Способ выделения вируса гепатита а в культуре клеток

 

СООЗ СОВЕТСИИХ

РОЦИАлистичесних

РЕСПУБЛИН

А1

9ВО (.51) 5

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И A BTOPCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОсу6АРст8енный нОМитет

ЙО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТИЩ7ИЩ4

ПРИ ГННт СССР

I (46) 15.05.91. Вюл. Р 18 (21) 4354514/14 (22) 04.0I,Çß (71) Белорусский научно-исследователь.кий институт эпидемиологии и микробиологии (72) ВвAý.I- кету В.эГрГудков, П,Г,Рытик к В,Ф,Еремин (53) 615ô475(088.8) (56) Вопросы вирусологии, 1987, т. 32, 1 3, с, 307-312.

Кусов 10.Ю., Флеер Г И,, Заводова Т,И, Накопление инфекционного вируса и вирусного антигена при размножении вируса гепатита А в культуре клеток почки эмбриона макаки резус (Р ЩК-4). (54) СПОСОБ В1 1ДЕЛЕН1И ВИРУСА ГЕ11АТИТА A B КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК (57) Изобреrevue относится к медициИзобретение относится к вирусологии, в частности к лабораторной диагностике вирусного гепатита А, Цель изобретения — повышение вы"; хода целевого продукта и ускорение способа, Способ выполняется следующим образом, Монослой культуры клеток инфицируют вирусом гепатита А (ВГА) и инкубируют, затем из монослоя получают фракцию содержащих ВГА, клеток путем обработки его раствором Версена до появления в монослое многочисленных точечных дефектов диаметром не более 0,5 мм и полученную фрак цию клеток используют в качестве концентрата вируса, не, s частности к вирусологии, н может быть использовано в лабораторной диагностике вирусного гепа1ита А, Цель,изобретения — повышение выхода целевого продукта, ускорение способа, Для осуществления способа монослой культуры клеток инфицируют вирусом гепатита А и инкубируют, затем иэ монослоя получают фракцию содержащих вирус клеток путем обработки его раствором Версена до появления в монослое многочисленных точечных дефектов диаметром не более 0,5 мм и полученную фр; кцию клеток используют в качестве коппентрата вируса, Способ позволяет ио зсить концентрацию вируса по сравнению с концентрацией вируса в общей массе клеток в 50-

100 раэ, I1 р и м е р, Клетки FRhK-4 выращивали в роллерах объемом 500 мл на среде Игля с добавлением IOX сыворотки крови плодов коров. После формирования монослоя клетки инфицировали ВГА (штамм НАБ-I5), эатем добавляли при 37"С. Через 7 сут культуральную середу сливали, наливали подогретый 0,02Х-ный раствор Версена, Обработку вели до появления в монослое многочисленных точечных дефектов диаметром не более 0.5 мм, обычно в течение 3-5 мин, затем флакон слегка встряхивали сливалч раствор Версена со снятой фракцией клеток, Снятая фракция клеток состав« ляла-примерно I/50 — 1/I00 часть мо157 SI9

/ 1

Ф !

Составитель Р Гумеиюк

Техред М.Ходанич - Корректор С Чернй

Р(здактор F.,Õîðèíà

Заказ 2444 Тираж 419 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета йо иЗобретейияи и открытиям прн ГКНТ. СССР

113035, Москва, N-35, РаушскЩ наб,, д. 4/5

«» »» «» « »»»» »«»

Производственно-издательский комбинат: "Йатeнт"> г Укгород+ ул. Гагарина, 10!

3 иослоя, Клйтки фракций осаждали центрйфугнрованией прй 3000 об/мин в,течение 20 мий Осадок,клетИс су4пендйровали, в обьеме 0 2 мл фосфатйоi.о буфера; Затей клетки разрущалй

: путем пятнкратногб эаморажнванйя

- оттаиванйя, ПолУченную внрусосодер .вещую жйдкос!ь йс«пользовали .в ка

Ъ .,ч«естве концентрата ИГА, Концентрация

Йыделенного из. него вируса превьщ(ает концентрацию .в:общей массе клеток монослдя в 50-!00 риаз< Исследования методом иммуноферментного анализа «,(ИФА) позволяй обнар лйить ВГЛ в . йробе 1итр его составлял !:70

Ио факцни оставшихся в монослое клеток и йефракцйонированиом моно слое вирус методом ИФА не обнаружен.

Способ позволгет повысить зф@ек" тивйость выделений вируса гепатита А в культуре клеток, йоскольку койцентрацйй выделенного вйр1!ба превьппает, концентрацию вируса в общей массе ! ц1еток монослоя в 50-!00 раз .

Формула изобретений

Способ выделения вируса гепатита

1, А в культура клеток, включающий инфицирование клеточного монослвя вифусом, инкубацию, снйтие Клегоя, Концентрацию и индикацйю вируса, о тл и ч а .ю шийся тем,.что, с це»

1 лью повыщения выхода. целевого про дукта и ускорения способа концентрацию вируса осуществляют из суспейзии клеток, снятых с точечных дефектов монослоя, I