Способ выявления днк в слизистой шейки матки на цитологическом препарате

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии. Цель изобретения - выявление более полно ДНК в клетках эпителия . Препараты до окрашивания последовательно обрабатывают в среде, содержащей 2 М NaCl и ЭДТА в течение 5-6 мин, затем в 0,002 н. HCI в течение 10-12 мин и 0,88 М сахарозе в течение 10-15 мин, а гидролиз проводят в 5 н. HCI в течение 4-5 мин при комнатной температуре. Способ позволяет полностью выявить содержание ДНК в клетке, что позволяет использовать этот тест в качестве диагностического при решении вопроса о предраке или раке шейки матки.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТ!1ОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) опислни изоБркткния /, К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4682861/14 (22) 24.04.89 (46) 23.12,92. Бюл. ¹ 47 (71) Воронежский государственный медицинский институт им. Н,Н.Бурденко и Всесоюзный онкологический научный центр

АМН СССР (72) Э.Г.Быков, В.И.Бычков, В.П.Козаченко и

Г.А.Орлов (56) Чиркова А,В. Значение люминесцентной и фазовоконтрастной микроскопии в цитологической диагностике рака шейки матки. Акушерство и гинекология, 1966, ¹

10, с. 12-15.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, Цель изобретения — более полное выявление ДНК в клетке.

Способ осуществляется следующим образом.

Из слизистой шейки. матки готовят микропрепарат изолированных клеток (иэ клеточной взвеси на физиологическом растворе), высушивают при комнатной температуре и помещают на 5 мин в раствор 2

М NaCI и 10 мМ ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) для экстракции гистоновых белков из ядерного матрикса с последующим помещением мазка на 10 — 12 мин в 0,02 н. раствор HCI. где завершается указанный процесс. Таким образом, происходит разрушение связей дезоксирибонуклеиновой кислоты с белковыми

5U 1664011 Al (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК В СЛИЗИСТОЙ ШЕЙКИ МАТКИ НА ЦИТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии. Цель изобретения— выявление более полно ДНК в клетках эпителия. Препараты до окрашивания последовательно обрабатывают . в среде, содержащей 2 М NaCI и ЭДТА в течение 5 — 6 мин, затем в 0,002 н. HCI в течение 10 — 12 мин и 0,88 М сахарозе в течение 10-15 мин, а гидролиз проводят в 5 í. KCI в течение 4 — 5 мин при комнатной температуре. Способ позволяет полностью выявить содержание

ДНК в клетке, что позволяет испольэовать этот тест в качестве диагностического при решении вопроса о предраке или раке шейки матки. комплексами, s значительной мере обуслов- ъ ливающими ее пространственную структу- g ру. Далее материал помещают в 0.88 M раствор сахароэы на 1,0 — 15 мин для гомогенизации ДНК с последующей фиксацией в изопропиловом спирте в течение 10 мин. (Э

Освобождение фосфатных радикалов дезоксирибонуклеиновой кислоты, которые впоследствии связываются с флюорохромом; производят помещением препарата на 4 — 5 мин в 5 н. раствор HCI при комнатной температуре. Затем препараты промывают в 3 емкостях с дистиллированной водой, готовят мазок и окрашивают в течение 5 мин

0,2 ф,-ным раствором ауромина G, содержащим 1 г метабисульфита натрия (на 100 мл раствора).

Процесс обработки микропрепарата завершают споласкиванием в 3 сменах дис1664011

Составитель Л.Стебаева, Техред M.Морге нтал Корректор И.Муска

Редактор С.Рекова

Заказ 568 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 тиллированной воды. Исследование препарата осуществляют на люминесцентной установке "Биолам-УИ" со спектрофотометрической насадкой СФН10, блоком АЦП и ЭВМ "Электроника-60" с . программным обеспечением. Определение

ДНК проводят, последовательно измеряя интенсивность люминесценции клеточных ядер в сине-фиолетовой области (А 420-500 нМ) с использованием иммерсионной системы микроскопа (увеличение Х 1400) и нефлюоресцирующего масла .(пр 1,516) до получения репрезентативной выборки в каждом конкретном случае с последующим получением на ЭВМ ряда статических характеристик и гистограмм плоидности ДН К.

Пример. Больная 36 лет. Клинический диагноз; подозрение на рак шейки матки.

Взят соскоб с шейки матки. Предлагаемым методом приготовлены мазки. Мазки исследованы на содержание ДНК в клетках эпителия. По содержанию ДНК в клетках определена умеренная дисплазия. Проведение повторного гистологического исследования подтвердило этот диагноз.

Способ позволяет более полно выявить

ДНК в клетках, что дает возможность уточнить диагноз заболеваний, связанных с гиперплазией эпителия шейки матки.

Формула изобретения

Способ выявления ДНК в слизистой

10 шейки матки на цитологическом препарате путем инкубации с ауромином О, гидролиза в соляной кислоте и определения ДНК по интенсивности люминесценции, о т л и ч а юшийся тем, что. с целью полного выявления

15 ДНК, препараты до инкубации обрабатывают последовательно в среде, содержащей 2

М NaCI и ЭДТА в течение 5-6 мин, затем в

0,02 н. HCI в течение 10 — 12 мин и 0,88 М сахарозе в течение 10-15 мин, а гидролиз

20 проводят в 5 н. HCI в течение 4 — 5 мин при комнатной температуре.