Штамм вируса virus distemper canis "владимир" для изготовления вакцины против чумы плотоядных и вакцины "владивак" против вирусных болезней плотоядных на его основе

 

Изобретение предназначено для производства средств специфической профилактики и лечения чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных. Аттенуированный новый штамм Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП" используют для изготовления вакцины против чумы плотоядных и ассоциированных вакцин против болезней плотоядных. Вакцина "Владивак" против чумы плотоядных содержит культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор. Ассоциированная вакцина "Владивак-2" против чумы и парвовирусного энтерита плотоядных содержит культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ 18-ДЕП с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл, культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор. Ассоциированная вакцина "Владивак-3" против чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных содержит культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл, культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂, культуральную вирусную суспензию штамма Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log₂ и любой известный стабилизатор. Изобретение повышает иммуногенную активность и расширяет иммуногенный спектр вакцин на основе штамма вируса чумы плотоядных, способных обеспечить длительный и надежный иммунитет против вирусных заболеваний, вызываемых различными ассоциациями возбудителей. 4 с.п. ф-лы.

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной вирусологии и касается средств специфической профилактики и лечения болезней плотоядных, в частности, к средствам специфической профилактики чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита.

Возбудители этих болезней играют ведущую роль в этиологии инфекционных заболеваний собак и пушных зверей. Указанные инфекции возникают у плотоядных как в виде моноинфекций, так и смешанных вирусных инфекций.

Для профилактики чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и гепатита плотоядных используют моновалентные и ассоциированные вакцины.

Известна вакцина для профилактики чумы плотоядных, содержащая культуральную суспензию аттенуированного штамма "ЭПМ" (патент РФ N 2067002, А 61 К 39/175, 1996).

Известна вакцина для профилактики аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита, содержащая инактивированный штамм аденовируса "Ада", обладающего антигенным родством с вирусом инфекционного гепатита собак, и адъювант - гидроокись алюминия (патент РФ N 1568520, C 12 N 7/00, 1995).

Известна также вакцина против парвовирусной инфекции плотоядных на основе штамма панлейкопении кошек "Ганнибал" (авторское свидетельство СССР N 1413752, А 61 К 39/33, 1986).

Однако известные моновалентные вакцины требуют проведения профилактических обработок против каждой инфекции в отдельности, не достаточно эффективны и не обеспечивают максимального профилактического эффекта, т.к. все чаще встречается смешанное течение инфекционных заболеваний.

Известна также ассоциированная вакцина для профилактики чумы, инфекционного гепатита, аденовирусных инфекций и парвовирусного энтерита у собак "Тетравак", содержащая инактивированную вирусную суспензию штамма аденовируса "Ада", инактивированную вирусную суспензию штамма панлейкопении кошек "Ганнибал", вирусный материал штамма вируса чумы ЭПМ, гидроокись алюминия, сорбит-желатозный стабилизатор, раствор Хенкса и воду дистиллированную (патент РФ N 2030917, А 61 К 39/295, 1995).

Недостатком известной ассоциированной вакцины является невысокая иммуногенная активность.

Задачей изобретения является получение штамма вируса чумы плотоядных и вакцин на его основе, обладающих широким антигенным спектром и высокой иммуногенной активностью, тем самым обеспечивающих защиту плотоядных от вирусных заболеваний, вызываемых различными ассоциациями возбудителей.

Технический результат изобретения заключается в повышении иммуногенной активности и расширении иммуногенного спектра вакцин на основе штамма вируса чумы плотоядных, способных обеспечить длительный и надежный иммунитет против вирусных заболеваний, вызываемых различными ассоциациями возбудителей.

Сущность изобретения заключается в следующем: аттенуированный высокоактивный новый штамм вируса чумы плотоядных Virus distemper canis "Владимир" получен из селезенки байкальской нерпы и многократно пассирован в перевиваемой культуре клеток Vero. Штамм депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно- исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) и имеет регистрационный номер "Владимир-18-ДЕП".

Штамм вируса чумы плотоядных "Владимир" характеризуется следующими свойствами: Морфология. Капсид сферической формы, окруженный двуслойной оболочкой, размером 200 нм в диаметре. Семейство Paramyxoviridae, род Morbilivirus.

Антигенные свойства. В реакции нейтрализации (РН) нейтрализует специфические сыворотки, полученные на данный штамм вируса и штаммы вируса "Вакчум" и "ЭПМ".

Культуральные свойства. Штамм размножается в культуре клеток.

Vero с титром не выше 4,0 lg ТЦД 50/мл.

Имуногенная активность. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.

Преобладающий тропизм. Эпителиотропный.

Серологическая характеристика штамма. Активен в реакции нейтрализации (РН).

Безвредность штамма. Не контагиозен для собак. При внутривенном, внутримышечном и подкожном заражении собак и хорьков не вызывает заболевания.

Стабильность. Штамм стабилен, при длительном хранении и поддержании сохранение титра в течение 2 лет, антигенная активность сохраняется не менее 2 лет и на протяжении не менее 20 пассажей.

Штамм поддерживается путем заражения перевиваемой культуры клеток Vero один раз в 2 года.

Аттенуированный штамм вируса Vims distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП" используют для изготовления вакцины "Владивак" против чумы плотоядных и ассоциированных вакцин "Владивак 2" против чумы и парвовирусного энтерита и "Владивак-3" против чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита собак.

Вакцина "Владивак" против чумы плотоядных содержит в качестве антигена культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 Ig ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор.

Ассоциированная вакцина "Владивак-2" против чумы и парвовирусного энтерита плотоядных содержит в качестве антигена чумы культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis ВГНКИ N 18-ДЕП с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл, в качестве антигена парвовируса - культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл и любой известный стабилизатор.

Ассоциированная вакцина "Владивак 3" против чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных "Владивак-3" содержит в качестве антигена чумы культуральную вирусную суспензию штамма Virus distemper canis N "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл, в качестве антигена парвовируса - культуральную вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂, в качестве антигенов аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита - Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log и любой известный стабилизатор.

Для изготовления ассоциированных вакцин "Владивак-2" и "Владивак-3" используют высокоактивные новые аттетуированные штаммы Canine parvovirus "Риэль" и Hepatitis adenovirus canine "Адель".

Аттенуированный штамм Canine parvovirus "Риэль" получен путем проведения 48 пассажей в культуре клеток почек котенка вирулентного штамма парвовируса собак и депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Штамм Canine parvovirus "Риэль" характеризуется следующими свойствами: Морфология. Безоболочечный икосаэдр диаметром 20-24 нм, семейство Parvoviridae, род Parvovirus.

Иммуногенные свойства. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.

Безвредность штамма. При внутривенном, оральном, подкожном, внутримышечном и внутрибрюшинном введении не вызывает заболевания собак.

Преобладающий тропизм. Эпителиотропный.

Гемагглютинирующие свойства. Агглютинирует эритроциты свиньи и зеленой мартышки.

Серологические свойства. Активен в РН и реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

Культуральные свойства. Штамм размножается в первичной и субкультуре клеток почек котят с титром 5,67 lg ТЦД 50/мл, перевиваемой культуре клеток CrFK, MDCK, KF.

Стабильность штамма. Антигенная активность сохраняется не менее 1 года на протяжении не менее чем 20 пассажей. Сохранение титра - в течение 1 года, активности в РТГА - 9 log в течение года.

Штамм поддерживается путем заражения первичной или субкультуры клеток почек котенка один раз в год.

Аттенуированный штамм вируса Hepatitis adenovirus canine "Адель" получен путем проведения 12 пассажей в культуре клеток MDCK вирулентного штамма аденовируса собак тип 2 и депонирован в коллекции вирусов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Штамм "Адель" характеризуется следующими свойствами: Морфология. Безоболочечный капсид кубической симметрии, несущий 12 фибрилл. Размер вириона 70-80 нм в диаметре. Штамм отнесен к семейству Adenoviridae, роду Adenovirus.

Преобладающий тропизм-эпителиотропный.

Антигенные свойства. В РН нейтрализует специфические сыворотки, полученные на данный штамм и штамм вируса "Ада".

Культуральные свойства. Штамм размножается в первичной и субкультуре клеток почек собак, перевиваемой культуре клеток MDCK, в культуре клеток почек котенка с титром 2 lg ТЦД 50/мл.

Безвредность штамма. При оральном, подкожном и внутримышечном введении не вызывает распространения и заболевания собак.

Серологические свойства. Активен в РН и реакции диффузной преципитации (РДП).

Иммуногенная активность. Обладает антигенной активностью для собак, кроликов, свиней, лошадей, мелкого и крупного рогатого скота.

Стабильность. Основных свойств штамма. Сохраняет титр в течение года, активность в РДП - 2 lg в течение года, антигенная активность сохраняется не менее 1 года на протяжении не менее чем 20 пассажей.

Штамм поддерживают путем заражения перевиваемой культуры клеток MDCK один раз в год.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Для изготовления вакцины "Владивак" против чумы плотоядных используют штамм вируса Virus distemper canis ВГНКИ N"Владимир 18-ДЕП". При этом монослой культуры клеток Vero заражают вирусом в дозе 0,01-0,001 ТЦД/на клетку. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду 199. Культивируют 5-7 суток до проявления характерного ЦПД при 37^oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость во флаконы и добавляют стабилизатор, например сухое обезжиренное молоко.

После розлива вакцины в ампулы или флаконы ее подвергают лиофилизации и контролю на стерильность, антигенную активность и специфичность, безвредность и иммуногенность.

Вакцина "Владивак" содержит вирус чумы в титре 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл.

Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.

Вакцину "Владивак" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.

Вакцину "Владивак" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8- месячном возрасте, а затем один раз в год.

Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию, и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.

Вакцину нельзя применять с лечебной целью.

Вакцина "Владивак" против чумы плотоядных испытана на 1500 собаках разных пород и тхорзофретках.

В результате обследования иммунизированных животных получены данные, свидетельствующие об отсутствии патологических реакций за счет снижения реактогенности, и установлено, что через 21 сутки формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий 100%-ную защиту привитых животных от заражения вирулентным вирусом.

Пример 2. Получение ассоциированной вакцины "Владивак 2" против чумы и парвовирусного энтерита плотоядных осуществляют путем раздельного приготовления культуральной вирусной суспензии штаммов Virus distemper canis "Владимир 18-ДЕП" и Canine parvovirus "Риэль".

Для получения вируссодержащего материала чумы плотоядных используют штамм вируса Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП". При этом монослой культуры клеток Vero заражают вирусом в дозе 0,01-0,001 ТЦД/на клетку. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду 199. Культивируют 5-7 суток до проявления характерного ЦПД при 37^oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.

Для получения вируса парвовирусного энтерита используют культуру клеток K.F. Культуру клеток KF заражают вирусом Canine parvovirus "Риэль" в дозе 32 ГАЕ/мл одновременно с ее посевом в суспензию. В качестве питательных сред используют среду ДМЕМ с добавлением 5%-ной сыворотки плодов коров и культивируют 5-7 суток при 37^oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.

Полученные вируссодержащие материалы объединяют и в смесь добавляют стабилизатор для лиофилизации, например, на основе сорбита и желатозы. Смесь охлаждают, расфасовывают в стерильные флаконы или ампулы и лиофилизируют.

После лиофилизации вакцину подвергают контролю на стерильность, антигенную активность и специфичность, безвредность и иммуногенность.

Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.

Вакцину "Владивак 2" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.

Вакцину "Владивак 2" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8- месячном возрасте, а затем один раз в год.

Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию, и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.

Вакцину нельзя применять с лечебной целью.

Вакцина "Владивак 2" против чумы плотоядных и парвовирусного энтерита испытана на 500 собаках разных пород.

В результате обследования иммунизированных животных установлено, что через 21 сутки формируется напряженный иммунитет к вирусам чумы и парвовирусам плотоядных.

Ассоциированная вакцина "Владивак 2" против чумы и парвовирусного энтерита плотоядных имеет следующий компонентный состав: вирусная суспензия аттенуированного штамма Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл вирусная суспензия аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл стабилизатор - до 1 л.

Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.

Вакцину "Владивак -2" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.

Вакцину "Владивак -2" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8-месячном возрасте, а затем один раз в год.

Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию, и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.

Вакцину нельзя применять с лечебной целью.

Пример 3. Получение ассоциированной вакцины "Владивак 3" против чумы, парвовирусного энтерита, инфекционного гепатита и аденовирусной инфекции плотоядных осуществляют путем раздельного приготовления культуральной вирусной суспензии штаммов Virus distemper canis ВГНКИ N Владимир 18-ДЕП", Canine parvovirus "Риэль" и Hepatitis adenovirus canine "Адель".

Для получения вируссодержащего материала чумы плотоядных используют штамм вируса Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП". При этом монослой культуры клеток Vero заражают вирусом в дозе 0,01-0,001 ТЦД/на клетку. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду 199. Культивируют 5-7 суток до проявления характерного ЦПД при 37^oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.

Для получения вируса парвовирусного энтерита используют культуру клеток KF. Культуру клеток KF заражают вирусом Canine parvovirus "Риэль" в дозе 32 ГАЕ/мл одновременно с ее посевом в суспензию. В качестве питательных сред используют среду ДМЕМ с добавлением 5%-ной сыворотки плодов коров и культивируют 5-7 суток при 37^oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.

Для получения вируса аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита собак используют штамм Hepatitis adenovirus canine "Адель". Монослой культуры клеток MDCK заражают вирусом в дозе 0,01-0,001 ТЦД на клетку. Для культивирования вируса в качестве поддерживающей питательной среды используют среду 199 и культивируют 5-7 суток до появления характерного ЦПД при 37^oC. После чего собирают вируссодержащую жидкость.

Полученные вируссодержащие материалы объединяют и в смесь добавляют стабилизатор для лиофилизации, например, на основе сорбита и желатозы. Смесь охлаждают, расфасовывают в стерильные флаконы или ампулы и лиофилизируют.

Ассоциированная вакцина "Владивак 3" против чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных имеет следующий компонентный состав: вирусная суспензия аттенуированного штамма Virus distemper canis ВГНКИ N "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5-4,0 lg ТЦД 50/мл вирусная суспензия аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл вирусная суспензия аттенуированного штамма Hepatitis adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log₂ ТЦД 50/мл
стабилизатор - до 1 л.

После розлива вакцины в ампулы или флаконы ее подвергают лиофилизации и контролю на стерильность, антигенную активность и специфичность, безвредность и иммуногенность.

Вакцина имеет вид сухой мелкопористой массы желто- или розово-коричневого цвета. Растворителем является дистиллированная вода.

Вакцину "Владивак-3" выпускают в ампулах или флаконах по 1,0-20,0 мл (1-20 доз). Вакцину вводят подкожно, предварительно разводят стерильной дистиллированной водой из расчета 1 мл на 1 дозу.

Вакцину "Владивак-3" применяют для иммунизации клинически здоровых животных с профилактической целью. Щенят прививают начиная с 8-недельного возраста. Собак до 4-месячного возраста рекомендуется вакцинировать дважды с интервалом 3 недели. Дальнейшую иммунизацию проводят в 6-8- месячном возрасте, а затем один раз в год.

Не подлежат вакцинации беременные, а также больные, подозрительные по заболеванию, и истощенные животные. Рекомендуется проведение вакцинации сук не позднее чем за 1 месяц до вязки.

Вакцину нельзя применять с лечебной целью.

Вакцина "Владивак-3" испытана на 2500 собаках разных пород и тхорзофретках.

В результате обследования иммунизированных животных установлено, что вакцина "Владивак-3" индуцирует иммунитет высокой напряженности к вирусу чумы, адено- и парвовирусам плотоядных.

Формула изобретения

1. Штамм вируса Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП", используемый для изготовления вакцин против чумы плотоядных.

2. Вакцина против чумы плотоядных, содержащая аттенуированный штамм вируса чумы плотоядных и стабилизатор, отличающаяся тем, что из аттенуированных вирусов она содержит штамм вируса Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5 - 4,0 lg ТЦД 50/мл.

3. Вакцина против чумы и парвовирусного энтерита плотоядных, содержащая вирусные суспензии штаммов вируса чумы и энтерита и стабилизатор, отличающаяся тем, что из вирусов чумы она содержит вирусную суспензию аттенуированного штамма Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5 - 4,0 lg ТЦД 50/мл, а из вирусов энтерита - вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл.

4. Вакцина против чумы, парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита плотоядных, содержащая вирусные суспензии штаммов вируса чумы, энтерита, аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита и стабилизатор, отличающаяся тем, что из вирусов чумы она содержит вирусную суспензию аттенуированного штамма Virus distemper canis ВГНКИ "Владимир 18-ДЕП" с титром инфекционной активности 2,5 - 4,0 lg ТЦД 50/мл, из вирусов энтерита - вирусную суспензию аттенуированного штамма Canine parvovirus "Риэль" с титром инфекционной активности не менее 5 log₂ ТЦД 50/мл, а из вирусов аденовирусной инфекции и инфекционного гепатита - вирусную суспензию штамма Hepatitus adenovirus canine "Адель" с титром инфекционной активности не менее 2 log₂ ТЦД 50/мл.

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 13.05.2002

Номер и год публикации бюллетеня: 31-2003

Извещение опубликовано: 10.11.2003        

---