Ассоциированная вакцина против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой вакцину, ассоциированную против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней. Целью изобретения является повышение иммуногенности целевого продукта. Вакцина содержит антигены лептоспир серологических групп Pomona и Tarassovi, вируссодержащий материал штамма Parvovirusporaina И-82 с гемагглютинирующей активностью 1-256-1:512 ГАЕ/0,025 см3 подобранные в оптимальных антигенных соотношениях, в качестве инактиватора формалин или формалин и димер этиленимина, а в качестве адъюванта - гидроокись алюминия и белок сыворотки крови. Вакцина позволяет создать иммунитет высокой напряженности и продолжительности у животных при однократной вакцинации. 4 табл.
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой ассоциированную вакцину для профилактики лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней. Целью изобретения является повышение иммуногенной активности целевого продукта. П р и м е р 1. Вакцина, ассоциированная против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней, имеет компонентный состав, приведенный в табл.1. П р и м е р 2. Для приготовления ассоциированной вакцины против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней готовят следующие компоненты. А. Лептоспирозный компонент. Производственные штаммы лептоспир ВГНКИ-6 (Pomona) и ВГНКИ-4 (Tarassovi) выращивают раздельно на сывороточной питательной среде в течение 7-10 дней до накопления каждого штамма лептоспир 70-150 млн/см3, смешивают штаммы (1:1), добавляют формалин до конечной концентрации 0,23-0,27% , выдерживают 10-12 ч, делят на две равные части и к одной из них добавляют трихлоруксусную кислоту до 3-3,1%-ной концентрации для осаждения белка среды и лептоспир. Белок среды (0,35-0,7%) переходит в состояние геля и вместе с лептоспирами выпадает в осадок. Через 3-4 ч декантируют 60% надосадочной жидкости. После сгущения концентрация лептоспир составляет 100-180 млн/см3 микробных клеток. Осадок нейтрализуют аммиаком, смешивают со второй половиной культуры, затем добавляют 6%-ный раствор гидроокиси алюминия в количестве 29-30%. Б. Парвовирусный компонент. Эпизоотический штамм парвовируса И-32 вносят в суспензию перевиваемой культуры клеток почки поросенка (ППК) в ростовой среде, состоящей из ФГМ-С с 10%-ным содержанием сыворотки крови крупного рогатого скота в соотношении 1:250-1:500, и инкубируют до выраженного цитопатического действия (4-5 сут.). Культуральные сосуды интенсивно встряхивают, содержимое собирают в стеклянные бутылки или флаконы и устанавливают рН 7,4-7,6. Вируссодержащие сосуды инкубируют при минус 20оС, а затем оттаивают при комнатной температуре. Процедуру повторяют трехкратно. Получают вируссодержащий материал с активностью вируса в РГА 1:256-1:512 ГАЕ/0,025 см3. Вирус инактивируют формалином, содержащим не менее 37% формальдегида. При постоянном помешивании к вируссодержащей суспензии добавляют 20%-ный раствор формалина до конечной концентрации 0,23-0,27% или димер этиленимина до 0,24-0,36%-ной концентрации. Инактивацию вируса проводят при 37оС в течение 72 ч. После добавления формалина устанавливают рН 7,3-7,4 с помощью 7,5%-ного раствора натрия углекислого кислого. К инактивированной формалином вирусной суспензии добавляют стерильный гель гидроокиси алюминия в соотношении 5:3, тщательно перемешивают и оставляют на 20 ч при 4оС. В. Ассоциированную вакцину получают путем смешивания инактивированных сконцентрированных антигенов лептоспир и инактивированной культуры парвовируса в соотношении 1
108-1,8108 или микробных клеток 10-21% вируса с титром 1: 256-1: 512 ГАЕ/0,025 см3 в расчете на 1 л вакцины. Полученную таким образом вакцину, ассоциированную против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней, расфасовывают и контролируют на стерильность, безвредность и активность. Таким образом готовят четыре серии ассоциированной вакцины. В двух сериях содержание компонентов в 1 см3 в 1 л препарата следующее: Бакмасса лептоспир ВГНКИ-4 (Tarassovi) и ВГНКИ-6 (Pomona) концентрацией мик- робных клеток 1,8108 430,0 Вируссодержащая культуральная жид- кость парвовируса свиней штамма И-82 активностью 1:512 ГАЕ/0,025 см3 190,0
Формалин или форма-
лин+димер этилени- мина 2,1+0,06 Гидроокись алюминия 300,0 Белок сыворотки крови 2,7 Вода Остальное
В двух других сериях содержание компонентов в 1 см3 в 1 л препарата составляет:
Бакмасса лептоспир
ВГНКИ-4 (Tarassovi) и
ВГНКИ-6 (Pomona) кон-
центрацией микробных клеток 1106 млн 450,0
Вируссодержащая куль-
туральная жидкость пар-
вовируса свиней штамма
И-82 активностью 1:256 ГАЕ/0,025 см3 210,0
Формалин или фор-
малин+димер этилени- мина 2,3+0,08 Гидроокись алю- миния 340,0 Белок сыворотки крови 5,2 Вода Остальное
П р и м е р 3. Проводят испытания вакцины, ассоциированной против лептоспироза и парвовирусной инфекции свиней, с различным соотношением компонентов в составе вакцины. Для этого парвовирусный и лептоспирозный антигены смешивают в следующих соотношениях в расчете на 1 л вакцины: 19-21% вируса с титром 1:256-1:512 ГАЕ/0,025 см3, 7,5107-1,3108 лептоспир (1); 19-21% вируса с титром 1:256-1:512 ГАЕ/0,025 см3, 8,5107-1,6108 лептоспир (2); 19-21% вируса с титром 1:256-1:512 ГАЕ/0,025 см3, 1108-1,8108 лептоспир (3); 19-21% вируса с титром 1:256-1:512 ГАЕ/0,025 см3, 1,5108-2,7108 микробных клеток (4). Каждой смесью антигенов вакцинируют однократно внутривенно по 5-7 кроликов. Иммунитет у вакцинированных животных оценивают по титру специфических антител в РМА и РТГА. Контролем служат животные, вакцинированные против лептоспироза животных (Pomona+Tarassovi и ГОА) формолвакциной против парвовирусной инфекции свиней. Результаты испытаний вакцины при различных соотношениях компонентов приведены в табл.2. Испытания показали, что оптимальными являются соотношения компонентов в вакцине 19-21% вируса с титром 1:256-1:512 ГАЕ/0,025 см3, 1108-1,8108 микробных клеток лептоспир. Меньшие соотношения компонентов не вызывают достаточной стимуляции иммунного ответа, а большие не приводят к улучшению результатов. П р и м е р 4. Изучены адъювантные свойства ассоциированной вакцины в сравнении с монопрепаратами, а также напряженность иммунитета у вакцинированных животных. Ассоциированная вакцина содержит адъювант, принципиально отличающийся по составу от моновакцин, включающий 4,4%-ный гель гидрата окиси алюминия в количестве 30,0-34,0% , сывороточный белок 0,27-0,52% антигены лептоспир и парвовируса свиней. Напряженность иммунитета к лептоспирозу изучают по превентивной активности сыворотки крови кроликов, вакцинированных ассоциированной вакциной с различным содержанием парвовирусного и лептоспирозного компонентов и поливалентной вакциной против лептоспироза у животных (контроль). Кровь у вакцинированных животных берут через 15, 21, 26 и 40 дней после вакцинации, получают сыворотку и вводят ее золотистым хомякам в дозе 0,5 см3. Через 2 ч после введения сыворотки опытных и контрольных зверьков заражают вирулентным штаммом лептоспир в дозе 10 ЛД50. Результаты опыта представлены в табл.3. Из табл. 3 видно, что напряженность иммунитета у животных максимальная при введении ассоциированной вакцины в соотношении парвовирусного и лептоспирозного компонентов в расчете на 1 л препарата 19-21% вируса с титром 1: 256-1:512 ГАЕ/0,025 см3, 1108-1,8108 лептоспир. Сыворотка крови животных, полученная на 40 день после вакцинации, защищает 100% хомяков. Наличие иммунитета по отношению к парвовирусной инфекции определяется в РГГА в те же сроки, в качестве контроля используют группу животных, вакцинированных ГОА формолвакциной против парвовирусной инфекции свиней. Титры антител максимальные, такие же, как и в предыдущем опыте, при соотношении компонентов: 19-21% вируса с титром 1:256-1:512 ГАЕ/0,025 см3, 1108-1,8108 микробных клеток лептоспир. Результаты опыта представлены в табл.4. Таким образом, при соединении двух антигенов в ассоциированной вакцине в соотношении компонентов из расчета на 1 л 10-21% вируса с титром 1:256-1: 512 ГАЕ/0,025 см3, 1108-1,8108 микробных клеток лептоспир и изменении состава адъюванта проявляется синергетический эффект действия, который выражается в увеличении напряженности иммунитета как к парвовирусу, так и к лептоспирам. П р и м е р 5. Проводят исследования по изучению иммунизирующей дозы ассоциированной вакцины для свиней. Вакцинация ассоциированной вакциной профилактирует внутриутробное заражение плодов, их гибель, аборты, рождение мумифицированных поросят. Вакцина предназначена для иммунизации свиноматок и хряков-производителей. Препарат вводят однократно внутримышечно перед покрытием в дозе 5-7 см3. Иммунитет у животных наступает через 14-20 дней после вакцинации и сохраняется до 6-8 мес. Испытание различных доз ассоциированной вакцины показало, что оптимальной является доза ассоциированной вакцины 7 см3, при которой напряженность и продолжительность иммунитета как к лептоспирозу, так и к парвовирусной инфекции свиней являются максимальными. Меньшие дозы ассоциированной вакцины не обеспечивают формирования иммунитета достаточной напряженности и продолжительности как по отношению к лептоспирозу, так и по отношению к парвовирусной инфекции свиней, а применение ассоциированной вакцины в больших дозах является нецелесообразным, так как увеличивает расход препарата без увеличения его иммуногенности.
Формула изобретения
108 - 1,8 108, из антигенов парвовируса - вируссодержащую культуральную жидкость штамма Parvovirus porcine И-82 с гемагглютинирующей активностью вируса 1 : 256 - 1 : 512 ГАЕ/0,025 см3, в качестве инактиватора - формалин, а в качестве адъюванта - смесь геля гидроокиси алюминия и белка сыворотки крови при следующем соотношении компонентов, об.%:Антигены лептоспир ВГНКИ-4 и ВГНКИ-6 с концентрацией микробных тел 1
108 - 1,8 108 43,0 - 45,0Вируссодержащая культуральная жидкость штамма Parvovirus porcine И-82 с активностью 1 : 256 - 1 : 512 ГАЕ/0,025 см3 19,0 - 21,0
Формалин 0,23 - 0,27
Гель гидроокиси алюминия 30,0 - 34,0
Белок сыворотки крови 0,27 - 0,52
Вода Остальное
РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Дата прекращения действия патента: 22.07.2005
Извещение опубликовано: 20.07.2006 БИ: 20/2006
