Способ определения индивидуальной чувствительности к иммуномодулятору

 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовно для подбора иммуномодуляторов в клинической практике. Цель изобретения - повышение точности способа з счет индивидуального подбора иммуномодуляторов неспецифической резистентное™ организма. Эффективность препарата предварительно оценивают по степени усиления реакции антителозависимой цитотоксичности нейтрофилов периферической крови до и после инкубации ин еитро с данным иммуномодулятором. Способ может быть использован в клинике для профилактики и лечения различных инфекционных осложнений.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (н)ю 6 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1о уу

О

О

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4496076/14 (22) 21.10.88 (46) 23,06.91, Бюл, N. 23 (71) Киевский государственный институт усовершенствования врачей (72) С.А. Гусева, Т,П.Сиваченко и А.А.Федько (53) 615,375 (088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 1225577, кл, А 61 В 45/05, 1986. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ИММУНОМОДУЛЯТОРУ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть исИзобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии.

Цель изобретения — повышение точности способа за счет индивидуального подбора иммуномодуляторов неспецифической резистентности организма, Способ осуществляется следующим образом, Подбор иммуномодулятора для конкретного больного состоит из трех этапов: подготовки клеток-эффекторов (нейтрофилы крови) и клеток-мишеней (эритроциты кур); инкубации взвеси нейтрофилов с набором иммуностимуляторов; определение спонтанной и стимулированной цитотоксичности нейтрофилов для каждого препарата и выбор препарата по наибольшему показателю индекса цитотоксичности нейтрофила (И ЦН).

„„Я „„1658094 А1 пользовно для подбора иммуномодуляторов в клинической практике. Цель изобретения — повышение точности способа зг счет индивидуального подбора иммуномодуляторов неспецифической резистентности организма. Эффективность препарата предварительно оценивают по степени усиления реакции антителозависимой цитотоксичности нейтрофилов периферической крови до и после инкубации ин еитро с данным иммуномодулятором. Способ может быть использован в клинике для профилактики и лечения различных инфекционных осложнений.

Подготовка клеток-эффекторов и клеток-мишеней. Клетки-эффекторы (нейтрофилы) выделяют из периферической крови центрифугированием (3500 об!мин) в течение 30 мин в градиенте плотности верографина (1,119 г/см ). Очищенную взвесь нейтрофилов получают, удаляя прилипающие клетки инкубацией в чашках Петри в течение 1 ч при 37ОС, Клетки для исследований доводят в среде 199 до концентрации

2,0 Х10 /мл.

Клетки-мишени (эритроциты кур) (ЭК) трижды отмывают при центрифугировании (1000 об/мин в течение 10 мин), используют в концентрации 10 клеток/мл в питательной среде следующего состава: среда 199 с добавлением до 10 эмбриональной телячьей сыворотки. 300 мкг/мл а -глутамина и 80 мкг/мл гентамицина.

1658094

Цитотоксический тест ставят в пластиковых 96-луночных планшетах. В опытные лунки добавляют по 0,1 мл гипериммунной к эритроцитам кур сыворотки кролика в разведении 1:100, 0,1 мл взвеси клеток-эффекторов (нейтрофилы больногo) и 0,1 мл клеток-мишеней (ЭЗ). Стимулированную антителозависимую цитотоксичность (АЗЦ) определяют по то же методике, но в качестве клеток-эффекторов берут нейтрофилы после преинкубации с различными препаратами, Планшеты мягко центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин для создания плотного контакта между клетками-эффектора и клетками-мишенями, Смесь инкубируют при

37 С в течение 4 ч в присутствии 5 С02, После инкубации центрифугируют и 0,2 мл супернатанта анализируют по выделению

Cr с отсчетом эмиссии супернатанта, На любом радиометре с колодцевым счетчиком радиоактивности или на гамма-счетчиках отечественного (гамма-12) и зарубежного (Jamma, BHP) производства, Процент общей радиоактивности. выделенной из клеток-мишеней в супернатанте, берут как степень лиэиса. Процент специфического лизиса высчитывают по формуле

ЦИ = Х100 где ЦИ вЂ” цитотоксический индекс или процент специфического лизиса клеток-мишеней, А — радиоактивность супернатанта иэ опытного образца;

 — спонтанное освобождение изотопа в супернатант;

С вЂ” максимальный выход изотопа иэ клеток-мишеней, который получают добавлением в соответствующие лунки неполного детергента (1% Тритон Х-100 в 1 í. 4CI).

Для иммунологической реакции используют нейтрофилы в концентрации 2,0 10 /мл, Для оценки степени стимуляции реакции АЗЦ применяют индекс стимуляции нейтрофилов (ИСН), который вычисляют по формуле

ИСН =Х

В где  — индекс цитотоксичности после преинкубации нейтрофилов с раствором иммуномодуляторов:

А — индекс цитотоксичности в спонтанном АЗЦ-тесте, Пример. Больная Б.34 лет, с диагнозом: острый лейкоз, миеломонобластный вариант. Двусторонняя очаговая пневмония. Состояние больной при поступлении тяжелое. Жалобы на повышение температуры-тела, кашель с выделением слизистой

25 ние специфической химиотерапии, 30 направленной на эрадикацию лейкозного

55 мокроты, резкую слабость. Данные рентгенологических исследований подтвердили диагноз двусторонней пневмонии.

Картина крови:(28.07.87): эритроциты

5,0 xl0 /л, гемоглобин 108 г/л, цветовой

12 показатель (ц,п.) 1,00; тромбоциты (тр.) 110,0 х 10 /л; лейкоциты (л,) 1,4 х 10 /л.

Лейкоцитарная формула: бласты (бл.) 8%, палочкоядерные нейтрофилы (и/я) 4%, сегментоядерные нейтрофилы (с.) 12, лимфоциты (лимф.) 76%, СОЭ 42 мм/ч.

Иммунологические показатели больной

Б. Т-лимф. 10%, В-лимфоциты 12%; количество нейтрофилов, экспрессирующих рецепторы к Fc = фрагменту, IgG 20%, к

Сз е-компоненту комплемента 11%; опсоническая активность сыворотки (ОАС) 0,08 усл.ед; количество фагоцитирующих нейтрофилов (ФАН) 10%; индекс фагоцитоэа (ИФ) 2,1; завершенность фагоцитоза (ЗФ%

- 2,0); количество формаэан-положительных нейтрофилов (ФПН) — 1%.

Иэ-эа выраженной лейкопении (1,4 х 109)л, относительной (12%) и абсолютной (0,168 х 10 ЗЛ) нейтропении, резкого

9 угнетения клеточного и гуморального звена иммунитета, а также факторов неспецифической резистентности организма, проведе(опухолево-перерожденного) клона клеток, в данном случае не представлялось возможным, Проведен подбор иммуномодулятора по предлагаемому способу: ИЦН в спонтанном тесте 12,6, ИПпирогенал 21,5% ИСН 1,706

ИЦэимозан 22,6 ИСН 1,793

ИЦпродигиозан 30,2 ИСН 2,398

ИПпропер-мил 22,3 ИСН 1,769

Таким образом, наибольшим стимулирующим эффектом по отношению к нейтрофилам больной обладает продигиозан, который был назначен по общепринятой схеме; 1-й день — 50 мкг/(1,0 мл препарата), затем по 100 мг через 3 дня. На курс лечения

450 мкг препарата, Наряду с этим проводилась антибиотическая и симптоматическая терапия, Через неделю состояние больной значительно улучшилось, нормализовалась температура, улучшились показатели крови.

Данные лабораторных и иммунологических исследований больной после проведенного лечения;

Гемограмма: эр. 3,6 х 10 /л; Нв — 116 г/л, ц.п, 1,0; тромб. 108,0 х 10 /л; л.4,9 х 10 /л.

Лейкоцитарная формула: и 4%; с 37,; э 2%, мон. 10%; лимф. 47 ; СОЭ 7 мм/ч; T1658094

Составитель P. Гуменюк

Редактор А, Козориз Техред М.Моргентал Корректор Н. Король

Заказ 1711 Тираж 418 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 лимф.19)(: В-лимф.17; 0АС 1,2; ФАН 30 ;

ИФ 9,2; ЭФ 1,1; ФПН 5 .

Таким образом, после противовоспалительной терапии с применением индивидуально подобранного стимулятора неспецифической резистентности организма у больной нормализовалось число лейкоцитов, значительно (в 3 раза) повысилось содержание сегменто-ядерных нейтрофилов, активизировалась их фагоцитарная функция, в периферической крови появились моноциты (10%), Больному затем был назначен и закончен в полном объеме курс интенсивной полихимиотерапии.

Способ эа счет повышения точности определения иммуностимулятора позволяет значительно сократить сроки лечения больных, в том числе больных гемобластозами, с наличием инфекционных осложнений. Так например, у больных острым миелобластным лейкозом с 24,5 до 18,2 дн, при хроническом лимфобластном лейкозе с 28 3 до 24,5 дн.

У больных, получавших иммуностимуляторы, подобранных предлагаемым способом.

5 с профилактической целью инфекционные осложнения возникали значительно реже, Формула изобретения

Способ определения индивидуальной чувствительности к иммуномодулятору, вклю10 чающий выделение клеток крови, инкубирование их с иммуномодулятором, проведение и оценку результатов иммунологической реакции,отлича ющийся тем,что,с целью повышения точности способа, из крови выде15 ляют нейтрофилы, осуществляют реакцию антителозависимой цитотоксичности, опосредованной нейтрофилами, и при усилении цитотоксичности по сравнению с контролем без препарата определяют

20 индивидуальную чувствительность к препарату.