натрия 3,0

Глицерин 20,0

Этиловый спирт 30,0

Дистиллированная вода 46,4 и дифференцируют 10-15 с (или до мо- 15 мента отхождения голубого облачка)

0,2%-ным раствором малеиновой кислоты в 50%-ном этаноле, Результаты окрашивания, Микроско.пическое исследование окрашенных полутонких срезов показало, что биоп, тат коронарной артерии представляет собой липидно-фиброзную бляшку, Ци1 топлазма основных клеточных элементов бляшки - пенистых клеток — приобретает голубой цвет, ядро — синий, ядрьппки и хроматин ядра — темно-синий. На фоне голубой цитоплазмы отчетливо выделяются крупные серо-коричневые липидные капли, мелкие си" 30 не-зеленые липидные вакуоли, темнокрасные лизосомы. Кроме пенистых клеток хорошо видны сохранившиеся эн" дотелиальные и гладкомышечные клетки, бледно-голубые кристаллы холестерина в центральной зоне бляшки, мета35 хромазия межуточного вещества,связан ная,. по-видимому, с накоплением кислых гликозаминогликанов. В бляшке присутствует большое число средних

40 и малых лимфоцитов, а также клеток плазмоцитарного ряда, что не является частой находкой в атеросклеро« тических поражениях. Обнаруженные особенности бляшки могут свидетельствовать об аутоиммунном .компоненте в патогейезе атеросклероза у данного больного. Для уточнения этого предположения проводится электронно- микроскопическое исследование параллельных ультратонких срезов, которое подтвердило присутствие промежуточных клеточных форм плазмоцитарного ряда и зрелых плазматических клеток, выявило фрагментацию и лизис коллагеновых и эластических волокон в мес. тах скопления этих клеток в бляшке, установило наличие лимфоцитарно-мак» рофагальных и лимфоцитарно-гладкомышечных контактов, Все эти ультраструктурные изменения дополняют и подтверждают диагноз, поставленный больному на основании изучения полу" тонких аралдитных срезов, окрашенных по предлагаемому способу, В соответствии с уточненным клииико-морфологическим диагнозом больному в послеоперационном периоде рекомендованы иммуномодуляторы, Способ окраски полутонких аралдитных срезов путем их обработки,красителем, содержащим раствор толуидинового синего в щелочной среде, с последующей дифференцировкой, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью выявления тонких клеточных и тканевых структур для исследования на светооптическом и электронно-микроскопическом уровнях, в состав красителя дополнительно введены метиленовый синий, азур II, этиловый спирт; бикарбонат натрия и глицерин при следую цем соотношении компонентов, мас.%:

Метиленовый синий 0,1-0,2

Толуидиновый синий 0,.1-0,2

Азур IX О 1-0,2

Бикарбонат натрия 2,5-3,0

Глицерин 10-20

Этиловый спирт 25-30

Дистиллированная вода Остальное а последующее дифференцирование проводят 0,1 — 0,2%-ным раствором малеи-, новой кислоты в 50%-ном этаноле,