Водный раствор для криоконсервирования тромбоцитов

 

Изобретение относится к медицине, в частности к консервированию клеток крови. Цель изобретения - снижение гибели тромбоцитов и увеличение их количества в фуекционально полиоценном состоянии, уменьшение токсичности криозащитного раствора. Посталенная цель достигается тем, что раствор для криоконсервирования тромбоцитов содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, лимонную кислоту и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующем соотношении компонентов, мас.%: гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 5,0 - 15,0; лимонная кислота 0,9 - 1,3; динатриевая соль диаминтетрауксусной кислоты 0,1 - 0,1; вода для инъекций - остальное. Предложенный раствор обеспечивает повышение выхода целевого продукта до 93%, повышает выход жизнеспособных и функционально полноценных клеток до 70%, снижает в 3 раза токсичность криозащитного раствора. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к консервированию клеток крови. Цель изобретения - сохранение тромбоцитов в функционально полноценном состоянии после замораживания до -196^оС и уменьшение токсичности. Данная цель достигается тем, что раствор для криоконсервирования тромбоцитов содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, лимонную кислоту и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующем соотношении компонентов, мас.%: Гексаметиленбистетра- оксиэтилмочевина 5,0-15,0 Лимонная кислота 0,9-1,3 Динатриевая соль эти- лендиаминтетрауксус- ной кислоты 0,1-0,1 Вода для инъекций Остальное Оптимальная рецептура ограждающего раствора для замораживания тромбоцитов следующая, г: гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 10; лимонная кислота 1,1; ЭДТА Na₂ 0,1; вода до 100 мл. П р и м е р 1. К 10 мл тромбоцитарной взвеси добавляют по стенке 10 мл раствора для криоконсервирования при постоянном перемешивании (соотношение 1: 1), эквилибрируют 20 мин с этим раствором при температуре +4^оС разливают по 10 мл в металлические контейнеры из нержавеющей стали объемом 12 мл, замораживают по двухэтапной программе на аппарате для программного замораживания УОП 000.000: на первом этапе охлаждают со скоростью 1^оС/мин до -7^оС, на втором 20^oC/мин до -140оС с последующим переносом контейнеров в жидкий азот. Содержание форменных элементов в 1 мкл тромбоцитовзвеси, подготовленной к замораживанию, составляло 900˙ 10³. Размораживание тромбоцитной взвеси через 17 дней после замораживания до -196^оС производят в 20-литровой водяной ванне при +39^оС в течение 20 с. Число тромбоцитов в 1 мкл равно 800˙ 10³. Их адгезивность составила 23,7%, агрегация с АДФ на 2 мин 7,14%, на 10 мин 7,14%. Влияние криоконсервирования на морфологические особенности тромбоцитов изучают с помощью световой и электронной микроскопии, а их функцию исследованием адгезивности и агрегации. При оценке ультраструктуры проведен анализ содержания альфа-гранул и митохондрий на срез тромбоцита и величины площади среза. Полученные данные сравнивают с аналогичными показателями интактных тромбоцитов, Как видно из табл. 1, средняя площадь среза тромбоцитов, хранившихся в жидком азоте с использованием растворов 1, 2, 3, значимо не отличается от средней площади интактных тромбоцитов. Содержание альфа-гранул на срез оказалось значимо сниженным, однако при использовании раствора 2 это снижение менее выражено. В табл. 2 представлены преимущества предложенного раствора (2), содержащего криопротектор - гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину в 5%-ной конечной концентрации по сравнению с прототипом (1, 2, 3), содержащим криофилактик - диметилацетамид. Как видно из представленных данных, гибель тромбоцитов, криоконсервированных с предложенным раствором, меньше чем при замораживании с аналогом, а количество форменных элементов в функционально полноценном состоянии больше, так как предложенный раствор имеет в 3 раза меньшую токсичность. Он так же, как и прототип, не требует отмывания криопротектора после размораживания биообъекта. Сохранность функциональных свойств тромбоцитов представлена в табл. 3. Как видно из табл. 3, предлагаемый раствор обладает таким же криозащитным действием, что и прототип, но токсичность заявляемого раствора по сравнению с прототипом в 3 раза ниже.

Формула изобретения

ВОДНЫЙ РАСТВОР ДЛЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ ТРОМБОЦИТОВ, отличающийся тем, что, с целью сохранения тромбоцитов в функционально полноценном состоянии после замораживания до -196^oС, а также уменьшения токсичности раствора, он содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, лимонную кислоту и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующем соотношении компонентов, мас.%: Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 5,0 - 15,0 Лимонная кислота 0,9 - 1,3 Динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 0,1 - 0,1 Вода для инъекций Остальное

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 02.02.2007

Извещение опубликовано: 10.01.2008        БИ: 01/2008

---